【摘要】：[研究目的]結(jié)直腸癌的新發(fā)病例數(shù)和死亡例數(shù)在所有惡性腫瘤中均占第三位,我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率和年齡標(biāo)準(zhǔn)化死亡率一直呈上升趨勢。手術(shù)切除是結(jié)直腸癌目前最主要的治療手段,聯(lián)合5-氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的化療是進(jìn)展期結(jié)直腸癌患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方案,貝伐單抗、西妥昔單抗等靶向藥物的應(yīng)用減少了術(shù)后復(fù)發(fā),使結(jié)直腸癌患者的生存率有了明顯改善,也可以使部分轉(zhuǎn)移病人獲益。然而,具有KRAS突變(占40-45%)或BRAF突變(占KRAS野生型的8-15%)的患者無法從現(xiàn)有的靶向治療獲益,且許多早期有治療效果的患者最終因腫瘤的獲得性耐藥而治療失敗,許多患者在診斷后5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,因此,近年來許多研究者將目光投向腫瘤微環(huán)境去尋找新的靶點(diǎn)。在本項研究中,我們的目的是明確結(jié)直腸癌間質(zhì)中骨膜蛋白(POSTN)的表達(dá)形式及其與患者預(yù)后的關(guān)系,證實POSTN高表達(dá)成纖維細(xì)胞對結(jié)直腸癌細(xì)胞惡性表型的影響,并進(jìn)一步探究其作用機(jī)制。[研究方法]回顧性分析于2001年1月至2009年12月期間在上海長海醫(yī)院以及于2000年1月至2006年1月期間在廣州中山大學(xué)第六附屬醫(yī)院接受根治性手術(shù)的共1098例結(jié)直腸癌患者的臨床病例資料并收集其術(shù)后石蠟組織標(biāo)本,應(yīng)用免疫組化法檢測結(jié)直腸癌石蠟組織標(biāo)本中POSTN的表達(dá)分布以及表達(dá)水平,根據(jù)免疫組化評分定義POSTN表達(dá)水平高低,統(tǒng)計分析POSTN在上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞以及癌旁組織、原發(fā)組織和轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)情況,結(jié)合長期隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行生存分析評估POSTN表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系,并使用多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型來評估年齡、性別、腫瘤位置、TNM分期、腫瘤分化程度、清掃淋巴結(jié)數(shù)、血清CEA、CA19-9以及間質(zhì)POSTN表達(dá)和上皮POSTN表達(dá)對患者生存期的影響,評價腫瘤間質(zhì)中POSTN表達(dá)與癌上皮細(xì)胞中POSTN表達(dá)對結(jié)直腸癌預(yù)后的判定能力。細(xì)胞水平應(yīng)用慢病毒載體構(gòu)建過表達(dá)POSTN的成纖維細(xì)胞,通過細(xì)胞增殖實驗、克隆形成實驗、細(xì)胞遷移實驗評估POSTN對成纖維細(xì)胞生長、遷移的影響,采用表達(dá)譜芯片技術(shù)分析POSTN表達(dá)水平改變對成纖維細(xì)胞中基因表達(dá)的影響;將過表達(dá)POSTN的成纖維細(xì)胞與大腸癌細(xì)胞間接共培養(yǎng),從細(xì)胞增殖、克隆形成、侵襲、耐藥等方面檢測過表達(dá)POSTN的成纖維細(xì)胞對大腸癌細(xì)胞惡性表型的影響。機(jī)制研究方面,采用人重組POSTN蛋白(rhPOSTN)和PI3K/Akt激酶抑制劑、β-catenin抑制劑處理大腸癌細(xì)胞,檢測大腸癌細(xì)胞增殖、克隆形成、侵襲、耐藥能力的改變,從而評估POSTN對癌細(xì)胞的作用是否經(jīng)由PI3K/Akt或者β-catenin信號通路介導(dǎo)。采用生物信息學(xué)分析的方法評價結(jié)直腸癌中POSTN與其他癌相關(guān)成纖維細(xì)胞標(biāo)志性分子之間的關(guān)系。[結(jié)果]石蠟標(biāo)本免疫組化染色顯示POSTN主要位于結(jié)直腸癌上皮細(xì)胞和腫瘤間質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)中,其在間質(zhì)細(xì)胞中的分布比在癌上皮細(xì)胞中更加密集,并且間質(zhì)POSTN在轉(zhuǎn)移癌組織中的表達(dá)水平顯著高于在原發(fā)腫瘤組織中的表達(dá)水平(P0.001 ),其在原發(fā)腫瘤組織中的表達(dá)水平也顯著高于在癌旁組織中的表達(dá)水平(P0.001)。Kaplan-Meier生存分析以及l(fā)og-rank分析顯示,腫瘤間質(zhì)高、中、低表達(dá)POSTN的三組患者之間的無病生存期(DFS)和疾病特異性生存期(DSS)差異均十分顯著(P0.001),間質(zhì)POSTN高表達(dá)預(yù)示結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良,同時間質(zhì)POSTN還能提示III期接受化療的結(jié)直腸癌患者的預(yù)后情況;癌上皮細(xì)胞中POSTN的表達(dá)水平也與結(jié)直腸癌進(jìn)展和預(yù)后相關(guān),但是其對預(yù)后的判定能力與間質(zhì)POSTN相比較差。多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析顯示,POSTN在腫瘤間質(zhì)中而非在癌上皮中的表達(dá)水平分級是結(jié)直腸癌患者無病生存期(DFS)和疾病特異性生存期(DSS)的獨(dú)立風(fēng)險因素。大腸癌細(xì)胞與過表達(dá)POSTN的成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)后,其增殖能力、克隆形成能力、侵襲力和耐藥力明顯增強(qiáng);使用rhPOSTN處理大腸癌細(xì)胞也能夠增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力、克隆形成能力、侵襲力和耐藥力,而PI3K/Akt激酶抑制劑和β-catenin抑制劑則能夠削弱rhPOSTN對大腸癌細(xì)胞的這種促進(jìn)作用。大腸癌細(xì)胞RKO能夠誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞表達(dá)POSTN,過表達(dá)POSTN的成纖維細(xì)胞增殖能力、克隆形成能力和遷移力明顯增強(qiáng),而PI3K/Akt激酶抑制劑和β-catenin抑制劑能削弱POSTN對成纖維細(xì)胞的影響;基因表達(dá)譜芯片分析顯示,POSTN表達(dá)升高后成纖維細(xì)胞中多種細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子以及骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMP-2的表達(dá)上調(diào),GO富集分析提示POSTN表達(dá)升高可引起跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、受體結(jié)合、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞因子/化學(xué)因子活動、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞膜等分子功能、生物學(xué)進(jìn)程和細(xì)胞組成的改變。生物信息學(xué)分析顯示,POSTN的轉(zhuǎn)錄水平與多種癌相關(guān)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物顯著相關(guān)(皮爾松相關(guān)系數(shù)0.70,P 0.01)。[結(jié)論]腫瘤間質(zhì)中POSTN高表達(dá)提示結(jié)直腸癌患者不良預(yù)后。癌細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞之間以旁分泌的方式相互作用,大腸癌細(xì)胞可誘導(dǎo)正常成纖維細(xì)胞表達(dá)POSTN;高表達(dá)POSTN的成纖維細(xì)胞具有癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的特性和功能,能夠通過激活PI3K/Akt和(或)Wnt/β-catenin通路而促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的惡性表型;同時間質(zhì)POSTN以旁分泌或自分泌模式通過激活PI3K/Akt或Wnt/β-catenin通路而促進(jìn)自體成纖維細(xì)胞的增殖、遷移和克隆形成能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

【參考文獻(xiàn)】

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1 彭芳;陳明;;抗血管生成和腫瘤血管正常化的研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2009年07期

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本文編號：2401593