發(fā)布時間：2019-05-06 07:19

【摘要】：急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)是不同的致癌因子之間復(fù)雜的相互作用產(chǎn)生的一類遺傳異質(zhì)性疾病,基因組學(xué)的研究不但使人們發(fā)現(xiàn)了AML的分子發(fā)病機(jī)制,并得以發(fā)現(xiàn)各亞型之間巨大的多樣性。近年來,NCCN指南加入了幾個常見的基因突變來指導(dǎo)預(yù)后(NPM1、CEBPA、FLT3-ITD、TP53、KIT),但仍不足以將占比60%以上的中危核型AML(Intermediate-risk AML,IR-AML)很好地分層,尚需納入新的基因及突變的組合來進(jìn)一步分層。此外,突變位點往往不止一個,多種基因突變亦常伴隨發(fā)生,單一突變及位點已不足以指導(dǎo)臨床預(yù)后�；诖�,傳統(tǒng)的一代測序已無法滿足需求,亟需新的技術(shù)手段來深入AML分子機(jī)制的研究及協(xié)助多突變聯(lián)合分析用于臨床。本研究我們借助二代測序(Next Generation Sequencing,NGS)平臺在220例AML中,研究了惡性血液病相關(guān)的111個基因的突變情況,并結(jié)合臨床分析探討對表型及預(yù)后分層的指導(dǎo)意義。首先,通過測序數(shù)據(jù)分析過濾及驗證,得到中國人特有的AML突變頻率及突變譜。然后,從兩個方面對AML發(fā)生的分子機(jī)制及突變與臨床的關(guān)系進(jìn)行研究。一方面通過單突變分析不同突變之間,突變與臨床表型、療效及預(yù)后的關(guān)系,證實了不同生物學(xué)功能突變之間的協(xié)作和互斥模式,基因型和臨床表型(年齡、核型、初診白細(xì)胞計數(shù)、免疫表型等)之間的內(nèi)在既定關(guān)系,以及突變對臨床療效(緩解率和生存期)的影響。另一方面通過整合多突變分析,證實NPM1、FLT3-ITD和DNMT3A突變?nèi)咄ǔ９舶l(fā)生,且與高齡、初診高白細(xì)胞數(shù)、髓單核細(xì)胞形態(tài)、化療未緩解及不良預(yù)后相關(guān);而NPM1、IDH1/2突變同時伴FLT3-ITD陰性的AML則與較低的初診白細(xì)胞數(shù)和特定的免疫表型相關(guān),并對化療敏感。此外,根據(jù)3種不同的突變組合:NPM1或bi-CEBPA突變同時不伴有其他突變,FLT3-ITD、DNMT3A、ASXL1、TET2、TP53或PFH6突變同時不伴有CEBPA突變,及其他基因型,將中危AML進(jìn)一步分為低、中、高危三個不同的預(yù)后組,使真正的中危AML患者減少三分之一。在AML的分子發(fā)病機(jī)制和生物學(xué)特征方面,本研究進(jìn)行了深入分析,并證實可通過基于NGS的多種突變的不同組合將中危AML進(jìn)一步預(yù)后分層,為將來制定新的危險度分層系統(tǒng)及實現(xiàn)AML的個體化精準(zhǔn)治療奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Acute myeloid leukemia (Acute Myeloid Leukemia,AML) is a class of heterogeneous diseases caused by complex interactions between different carcinogenic factors. Genomics studies have not only led to the discovery of the molecular pathogenesis of AML. Great diversity among subtypes was found. In recent years, several common gene mutations have been added to the NCCN guidelines to guide prognosis (NPM1,CEBPA,FLT3-ITD,TP53,KIT), but still not enough to delaminate the moderately endangered karyotype AML (Intermediate-risk AML,IR-AML), which accounts for more than 60% of the total. A combination of new genes and mutations needs to be incorporated to further delaminate. In addition, more than one mutation site is often associated with multiple gene mutations, and a single mutation or locus is no longer sufficient to guide the clinical prognosis. Therefore, the traditional generation sequencing can no longer meet the demand. It is urgent for new technical means to deepen the study of molecular mechanism of AML and to assist in multi-mutation joint analysis for clinical application. In this study, we used the second generation sequencing (Next Generation Sequencing,NGS) platform to study the mutations of 111 genes associated with malignant hematological diseases in 220 cases of AML, and discussed the guiding significance for phenotypic and prognostic stratification in combination with clinical analysis. Firstly, the Chinese-specific mutation frequency and spectrum of AML were obtained by filtering and validating the sequencing data. Then, the molecular mechanism of AML occurrence and the relationship between mutation and clinic were studied from two aspects. On the one hand, the relationship between mutations and clinical phenotype, efficacy and prognosis was analyzed by single mutation analysis, which confirmed the collaboration and mutual exclusion pattern, genotype and clinical phenotype (age, karyotype, age, karyotype) among different biological function mutations. The relationship between leukocyte count, immunophenotype, etc., as well as the effect of mutation on clinical efficacy (remission rate and survival time). On the other hand, it was confirmed that the mutation of NPM1,FLT3-ITD and DNMT3A were usually co-occurring by integrated mutagenesis analysis, and were associated with advanced age, high white blood cell count, morphology of myelomonocyte, unrelieved chemotherapy and poor prognosis. AML with NPM1,IDH1/2 mutation combined with FLT3-ITD negative was associated with lower number of newly diagnosed leukocytes and specific immunophenotypes and was sensitive to chemotherapy. In addition, according to three different mutation combinations: NPM1 or bi-CEBPA mutation with no other mutation, FLT3-ITD,DNMT3A,ASXL1,TET2,TP53 or PFH6 mutation with no CEBPA mutation, and other genotypes, the medium-risk AML was further classified as low, medium. The high-risk three different pre-treatment groups reduced the number of true moderate-risk AML patients by 1/3. In terms of molecular pathogenesis and biological characteristics of AML, this study has carried out in-depth analysis, and confirmed that the prognosis of intermediate-risk AML can be further stratified by different combinations of NGS-based mutations. It lays a foundation for the development of a new risk stratification system and the realization of individualized and accurate treatment for AML in the future.
【學(xué)位授予單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.71

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本文編號：2469986