【摘要】：胃癌目前為止仍然是世界上公認的威脅人類健康的問題之一,盡管近年來胃癌在西方國家發(fā)病率已明顯下降,但多數(shù)胃癌患者發(fā)現(xiàn)時已為中晚期并發(fā)生轉(zhuǎn)移,失去手術(shù)機會,轉(zhuǎn)移仍是其致死的主要原因,影響患者的生活質(zhì)量及預后。胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的本性由一系列分子事件決定,包括多種癌基因及抑癌基因的突變,生長因子及其受體異常表達等,是多基因參與、多種信號轉(zhuǎn)導蛋白的調(diào)控及多步驟協(xié)同的復雜網(wǎng)絡(luò)過程,從而導致控制腫瘤生物學行為的下游信號轉(zhuǎn)導分子的表達,增強胃癌細胞誘生血管生成的能力。其發(fā)生機制尚未闡明,需要進一步深入研究。細胞因子誘導的凋亡抑制因子1(Cytokine-induced apoptosis inhibitor1,CIAPIN1)在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,CIAPIN1與多種腫瘤的耐藥、增殖、預后密切相關(guān)。我們實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)CIAPIN1在胃癌組織中低表達,參與胃癌的增殖與多藥耐藥的調(diào)控,可能作為多個信號通路中的關(guān)鍵分子參與胃癌發(fā)生發(fā)展的多個過程。但CIAPIN1在胃癌轉(zhuǎn)移及血管生成中的作用以及分子機制還未見報道,需要我們深入探討。因此,研究CIAPIN1在胃癌轉(zhuǎn)移及血管生成中的作用及分子機制,可為深入理解胃癌發(fā)生發(fā)展的分子事件提供理論依據(jù)。目的:1.觀察CIAPIN1在臨床組織標本中的表達水平與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成的相關(guān)性;2.體外實驗觀察CIAPIN1對胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成的調(diào)控作用;3.初步探討CIAPIN1介導胃癌血管生成的可能分子機制。方法:1.免疫組織化學方法檢測CIAPIN1在正常胃黏膜組織、轉(zhuǎn)移胃癌以及非轉(zhuǎn)移胃癌組織組織中的表達變化,Chi-square test統(tǒng)計分析CIAPIN1與胃癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;2.免疫組織化學方法檢測CIAPIN1、VEGF以及CD31-MVD在胃癌及癌旁組織中的表達,Chi-square test統(tǒng)計分析CIAPIN1和VEGF的表達與胃癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,Sperman分析CIAPIN1和VEGF的表達及CD31-MVD計數(shù)之間的相關(guān)性,分析CIAPIN1與胃癌血管生成的相關(guān)性;3.構(gòu)建CIAPIN1正義真核表達載體及特異性si RNA表達載體,并分別將其以及相應對照空質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細胞系,G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系,利用Western-blot及RT-PCR驗證轉(zhuǎn)染效率;4通過細胞Transwell實驗從體外功能學證實CIAPIN1對胃癌細胞侵襲、遷移的作用,觀察CIAPIN1對胃癌轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用;5采用腫瘤條件培養(yǎng)基法建立Co-HUVECs細胞,利用MTT細胞增殖實驗、細胞化學粘附實驗、細胞遷移實驗觀察CIAPIN1對HUVEC細胞的增殖、粘附、運動遷移的作用,利用體外小管形成實驗(tube formation assay)觀察CIAPIN1對胃癌細胞誘生血管生成能力的影響;6收集高/低表達CIAPIN1的胃癌SGC-7901細胞系的蛋白,Western-blot檢測血管生成相關(guān)分子:VEGF,CDC42,HIF-1α,IL-6,IL-8,探討CIAPIN1調(diào)控胃癌血管生成的可能分子機制。結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果顯示:CIAPIN1在胃癌組織中的表達水平顯著低于其對應的癌旁組織(P=0.0008);發(fā)生轉(zhuǎn)移的胃癌組織中CIAPIN1表達低于其在未發(fā)生轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達水平(P0.0001);此外,CIAPIN1的表達與胃癌的TNM分期密切相關(guān)(P=0.0037);2.VEGF在胃癌組織中的表達顯著高于其在癌旁組織中的表達水平(P0.0001),在胃癌組織中表達的陽性率為68%,VEGF的表達與患者腫瘤分化程度密切相關(guān)(P=0.0042);此外,胃癌組織的CD31-MVD計數(shù)(55.82±3.344)顯著高于癌旁組織的CD31-MVD計數(shù)(12.16±1.211)(P0.0001)。進一步Sperman等級相關(guān)性分析顯示CIAPIN1的表達與VEGF的表達以及CD31-MVD計數(shù)成負相關(guān);3 Western-blot以及RT-PCR實驗結(jié)果均顯示正義真核表達載體pc DNA3.1-CIAPIN1可以上調(diào)CIAPIN1在胃癌SGC-7901細胞系中的表達,相反特異性psi?CIAPIN1-2載體可以顯著抑制胃癌SGC-7901細胞系中內(nèi)源性CIAPIN1的表達;4.轉(zhuǎn)染正義真核表達CIAPIN1載體后,胃癌SGC-7901侵襲、遷移細胞數(shù)顯著少于對照組,而轉(zhuǎn)染特異性si RNA的質(zhì)粒載體后SGC-7901侵襲、遷移細胞數(shù)顯著多于對照組(P0.05);5.建立Co-HUVECs細胞,CIAPIN1過表達時,HUVEC細胞增殖減慢、細胞粘附數(shù)及遷移數(shù)減少,體外小管形成實驗顯示HUVEC細胞形成小管的長度及數(shù)量均低于對照組;下調(diào)CIAPIN1表達得到類似的結(jié)果,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05);6.Western-blot實驗顯示:抑制CIAPIN1在胃癌SGC-7901細胞內(nèi)表達可上調(diào)CDC42、VEGF、HIF-1α、IL-8等血管生成相關(guān)分子的表達。結(jié)論:1.免疫組化結(jié)果顯示新基因CIAPIN1在胃癌組織中表達水平顯著低于正常胃黏膜組織,在轉(zhuǎn)移的胃癌組織表達水平顯著低于非轉(zhuǎn)移胃癌組織及正常胃黏膜組織,CIAPIN1在胃癌組織中的表達水平與VEGF的表達水平及CD31-MVD計數(shù)成負相關(guān),提示CIAPIN1與胃癌的轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關(guān);2.體外細胞實驗發(fā)現(xiàn)CIAPIN1可抑制胃癌SGC-7901細胞的侵襲、遷移和HUVEC細胞的增殖、粘附、遷移及小管形成,提示CIAPIN1可抑制胃癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成,可能在胃癌轉(zhuǎn)移及血管生成過程中發(fā)揮重要作用;3.Western-Blot結(jié)果顯示CIAPIN1可抑制CDC42、VEGF、HIF-1α、IL-8等血管生成相關(guān)分子的表達水平,提示CIAPIN1可抑制胃癌血管生成,其機制部分是通過抑制HIF-1α和VEGF的表達來實現(xiàn)的。CIAPIN1作為一個凋亡相關(guān)新基因,在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,我科既往研究發(fā)現(xiàn)CIAPIN1調(diào)控胃癌增殖和耐藥,但其介導胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移、血管生成的作用尚未見報道,本研究首次發(fā)現(xiàn)CIAPIN1與胃癌轉(zhuǎn)移及血管生成密切相關(guān),其抑制血管生成的機制部分是通過抑制HIF-1α和VEGF的表達來實現(xiàn)的;并可能存在兩條信號通路,一是CIAPIN1直接作用于VEGF從而發(fā)揮抑制胃癌血管生成的作用,二是CIAPIN1通過對HIF-1α作用之后間接作用于VEGF即介導HIF-1α/VEGF信號通路從而抑制胃癌的血管生成。但上述結(jié)果還需要更進一步的研究證實,以期為CIAPIN1作為胃癌臨床治療靶標奠定堅實的理論基礎(chǔ)。
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【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Correlation between expression of cyclooxygenase-2 and angiogenesis in human gastric adenocarcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2003年04期

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本文編號：2447319