【摘要】：全世界范圍內(nèi)結(jié)直腸癌都是最常見的惡性腫瘤之一,也是危及人類健康的重大疾病。近年來(lái)我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率逐漸上升,結(jié)直腸癌的防治問(wèn)題日益重要。結(jié)直腸癌有高轉(zhuǎn)移的腫瘤生物學(xué)特性,臨床上轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者占到腸癌總患者的40%以上,其預(yù)后極差,現(xiàn)有治療手段大多只能延長(zhǎng)患者生存而無(wú)法治愈,所以結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移是其防治中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。但關(guān)于腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制認(rèn)識(shí)還很不足,沒有明確的轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)分子標(biāo)志,也沒有很好的治療靶點(diǎn),所以研究結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制有重大意義。通常認(rèn)為腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是腫瘤轉(zhuǎn)移步驟中重要的一環(huán),但腸癌EMT的過(guò)程中有些問(wèn)題目前認(rèn)識(shí)得還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。比如經(jīng)典的EMT轉(zhuǎn)錄因子在腸癌細(xì)胞中是如何被調(diào)控的,誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生EMT的微環(huán)境信號(hào)又是通過(guò)哪些分子來(lái)激活癌細(xì)胞中的EMT關(guān)鍵基因的。對(duì)這些問(wèn)題的探討有助于深入認(rèn)識(shí)腸癌EMT的機(jī)制,從而為轉(zhuǎn)移性腸癌的防治發(fā)現(xiàn)潛在的分子靶點(diǎn)。MEF2(Myocyte Enhancer Factor 2)家族是具有多種生物學(xué)功能的轉(zhuǎn)錄因子家族,其在胚胎發(fā)育,器官形成,肌肉,心血管和神經(jīng)系統(tǒng)中的重要作用已早被人們所認(rèn)識(shí)。近年來(lái)MEF2家族成員在腫瘤的作用也逐漸被發(fā)現(xiàn)。我們課題組之前發(fā)現(xiàn)MEF2家族第4號(hào)成員即MEF2D在肝癌中異常高表達(dá),其促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖并導(dǎo)致預(yù)后不良。后續(xù)有其他課題組報(bào)道了MEF2D在肺癌和骨肉瘤中的促癌作用,提示MEF2D可能是某些實(shí)體瘤中的潛在“癌基因”,但MEF2D在結(jié)直腸癌中作用尚無(wú)報(bào)道,而且之前MEF2D在癌癥中的研究主要局限于其對(duì)癌細(xì)胞增殖的作用,MEF2D是否具有其他促腫瘤功能目前也不明確。基于上述研究背景,我們?cè)诮Y(jié)直腸癌中展開了MEF2D促腫瘤功能的研究,致力于探討MEF2D對(duì)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制。本課題的主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.檢測(cè)臨床結(jié)直腸癌組織中MEF2D的表達(dá)情況,并探討MEF2D表達(dá)與腫瘤的臨床病理特征和患者預(yù)后的關(guān)系以免疫組化的方法在93例臨床結(jié)直腸癌標(biāo)本中探討了mef2d的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)mef2d在結(jié)直腸癌組織中較相鄰癌旁組織和對(duì)應(yīng)正常腸粘膜組織有顯著異常的高表達(dá),提示mef2d可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中起著某些作用。通過(guò)比較不同臨床病理特征的患者腫瘤中mef2d表達(dá)的差異,我們發(fā)現(xiàn)mef2d的異常高表達(dá)與結(jié)直腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)具有正相關(guān)性,而與患者的生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān),這些結(jié)果初步提示了mef2d可能促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移,并導(dǎo)致不良預(yù)后。2.在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物腫瘤模型中研究了mef2d對(duì)腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響在高侵襲且間質(zhì)樣的癌細(xì)胞與低侵襲且上皮樣的癌細(xì)胞之間比較mef2d的表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)mef2d表達(dá)量與細(xì)胞的侵襲能力正相關(guān),而與上皮樣標(biāo)志物e-cadherin表達(dá)負(fù)相關(guān)。通過(guò)敲低mef2d和過(guò)表達(dá)mef2d,我們證明了mef2d具有促進(jìn)腸癌細(xì)胞遷移和侵襲轉(zhuǎn)移的功能,并在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了mef2d對(duì)腸癌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移的重要作用。3.研究mef2d對(duì)腸癌細(xì)胞emt表型的影響通過(guò)在mef2d高表達(dá)的間質(zhì)樣腸癌細(xì)胞中敲低其表達(dá),同時(shí)在低mef2d表達(dá)的上皮樣腸癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)mef2d,我們發(fā)現(xiàn)mef2d對(duì)腫瘤細(xì)胞的emt表型確有調(diào)控作用:它在間質(zhì)樣細(xì)胞中維持其間質(zhì)樣表型,并促進(jìn)上皮樣細(xì)胞發(fā)生emt。4.發(fā)現(xiàn)mef2d調(diào)控emt的關(guān)鍵分子zeb1,并探討其調(diào)控的具體分子機(jī)制通過(guò)敲低mef2d觀察其對(duì)部分emt關(guān)鍵分子表達(dá)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞中zeb1的表達(dá)均明顯下降。通過(guò)mef2d過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn),免疫熒光,流式細(xì)胞術(shù)等進(jìn)一步檢測(cè)mef2d與zeb1的表達(dá)的關(guān)系,證明了emt關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一的zeb1的表達(dá)受到mef2d的調(diào)控。通過(guò)染色質(zhì)免疫沉淀,啟動(dòng)子報(bào)告基因檢測(cè)等方法實(shí)驗(yàn)證明了zeb1是mef2d直接靶基因。另外我們發(fā)現(xiàn)敲低mef2d后zeb1啟動(dòng)子組蛋白乙酰化水平減低,組蛋白乙�；竝300在zeb1啟動(dòng)子上的結(jié)合下降。5.在微環(huán)境emt誘導(dǎo)因子的誘導(dǎo)下觀察mef2d的表達(dá)及其功能以常用的腸癌細(xì)胞emt誘導(dǎo)因子如egf和缺氧,構(gòu)建腸癌細(xì)胞的emt模型,并觀察其中mef2d的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)mef2d在多種微環(huán)境emt誘導(dǎo)信號(hào)刺激下表達(dá)都明顯且迅速地上調(diào),敲低mef2d后部分因子誘導(dǎo)的細(xì)胞emt過(guò)程受到明顯的阻礙。6.探討MEF2D在微環(huán)境EMT誘導(dǎo)因子激活ZEB1表達(dá)中的作用通過(guò)觀察MEF2D和ZEB1在胞外EMT信號(hào)刺激下表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,我們推測(cè)MEF2D的表達(dá)上調(diào)可能是ZEB1表達(dá)激活的前提。在MEF2D穩(wěn)定敲低的細(xì)胞中以多種EMT誘導(dǎo)因子來(lái)刺激細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其ZEB1的表達(dá)激活被阻斷。并且我們?cè)趯?shí)驗(yàn)小鼠轉(zhuǎn)移瘤標(biāo)本中觀察到,在MEF2D敲低細(xì)胞接種產(chǎn)生的轉(zhuǎn)移腫瘤中ZEB1的表達(dá)不能檢出。綜上所述,本研究得出的主要結(jié)論有:1.MEF2D在人類結(jié)直腸癌中異常高表達(dá)且與轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良相關(guān);2.MEF2D在腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和EMT中起重要調(diào)控作用;3.MEF2D能夠直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控EMT的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子ZEB1;4.MEF2D能在多種微環(huán)境EMT誘導(dǎo)因素的刺激下迅速顯著上調(diào)表達(dá),并在這些EMT過(guò)程中起必要作用;5.MEF2D能夠匯集多種微環(huán)境的EMT誘導(dǎo)信號(hào),是這些微環(huán)境信號(hào)激活EMT關(guān)鍵分子的重要節(jié)點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2430815