發(fā)布時間：2019-04-14 18:03

【摘要】：目的神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤,其中惡性度最高的多形性膠質(zhì)母細胞瘤現(xiàn)有的手術(shù)及放化療等治療方式對患者總體生存率無顯著改善。本研究觀察重組慢病毒中與腫瘤增殖、周期相關(guān)的鈣整合素結(jié)合蛋白1(calcium-and integrin-binding protein 1,CIB1)基因,在人膠質(zhì)瘤細胞系U251中的過表達情況及對其增殖和周期的影響。方法 PCR擴增CIB1目的片段,構(gòu)建CIB1重組pLVX-IRES-CIB1-tdTomato慢病毒載體,將重組慢病毒表達載體感染293T包裝細胞,進行病毒的包裝并檢測病毒滴度,篩選最佳病毒感染復(fù)數(shù)并感染U251膠質(zhì)瘤細胞,熒光顯微鏡觀察pLVX-IRES-CIB1-tdTomato慢病毒表達,CCK-8法檢測CIB1過表達對人膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響,流式細胞儀檢測CIB1過表達對細胞周期的影響。結(jié)果成功構(gòu)建慢病毒表達載體pLVX-CIB1-IRES-tdTomato,制備了重組CIB1慢病毒和空載體慢病毒,病毒滴度分別為2.9×10~7和2.8×10~7 ifu/mL;用最佳病毒感染復(fù)數(shù)100感染U251細胞。CCK-8檢測顯示,CIB1感染組與空載體對照組及空白組相比明顯促進細胞增殖(P0.05),提示CIB1過表達對人腦膠質(zhì)瘤細胞U251有生長促進效應(yīng)。流式細胞檢測顯示,CIB1感染組U251細胞G_2/M期細胞百分比明顯增加,S期細胞比例下降。結(jié)論 CIB1過表達可以促進U251細胞增殖,并使細胞G_2/M細胞比例上升。
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【作者單位】： 蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院實驗中心·甘肅省干細胞與基因藥物重點實驗室;蘭州大學(xué)藥學(xué)院;蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院神經(jīng)外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81372177)
【分類號】：R739.41
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本文編號：2458001