【摘要】：背景乳腺癌屬于全球高發(fā)癌癥,在我國也是女性發(fā)病率最高的癌癥,且近年來發(fā)病年齡愈趨向于年輕化,腫瘤本身呈高度異質(zhì)性,病死率高。三陰性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是其中一種乳腺癌亞型,該類型特點(diǎn)是癌細(xì)胞表面雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2(Her-2)免疫組化結(jié)果顯示均為陰性,故而缺少特異性靶點(diǎn),可行治療手段單一,死亡率高,對(duì)該類癌細(xì)胞進(jìn)展的分子機(jī)制研究有助于為三陰性乳腺癌治療提供新靶點(diǎn)。程序性死亡配體1(PD-L1),又有B7-H1的稱法,能和程序性死亡受體1(PD-1)互相識(shí)別并結(jié)合,在T細(xì)胞免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。既往有研究表明各類型乳腺癌中三陰性乳腺癌細(xì)胞組織表面PD-L1表達(dá)較高,為研究PD-l1對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展的影響,本研究選取具有人三陰性乳腺癌特征的MDA-MB-231細(xì)胞株作為研究對(duì)象,探討沉默PD-L1基因后三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖及凋亡的情況。目的初步驗(yàn)證PD-L1在人三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞株的表達(dá)情況;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)下調(diào)MDA-MB-231細(xì)胞系中PD-L1的表達(dá),觀察沉默PD-L1后對(duì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響。方法1、Real-time PCR法檢測三組乳腺細(xì)胞MDA-MB-231(ER、PR、Her-2均陰性)、MCF-7(ER、PR+;Her-2-)以及HBL-100(正常乳腺上皮細(xì)胞)中PD-L1的表達(dá)情況;2、應(yīng)用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)PD-L1 shRNA的MDA-MB-231細(xì)胞;3、轉(zhuǎn)染后Real-time PCR檢測PD-L1 mRNA;4、CCK-8法檢測三組細(xì)胞增殖情況;流式細(xì)胞儀檢測三組細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期。結(jié)果1、與正常乳腺上皮細(xì)胞(HBL-100)相比,PD-L1在乳腺癌中高表達(dá)(P0.01);且在三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中表達(dá)高于MCF-7(P0.01);2、Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染后,相比較于空白組和對(duì)照組,PD-L1 sh RNA處理組中PD-L1 mRNA表達(dá)下降;3、轉(zhuǎn)染PD-L1 shRNA后,MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力(0.34±0.02)較陰性對(duì)照組(0.67±0.04)明顯下降(F=120.342,P0.01);流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示PD-L1下調(diào)后實(shí)驗(yàn)組凋亡率(15.2%)較對(duì)照組明顯升高(3.4%);G0/G1期的細(xì)胞比例(69.72±1.0)%較陰性對(duì)照組(58.34±1.8)%增加(F=58.071,P0.01)。結(jié)論P(yáng)D-L1在人乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)增高,尤其在三陰性乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)明顯;抑制細(xì)胞株MDA-MB-231 PD-L1的表達(dá)后,比之于空白組和對(duì)照組,三陰性乳腺癌細(xì)胞增值能力明顯受到抑制,凋亡率增加,處于G0/G1期的細(xì)胞增多。
[Abstract]:Background Breast cancer is one of the most common cancers in the world and has the highest incidence among women in China. In recent years, the age of breast cancer tends to be younger, the tumor itself is highly heterogeneous and the mortality is high. Triple negative breast cancer (Triple-negative breast cancer,TNBC) is one of the subtypes of breast cancer, characterized by estrogen receptor (estrogen receptor,ER) on the surface of cancer cells. The results of immunohistochemical staining of progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor 2 (Her-2) showed that both were negative. Molecular mechanisms for the progression of these cancer cells may provide new targets for triple-negative breast cancer therapy. Programmed death Ligand 1 (PD-L1), which has B7-H1, can be recognized and combined with programmed death receptor 1 (PD-1), and plays a negative role in T cell immune response. Previous studies have shown that there is a high expression of PD-L1 on the tissue surface of three-negative breast cancer cells in all types of breast cancer. In order to study the effect of PD-l1 on the occurrence and development of three-negative breast cancer cells, The aim of this study was to investigate the proliferation and apoptosis of three negative breast cancer cells with three negative PD-L1 gene silencing. Objective to investigate the expression of PD-L1 in MDA-MB-231 cell line of human triple-negative breast cancer cells. The expression of PD-L1 in MDA-MB-231 cell line was down-regulated by RNA interference technique, and the effect of PD-L1 silencing on cell proliferation and apoptosis was observed. Methods 1Real-time PCR assay was used to detect the expression of PD-L1 in breast MDA-MB-231 (ER,PR,Her-2 negative), MCF-7 (ER,PR; Her-2-) and HBL-100 (normal breast epithelial cells). (2) RNA interference technique was used to construct MDA-MB-231 cells expressing PD-L1 shRNA stably. 3. After transfection, the proliferation of three groups of cells was detected by PD-L1 mRNA;4,CCK-8 assay by Real-time PCR assay. Apoptosis and cell cycle were detected by flow cytometry. Results 1 the expression of PD-L1 was higher in breast cancer than in normal breast epithelial cells (HBL-100) (P0.01), and the expression of PD-L1 in MDA-MB-231 of three-negative breast cancer cells was higher than that of MCF-7 (P0.01). 2After transfection of real-time PCR, the expression of PD-L1 mRNA in PD-L1 sh RNA treated group was lower than that in blank group and control group. 3After transfection of PD-L1 shRNA, the proliferative ability of MDA-MB-231 cells (0.34 鹵0.02) was significantly lower than that of negative control group (0.67 鹵0.04). Flow cytometry showed that the apoptotic rate of the experimental group (15.2%) was significantly higher than that of the control group (3.4%) after down-regulation of PD-L1. The percentage of cells in G0/G1 phase (69.72 鹵1.0)% was higher than that in negative control group (58.34 鹵1.8%, P0.01). Conclusion the expression of PD-L1 is increased in human breast cancer cells, especially in triple-negative breast cancer cells. After inhibiting the expression of MDA-MB-231 PD-L1, the proliferation ability of triple-negative breast cancer cells was significantly inhibited, the apoptosis rate was increased and the number of cells in the G0/G1 phase was increased compared with the blank group and the control group.
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

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