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PTX敏感胃癌細(xì)胞在紫杉醇誘導(dǎo)衰老過程中Tristetraprolin表達(dá)機(jī)制的研究

發(fā)布時(shí)間:2019-01-07 09:33
【摘要】:背景:胃癌是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,新輔助/輔助化療是胃癌治療的重要臨床手段。然而化療耐藥也是臨床工作中仍不能解決的棘手問題;熯^程中過度產(chǎn)生的衰老相關(guān)分泌表型(Senescence-Associated Secretory Phenotypes,SASPs)被證明是導(dǎo)致化療耐藥的主要原因。Tristetraprolin(ZFP36,TTP,TIS11或稱為Nup475)是一種新興的抑癌蛋白,可通過與SASPs相關(guān)細(xì)胞因子的mRNA結(jié)合,并通過將mRNA運(yùn)送到細(xì)胞P小體(P-Body),介導(dǎo)脫腺苷作用使這些mRNA降解,從而抑制SASPs過度分泌,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性。然而TTP在化療誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老過程中表達(dá)是否發(fā)生改變,及TTP表達(dá)改變的原因均不明確。同時(shí)也無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道TTP表達(dá)改變是否與對化療藥物的敏感性相關(guān)。因此,本實(shí)驗(yàn)擬研究TTP在紫杉醇相對敏感和相對耐藥細(xì)胞株衰老模型中TTP表達(dá)改變情況,及其表達(dá)改變的具體分子機(jī)制,以便為提高新輔助/輔助化療敏感性提供新的思路。方法:首先利用紫杉醇對NCL-N87、BGC-823、SGC-7901、HGC-27四種常見胃癌細(xì)胞進(jìn)行初步篩選,鑒別出四株細(xì)胞中對紫杉醇相對敏感和相對耐藥細(xì)胞株。然后使用紫杉醇分別刺激相對敏感和相對耐藥胃癌細(xì)胞,構(gòu)建兩種胃癌細(xì)胞衰老模型,并使用衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色驗(yàn)證衰老模型構(gòu)建成功。隨后利用Western-Blot觀察在紫杉醇相對敏感和相對耐藥細(xì)胞株衰老模型中TTP表達(dá)情況差異,并利用qRT-PCR和ELISA檢測紫杉醇相對敏感細(xì)胞衰老前后IL-1a、IL-1β、IL-6和IL-8表達(dá)變化。接著使用IL-1a、IL-1β、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子對紫杉醇相對敏感胃癌細(xì)胞進(jìn)行刺激,初步尋找出刺激TTP表達(dá)的關(guān)鍵細(xì)胞因子。之后利用干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,構(gòu)建細(xì)胞因子干擾細(xì)胞衰老模型,并檢測細(xì)胞因子干擾衰老模型中TTP表達(dá)水平,從而確定細(xì)胞因子在衰老過程中對TTP表達(dá)的刺激作用。最后通過使用NF-κB信號通路的阻斷劑處理胃癌細(xì)胞,確定調(diào)節(jié)TTP表達(dá)的信號通路。結(jié)果:通過利用紫杉醇初步篩選,結(jié)果顯示SGC-7901是對紫杉醇相對耐藥的胃癌細(xì)胞株,而BGC-823是對紫杉醇相對敏感的胃癌細(xì)胞株。在相對敏感細(xì)胞和相對耐藥細(xì)胞的衰老模型構(gòu)建成功后,通過Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)在紫杉醇誘導(dǎo)的BGC-823和SGC-7901細(xì)胞衰老模型中,TTP表達(dá)水平存在明顯差異,BGC-823衰老模型中TTP表達(dá)明顯高于SGC-7901。通過qRT-PCR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn),BGC-823衰老后IL-1a、IL-1β、IL-6和IL-8表達(dá)明顯較衰老前增高。通過利用IL-1a、IL-1β、IL-6、IL-8四種細(xì)胞因子刺激BGC-823細(xì)胞,結(jié)合IL-1β干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,構(gòu)建IL-1β(-)細(xì)胞衰老模型,并檢測IL-1β(-)細(xì)胞衰老模型中TTP表達(dá)變化;結(jié)果顯示IL-1β是在紫杉醇誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞衰老過程中TTP表達(dá)的主要刺激因子。最后通過使用NF-κB的阻斷劑IKK-Inhibitor VII分別阻斷NF-κB信號通路的經(jīng)典途徑和經(jīng)典+非經(jīng)典途徑,并利用IL-1β刺激阻斷后的細(xì)胞、檢測其中TTP表達(dá),證明了在紫杉醇誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞衰老過程中,IL-1β可通過激活NF-κB經(jīng)典和非經(jīng)典信號通路刺激TTP表達(dá)。結(jié)論:首先本研究成功構(gòu)建了紫杉醇誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞衰老模型。其次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示IL-1β是紫杉醇誘導(dǎo)細(xì)胞衰老過程中TTP表達(dá)的主要刺激因子。最后發(fā)現(xiàn)了在紫杉醇誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞衰老過程中,IL-1β可通過激活NF-κB信號通路經(jīng)典途徑及非經(jīng)典途徑發(fā)揮刺激TTP表達(dá)的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 王長明;許超;衛(wèi)子然;蔡清萍;;進(jìn)展期胃癌新輔助化療前后IL-6、IL-10的變化及其臨床意義[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年15期

2 Javier Sastre;Jose Angel García-Saenz;Eduardo Díaz-Rubio;;Chemotherapy for gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年02期



本文編號:2403507

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