【摘要】：轉(zhuǎn)移是造成惡性腫瘤患者的死亡的主要原因,市面上大多數(shù)的化療藥物主要針對的是惡性腫瘤細(xì)胞的增殖,很少有能夠有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物。因此,高效且低毒副作用的抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的研發(fā)在惡性腫瘤的治療過程中尤為關(guān)鍵�？鼓[瘤轉(zhuǎn)移藥物的研發(fā)即尋找或設(shè)計出能夠有效抑制轉(zhuǎn)移中關(guān)鍵環(huán)節(jié)的物質(zhì)。目前,除了抗血管生成藥物以外,其它藥物的研發(fā)進(jìn)展較緩慢。臨床研究表明,抗血管生成藥物能夠延長晚期腫瘤患者壽命,提高病人存活率,但具有一定的局限性,并不適用于所有的腫瘤,且副作用較嚴(yán)重。研究表明,活性多糖在腫瘤轉(zhuǎn)移方面有一定的功效�；钚远嗵敲庖哒{(diào)節(jié)、低毒副作用等優(yōu)勢,能夠在一定程度上彌補(bǔ)化療療法的不足,對其抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究具有重要的意義。本課題組從黑根霉發(fā)酵液中分離、純化得到的一種天然多糖Exopolysaccharides1-1(EPS1-1)。前期發(fā)現(xiàn),EPS1-1 能夠顯著抑制 CT26 荷瘤小鼠腫瘤的生長,增強(qiáng)小鼠免疫系統(tǒng)的功能,顯著減輕5-氟尿嘧啶所造成免疫力低下、體重降低等不良反應(yīng),增強(qiáng)化療療效。本論文主要以CT26細(xì)胞為研究對象,研究EPS1-1在抗轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用,并初步分析其作用機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn):侵襲是腫瘤轉(zhuǎn)移啟始環(huán)節(jié)之一,采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分析EPS1-1對腫瘤細(xì)胞侵襲能力的影響,發(fā)現(xiàn)EPS1-1能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞侵襲,0.1、0.2、0.4 mg/ml多糖處理組侵襲抑制率分別為25.00%、45.37%、50.93%。惡性腫瘤細(xì)胞到達(dá)遠(yuǎn)處的靶位點(diǎn)的過程離不開腫瘤細(xì)胞的遷移,Transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析EPS1-1對CT26遷移能力的影響,發(fā)現(xiàn)0.1、0.2、0.4mg/mlEPS1-1處理后,腫瘤細(xì)胞的遷移能力均明顯降低,細(xì)胞遷移抑制率分別為36.23%、48.30%、65.70%。腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移的過程均有腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的黏附的參與,CT26與 Matrigel 黏附實(shí)驗(yàn)表明,0.2、0.4 mg/ml EPS1-1 處理組,CT26 細(xì)胞與 Matrigel黏附能力均顯著下降,EPS1-1對腫瘤細(xì)胞黏附的抑制率分別為36.1%和50.4%。內(nèi)皮細(xì)胞管形成實(shí)驗(yàn)常用于抗血管藥物的篩選,結(jié)果發(fā)現(xiàn),EPS1-1能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞管道的形成。MMP-2、MMP-9是主要的降解胞外基質(zhì)的蛋白酶,Vimentin常被視為判斷腫瘤細(xì)胞侵襲能力的指標(biāo),VEGF則是調(diào)節(jié)腫瘤新生血管生成的關(guān)鍵內(nèi)皮因子。MMP-2、MMP-9、Vimentin和VEGF表達(dá)量升高,細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力也往往增強(qiáng)。E-鈣黏素在腫瘤細(xì)胞的黏附過程中發(fā)揮了重要的功能,E-鈣黏素表達(dá)水平的下降,通常會加速腫瘤的轉(zhuǎn)移。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示,EPS1-1能夠明顯降低CT26細(xì)胞中MMP-2及MMP-9活性。qPCR表明,EPS1-1顯著降低了 CT26 細(xì)胞中 MMP-2、MMP-9、Vimentin 和 VEGF mRNA 表達(dá)量,顯著上調(diào)E-cadherin的表達(dá)量。Western-blot、免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示,EPS1-1處理組CT26細(xì)胞中的MMP-9、Vimentin和VEGF蛋白表達(dá)水平均明顯降低。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立小鼠黑色素瘤和結(jié)腸癌尾靜脈轉(zhuǎn)移模型,體內(nèi)研究EPS1-1抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。肺指數(shù)統(tǒng)計分析表明,EPS1-1可以抑制黑色素瘤和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移,與模型組相比肺指數(shù)分別降低48.50%,38.37%。qPCR表明,EPS1-1組荷瘤小鼠肺組織中MMP-2、MMP-9、Vimentin和VEGF基因表達(dá)水平顯著降低。同時,Westem-b1ot結(jié)果表明,EPS1-1處理后,小鼠肺部MMP-9、Vimentin和VEGF蛋白表達(dá)量明顯減少。免疫組化結(jié)果顯示,EPS1-1組小鼠肺組織中CD31陽性著色程度降低。此外,EPS1-1處理后,小鼠的胸腺指數(shù)上升,血清中的IL-2的釋放量增加,表明EPS1-1可能增強(qiáng)了小鼠的免疫能力。結(jié)論:EPS1-1能夠體外抑制CT26腫瘤細(xì)胞黏附、侵襲、遷移及內(nèi)皮細(xì)胞管道生成;體內(nèi)抑制結(jié)腸癌、黑色素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移并增強(qiáng)了 BaLb/c小鼠免疫功能。EPS1-1抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用可能與其調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移中關(guān)鍵分子的基因和蛋白的表達(dá)水平及提高機(jī)體免疫力有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R73-37

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本文編號：2465637