【摘要】：旨在構(gòu)建s GPC3/GPC3基因重組真核表達(dá)載體,研究過表達(dá)s GPC3/GPC3對(duì)HCCLM3人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。采用PCR法獲得編碼s GPC3/GPC3的基因片段并克隆到真核表達(dá)載體pc DNA3.0-GFP中,經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HCCLM3肝癌細(xì)胞,RT-PCR和Western blot檢測(cè)GPC3的表達(dá)情況;CCK-8法、克隆平板形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)s GPC3/GPC3對(duì)HCCLM3生物學(xué)行為的影響。酶切分析、測(cè)序鑒定結(jié)果表明s GPC3/GPC3基因重組真核表達(dá)載體構(gòu)建成功;RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示s GPC3/GPC3在HCCLM3中成功過表達(dá)。與正常組和轉(zhuǎn)染空載體相比,過表達(dá)s GPC3/GPC3后,HCCLM3的增殖能力和克隆形成能力均受到明顯抑制(P0.05),遷移率顯著下降,細(xì)胞周期阻滯于G1期,細(xì)胞凋亡率增加。同時(shí),過表達(dá)s GPC3對(duì)細(xì)胞的影響顯著優(yōu)于GPC3(P0.05)。s GPC3/GPC3表達(dá)上調(diào)抑制高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞HCCLM3生長(zhǎng)和遷移,促進(jìn)細(xì)胞凋亡以及周期再分布,在高轉(zhuǎn)移性肝癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。
[Abstract]:The aim of this study was to construct a recombinant eukaryotic expression vector of s GPC3/GPC3 gene and to study the effect of overexpression of s GPC3/GPC3 on the biological behavior of HCCLM3 human highly metastatic hepatocellular carcinoma cells. The gene fragment encoding s GPC3/GPC3 was obtained by PCR and cloned into eukaryotic expression vector pc DNA3.0-GFP. The expression of GPC3 was detected by RT-PCR and Western blot, and the effect of s GPC3/GPC3 on the biological behavior of HCCLM3 was detected by CCK- 8, clone plate formation test, cell scratch test and flow cytometry, respectively. The results of restriction enzyme digestion and sequencing showed that the recombinant eukaryotic expression vector of s GPC3/GPC3 gene was successfully constructed, and the results of RT-PCR and Western blot showed that s GPC3/GPC3 was successfully overexpressed in HCCLM3. Compared with the normal group and the empty vector, the proliferation and clone formation ability of HCCLM3 were significantly inhibited after overexpression of s GPC3/GPC3 (P 0.05), the mobility decreased significantly, the cell cycle was blocked in G 1 phase, and the apoptosis rate increased. At the same time, the effect of overexpression of s GPC3 on cells was significantly better than that of GPC3 (P 0.05). S GPC3/GPC3 expression up-regulated inhibition of HCCLM3 growth and migration, promoting apoptosis and cycle redistribution, which played an important role in the occurrence and development of high metastasis HCC.
【作者單位】： 廣東藥科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院廣東省生物活性藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81502520) 廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2016A030310299) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目(A2016091)
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2507499