【摘要】：目的探究單羧酸轉運蛋白1(MCT1)在增強乳腺癌細胞對3-溴丙酮酸(3-Br PA)敏感性中的作用,為乳腺癌治療提供新思路。方法 MTT法檢測3-Br PA對乳腺癌細胞的增殖抑制作用,溴化丙啶單染法流式細胞術檢測細胞凋亡,ELISA試劑盒檢測細胞內己糖激酶Ⅱ、乳酸脫氫酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot檢測MCT1蛋白的表達,瞬時轉染c DNA上調MCT1的表達后,檢測3-Br PA對MDA-MB-231細胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影響。結果 3-Br PA對MDA-MB-231細胞增殖和凋亡的影響不明顯,200μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率僅為8.72%和7.8%;但200μmol/L 3-Br PA作用MCF-7細胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率為84.6%和82.3%。MDA-MB-231細胞的MCT1過表達后,200μmol/L 3-Br PA對細胞的增殖抑制率為72.44%,明顯高于對照組(P0.05);25、50、100、200μmol/L 3-Br PA作用細胞6 h后,細胞內三磷酸腺苷水平和對照組相比分別為96.98%、88.44%、43.3%、27.56%。結論 MCT1能增強乳腺癌細胞對3-Br PA的敏感性,其機制可能是將3-Br PA轉運到細胞內,從而抑制細胞糖酵解來發(fā)揮抗腫瘤作用。
【圖文】：

學差異（P<0.05，圖1A）。在倒置顯微鏡同一視野下觀察不同濃度3-BrPA處理后的細胞形態(tài)，結果顯示：隨著藥物濃度的增加，MDA-MB-231細胞的形態(tài)和密度未見明顯改變；而MCF-7細胞的形態(tài)和密度有明顯改變（圖1B）。20μmMDA-MB-231MCF-7025501002003-BrPA(μmol/L)B025501002003-BrPA(μmol/L)025501002003-BrPA(μmol/L)Clelivbailtiy%()120100806040200MDA-MB-23124h48h72h24h48h72hMCF-7Clelivbailtiy%()120100806040200******A圖13-BrPA對MDA-MB-231和MCF-7細胞的增殖抑制作用Fig.1Inhibitoryeffectof3-BrPAonMDA-MB-231andMCF-7cells.A:Cellviability;B:Morphologicalchangesofthecells(*P<0.05vscontrol).2.23-BrPA誘導人乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7凋亡的作用流式細胞術檢測結果顯示，3-BrPA對MDA-MB-231細胞的凋亡未有明顯影響，200μmol/L的3-BrPA作用于細胞后，凋亡率僅為7.8%，3-BrPA能顯著誘導MCF-7細胞的凋亡，200μmol/L的3-BrPA作用于細胞后，其凋亡率為82.3%（圖2）。2.33-BrPA對人乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7的糖酵解酶活性的影響ELISA結果顯示，與對照組比，隨著藥物濃度的增加，，MDA-MB-231細胞內己糖激酶Ⅱ和乳酸脫氫酶的活性未出現(xiàn)顯著下降，差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）；而MCF-7細胞內的己糖激酶Ⅱ和乳酸脫氫酶活性在100、200μmol/L時均有明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05，圖3）。2.43-BrPA對人乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7中乳酸和ATP水平的影響ELISA試劑盒檢測表明，MDA-MB-231細胞內乳酸和ATP水平隨著3-BrPA濃度的增加并未出現(xiàn)明顯降低，與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；而MCF-7細胞?

通過Westernblot法檢測發(fā)現(xiàn)，MCT1在MDA-MB-231細胞中幾乎不表達，而在MCF-7細胞中表達較高（圖5A）。為了證實MCT1對3-BrPA敏感性的影響，將MCT1cDNA轉染到MDA-MB-231細胞中（圖5B），并檢測3-BrPA對過表達MCT1的MDA-MB-231細胞的增殖抑制作用和ATP水平的影響。結果表明（圖5C、D），3-BrPA對于過表達MCT1的MDA-MB-231細胞有明顯的增殖抑制作用，同時也能顯著降低細胞內的ATP025501002003-BrPA(μmol/L)MDA-MB-231MCF-7圖23-BrPA對MDA-MB-231和MCF-7細胞凋亡的影響Fig.2Effectof3-BrPAonapoptosisofMDA-MB-231andMCF-7cells.120100806040200HexokinaseI(%)MDA-MB-231MCF-7025501002003-BrPA(μmol/L)025501002003-BrPA(μmol/L)*****MDA-MB-231MCF-7120100806040200Lactatedehydrogenase(%)圖33-BrPA對MDA-MB-231和MCF-7細胞的糖酵解酶活性的影響Fig.3Effectof3-BrPAonglycolysisenzymeactivityinMDA-MB-231andMCF-7cells.A:HexokinaseⅡactivity;B:Lactatedehydrogenaseactivity(*P<0.05vscontrolgroup).AB120100806040200Contentoflacticacid(%)MDA-MB-231MCF-7025501002003-BrPA(μmol/L)025501002003-BrPA(μmol/L)****MDA-MB-231MCF-7120100806040200ATPlevel(%)AB圖43-BrPA影響MDA-MB-231和MCF-7細胞的乳酸和ATP含量Fig.43-BrPAaffectstheleveloflacticacid(A)andATP(B)inMDA-MB-231andMCF-7cells.*P<0.05vscontrol.http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2017,37(5):588-593·591·
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學院藥學院;蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院消化科;
【基金】：國家自然科學基金(81372899,81603155) 安徽省教育廳重大項目(KJ2016SD39) 安徽省國際合作交流項目(1503062024) 安徽省高校省級自然科學研究項目(KJ2015A177) 蚌埠醫(yī)學院研究生科研創(chuàng)新計劃項目(Byycxz1621)~~
【分類號】：R737.9

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本文編號：2532384