【摘要】：研究背景根據(jù)ER、PR、her-2、Ki67的表達情況可將乳腺癌分為預后相對較好的Luminal A型、Luminal B型和預后相對較差的Her-2過表達型、三陰性乳腺癌。作為一種高異質(zhì)性腫瘤,不同分子分型的乳腺癌患者的預后存在巨大差異,即使在Luminal A型乳腺癌中,仍有一部分患者的預后接近三陰性患者,由此可見目前的乳腺癌分子分型仍不夠完善。因此,在乳腺癌各分子亞型中進一步尋找有預后意義的分子標記物具有重要的臨床意義。Aur-A作為細胞有絲分裂期的關(guān)鍵激酶,與多種腫瘤的發(fā)生有密切的聯(lián)系,但其是否可作為乳腺癌的獨立預后因素仍存在爭論。同時Aur-A對乳腺癌患者的預后中的具體分子機制尚不清楚,有待進一步深入研究。實驗目的初步探討Aur-A是否可作為不同亞型乳腺癌中進一步區(qū)分預后的更準確的風險標記物。通過分子信號通路的研究,更好的了解Aur-A的生物學功能及其作用機制。實驗方法(1)利用310例,具備12年完整隨訪資料的人乳腺癌組織芯片,進行免疫組化染色,分析Aur-A在乳腺癌組織中的表達及其與預后的關(guān)系。通過進一步分層分析了解Aur-A是否能篩選出各型乳腺癌患者中預后不良的亞群。(2)以代表Luminal A型乳腺癌的MCF-7細胞系作為體外實驗的研究對象,運用siRNA敲除MCF-7細胞中的Aur-A或使用Aur-A選擇性抑制劑Amg900抑制Aur-A的活性,通過克隆形成、CCK-8細胞增殖、劃痕實驗、transwell侵襲、遷移實驗等實驗方法研究Aur-A在Luminal A型乳腺癌的增殖及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。用Western blot和RT-PCR方法探索Aur-A發(fā)揮相應作用的分子機制。(3)運用MCF-7細胞分別建立慢病毒敲除的荷瘤模型和Amg900抑制劑的藥物干預模型,兩組模型分別設(shè)置相應的陰性對照和空白對照。觀察兩種模型瘤體生長速度：并運用免疫組化染色檢測瘤體Aur-A、Ki67、Cofilin、P-Cofilin、PHH3以及Src的表達水平。實驗結(jié)果第一部分：Aur-A在浸潤性乳腺癌中高表達,310例患者中陽性表達率達到80.65%(250/310), Aur-A的陽性和陰性表達分布與年齡(P=0.451)、病理分級(P=0.318)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.777)、腫瘤部位(P=0.387)、臨床分期(P=0.902)、CK5/6(P=0.099)、AR (P=0.512)等無顯著相關(guān)性：但與腫瘤大小(P=0.0.030)、ER(P=0.044)、PR(P=0.027)、Her-2 (P=0.000)、Ki-67 (P=0.013)、P53 (P=0.029)、EGFR(P=0.036)、Cofilin(P=0.000)、分子分型(P=0.000)等指標具有顯著相關(guān)(P0.05)。Kaplan-Meie r生存分析顯示,Aur-A過表達是乳腺癌不良預后的獨立危險因素。進一步分層分析發(fā)現(xiàn),Aur-A在LuminalA型乳腺癌中的表達與其預后有統(tǒng)計學意義(P=0.03)。單因素Cox回歸分析結(jié)果示,Aur-A、ER、PR、EGFR、 AR、FAK、Cofilin、Aur-B、分子分型、腫瘤分期等指標具有統(tǒng)計學意義,然而多因素Cox分析中卻只有Aur-A 和 Cofilin可作為獨立預后因素。結(jié)果表明,Aur-A可作為Luminal A型乳腺癌患者預后評估的風險標記物。第二部分：基于第一部分實驗,對Aur-A的生物學功能及作用機制展開初步研究。Aur-A在代表Luminal A型乳腺癌的MCF-7細胞株中高表達,使用siRNA敲除MCF-7細胞中的Aur-A或使用Aur-A選擇性抑制劑Amg900抑制Aur-A的活化后,觀察到其細胞增殖能力、遷移、侵襲能力、劃痕愈合能力及克隆形成能力均明顯減弱。siRNA敲除細胞內(nèi)的Aur-A后Cofilin-F-actin通路的磷酸化程度增高,從而減少Cofilin活性的非磷酸化部分,導致Cofilin-F-actin通路的活性降低：另外Aur-A被敲除后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子TGF-β、Snail、Vimentin表達下降,E-cadherin蛋白表達升高；Src、FAK等侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子亦發(fā)生相應改變。這些信號通路中的改變均有可能是Aur-A導致乳腺癌不良預后的分子機制。第三部分：裸鼠成瘤及抑制劑干預實驗結(jié)果表明,Aur-A病毒敲除細胞系在裸鼠體內(nèi)成瘤體積和重量明顯小于對照組;在MCF-7裸鼠成瘤模型中給予Aur-A的選擇性抑制Amg900可有效的控制腫瘤的生長。同時免疫組化結(jié)果示Aur-A敲除后裸鼠體內(nèi)成瘤中的Cofilin、PHH3等的表達無明顯的差異性,但Aur-A、Src、Ki67的表達量明顯低于對照組,P-Cofilin明顯高表達。結(jié)論Aur-A可作為乳腺癌的獨立預后因素；對于Luminal A型乳腺癌,其預后意義尤為顯著。Aur-A作為上游基因可調(diào)控Cofilin-F-actin、Src、FAK 及 EMT相關(guān)因子TGF-β、Snail、 Vimentin、E-cadherin等蛋白的表達,通過其它多條侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路的分子共同作用,實現(xiàn)對腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控。Aur-A有望成為Lumianl A型乳腺癌預后風險評估的標記物及潛在的治療靶點。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：2413642