發(fā)布時(shí)間：2019-04-23 07:28

【摘要】：目的:探討Hedgehog(Hh)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路Shh及Gli1基因在多發(fā)性骨髓瘤(MM)發(fā)病機(jī)制中的可能作用及臨床意義。Hh信號(hào)通路異常被認(rèn)為在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移以及藥物治療耐藥等方面具有重要的作用。脊椎動(dòng)物中有3種Hh基因,分別為Sonic Hedgehog(Shh)、Desert Hedgehog(Dhh)、India Hedgehog(Ihh),分別編碼Shh、Dhh、Ihh蛋白,其中Shh高度保守,是目前Hh基因中研究最為廣泛的基因。Shh主要存在于胚胎期的神經(jīng)系統(tǒng)、骨、皮膚、外生殖器、四肢、造血細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等組織,不僅參與神經(jīng)系統(tǒng)中線形成與維持、骨形態(tài)的發(fā)育、誘導(dǎo)造血細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的形成,而且還參與調(diào)節(jié)不對(duì)稱的身體左右的發(fā)育形成,并調(diào)節(jié)許多器官,包括眼睛、外生殖器、毛發(fā)、胰腺、骨、肺、下丘腦、牙齒、脊髓等的形態(tài)發(fā)生。Gli為Hh信號(hào)通路核轉(zhuǎn)錄因子,定位在細(xì)胞核及胞漿中,能將轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)傳送至細(xì)胞核內(nèi)。在人類存在的3種Gli核轉(zhuǎn)錄基因Gli1、Gli2、Gli3,研究表明3種Gli蛋白在羧基末端均發(fā)現(xiàn)有激活轉(zhuǎn)錄的區(qū)域,在Gli2和Gli3的氨基端還發(fā)現(xiàn)抑制轉(zhuǎn)錄區(qū)域,所以Gli1主要起到激活轉(zhuǎn)錄的作用,而Gli2、Gli3既有激活轉(zhuǎn)錄又有抑制轉(zhuǎn)錄的功能。Gli1是Hh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路轉(zhuǎn)錄激動(dòng)子,其表達(dá)水平增強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致Hh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化,可直接反映Hh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性狀態(tài),因而Gli1被認(rèn)為是Hh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的可靠標(biāo)志。本課題采用RT-PCR和Western Blot兩種方法檢測(cè)Shh及Gli1在MM患者及正常對(duì)照組中的表達(dá)情況并探討Shh及Gli1在MM發(fā)病機(jī)制中的可能作用,為MM的診療提供新的思路及方法并尋找相關(guān)的理論依據(jù)。方法:1.選擇2012.12-2014.05來皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院血液內(nèi)科就診的30例初診MM患者各2ml骨髓液標(biāo)本用做試驗(yàn)組(其中Ig G型20例、Ig A型8例、輕鏈型2例;D-S分期:Ⅰ期2例、Ⅱ期3例、Ⅲ期25例;A組23例、B組7例;ISS分期:Ⅰ期1例、Ⅱ期5例、Ⅲ期24例);選擇2012.07-2014.05我院20例初診的非惡性血液病患者(排除腫瘤、感染、免疫系統(tǒng)疾病等影響試驗(yàn)結(jié)果疾病)骨髓液作為正常對(duì)照組。2.抽取骨髓液2ml,EDTA-2K抗凝,利用淋巴細(xì)胞分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞,制成單個(gè)核細(xì)胞懸液,保存于-80℃冰箱待用。3.提取單個(gè)核細(xì)胞中的總RNA,用分光光度計(jì)A260/A280的比值來分析RNA樣品純度,確保比值在1.8-2.0之間,并逆轉(zhuǎn)錄成c DNA。4.選擇GAPDH為內(nèi)參照基因,Shh及Gli1核酸引物由DNASTAR軟件設(shè)計(jì),由上海生工生物公司合成,用于Shh和Gli1 m RNA的PCR擴(kuò)增。5.利用1.5%瓊脂糖凝膠電泳和Bio-Image Analysis System分析Shh和Gli1 m RNA的表達(dá)和差異。6.采用Western blot檢測(cè)Shh和Gli1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:Shh m RNA與Gli1 m RNA在初診MM患者中高表達(dá),與對(duì)照組相比較差異有顯著性;Shh m RNA與Gli1 m RNA表達(dá)量在D-S分期及ISS分期中顯示:Ⅲ期明顯高于Ⅰ期或Ⅱ期,但A組和B組中無(wú)明顯差異;且Shh、Gil1與多項(xiàng)臨床指標(biāo)有關(guān)。結(jié)論:Shh及Gli1在MM中高表達(dá),與對(duì)照組相比差異有顯著性,且與多項(xiàng)臨床指標(biāo)及分期有關(guān),經(jīng)分析可能與MM的發(fā)生、發(fā)展有一定的關(guān)系,是MM靶向治療的新關(guān)注點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.3

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本文編號(hào)：2463251