【摘要】：顱內(nèi)惡性腫瘤中腦膠質(zhì)瘤以44%的發(fā)病率居于首位,具有病程短、治愈難、存活時(shí)間短和預(yù)后差等特點(diǎn),腦膠質(zhì)瘤病人的生存期僅有6~12個(gè)月。腦膠質(zhì)瘤的治療方案以手術(shù)、放療和化療為主,但手術(shù)治療由于其解剖特點(diǎn)無法全部切除,化療由于血腦屏障的存在可用的藥物很少,且療效不佳。因此,提高腦腫瘤的放化療靶向性和療效,延長膠質(zhì)瘤患者的生存期已成為研究的熱點(diǎn)。納米靶向輸送系統(tǒng)因其獨(dú)特的理化性質(zhì),可通過載藥高分子和靶向高分子的共組裝,將藥物選擇性地送到病變部位或病變細(xì)胞,提高藥物的生物利用度,降低毒副作用。各種腫瘤靶向的給藥體系成為近年來人們關(guān)注的熱點(diǎn)[1]�？袢〔《�(RVG)是自然界存在的嗜神經(jīng)病毒,很容易越過血腦屏障,侵襲腦組織和神經(jīng)中樞。研究發(fā)現(xiàn),RVG中的29個(gè)氨基酸序列構(gòu)成的嗜神經(jīng)性病毒衍生肽(RVG29-YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG)保留了RVG的嗜神經(jīng)特性。有研究將RVG29鍵合到聚酰胺-胺樹狀聚合物(PAMAM)和聚亞乙胺(PEI)上,用以擔(dān)載和輸送核酸類藥物,具有一定的腦靶向效果,但對細(xì)胞毒類抗癌藥物的腦靶向輸送應(yīng)用未見報(bào)道。葡聚糖可以在肝、脾、腎和消化道被葡聚糖酶降解,毒性極低,用葡聚糖修飾的高分子膠束在體內(nèi)具有類似聚乙二醇(PEG)的“隱形”效果。載藥葡聚糖納米顆�？蓽p少肝臟對藥物的清除,提高在高度血管化的癌變組織中的藥物濃度。在本研究中,我們采用水溶性的葡聚糖作為藥物載體合成了靶向納米膠束M(RVG,PTX),用立體定向技術(shù)建立原位腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型,通過活體成像、激光共聚焦顯微鏡、MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Western Blot、real-time PCR、核磁共振等方法,研究了RVG29靶向納米藥物對腦膠質(zhì)瘤的抑制效果,并探討與放療結(jié)合對C6細(xì)胞生長抑制的增效作用。首先,通過靶向?qū)嶒?yàn)證實(shí)RVG29修飾后納米膠束能通過血腦屏障達(dá)到顱內(nèi),并證實(shí)其靶向作用與RVG29有關(guān)。其次,通過MTT和核磁檢測及生存期統(tǒng)計(jì),證實(shí)靶向納米膠束能夠提高紫杉醇對膠質(zhì)瘤的抑制率,減小顱內(nèi)腫瘤的體積,延長荷瘤動(dòng)物的生存期。同時(shí),納米靶向膠束給藥與體外放療聯(lián)用可減低藥物劑量,提高對膠質(zhì)瘤的抑制率。并進(jìn)一步證明C6細(xì)胞的凋亡伴隨著Caspase家族和Bax的表達(dá)升高和Bcl-xl的表達(dá)下調(diào),以及MDR和P-gp的相應(yīng)變化。本研究結(jié)果將為腦膠質(zhì)瘤等顱內(nèi)病變的治療提供新思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:The incidence of glioma in intracranial malignant tumors was 44%, which was characterized by short course of disease, difficult to cure, short survival time and poor prognosis. The survival time of glioma patients was only 6 ~ 12 months. Surgery, radiotherapy and chemotherapy are the main treatments for glioma, but the surgical treatment can not be completely resected because of its anatomical characteristics. Because of the existence of blood-brain barrier, there are few drugs available for chemotherapy, and the curative effect is not good. Therefore, improving the radio-chemotherapeutic targeting and efficacy of brain tumors and prolonging the survival time of glioma patients has become a hot topic. Because of its unique physical and chemical properties, nano-targeted delivery system can selectively deliver drugs to diseased sites or cells through co-assembly of drug-loaded and targeted polymers, thus increasing the bioavailability of drugs and reducing side effects. Various tumor targeting drug delivery systems have become the focus of attention in recent years [1]. Rabies virus (RVG) is a neurotropic virus that exists in nature. It can easily cross the blood-brain barrier and invade the brain tissue and nerve center. It was found that the neurovirus derived peptide (RVG29-YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG) composed of 29 amino acid sequences in RVG preserved the neurotropic properties of RVG. It has been studied that RVG29 is bonded to polyamide-amine dendrimer (PAMAM) and polyethylamine (PEI) to support and transport nucleic acid drugs, and has a certain brain targeting effect. However, the brain targeted delivery of cytotoxic anticancer drugs has not been reported. Dextran can be degraded by glucanase in liver, spleen, kidney and digestive tract, and its toxicity is very low. The polymer micelles modified with dextran have the "invisible" effect similar to polyethylene glycol (PEG) in vivo. Drug loading dextran nanoparticles can reduce liver drug clearance and increase drug concentration in highly vascularized cancerous tissues. In this study, we synthesized targeted nano-micelle M (RVG,PTX) using water-soluble dextran as drug carrier, and established in situ brain glioma animal model by stereotactic technique. In vivo imaging, confocal laser microscopy, MTT, Flow cytometry (FCM) and Western Blot,real-time PCR, NMR were used to study the inhibitory effect of RVG29 targeting nanopharmaceuticals on glioma and to explore the synergistic effect of combination with radiotherapy on the growth inhibition of C6 cells. Firstly, it was proved by targeting experiment that RVG29 modified nanoparticles could reach the brain through the blood-brain barrier, and that its targeting effect was related to RVG29. Secondly, through MTT, nuclear magnetic detection and survival statistics, it is proved that targeted micelles can improve the inhibition rate of paclitaxel on glioma, reduce the volume of intracranial tumor, and prolong the survival time of tumor bearing animals. At the same time, the combination of nano-targeted micelle administration and in vitro radiotherapy can reduce the dosage of drug and increase the inhibition rate of glioma. It was further demonstrated that the apoptosis of C6 cells was accompanied by the increased expression of Caspase family and Bax, the down-regulation of Bcl-xl expression, and the corresponding changes of MDR and P-gp. The results of this study will provide new ideas and experimental evidence for the treatment of intracranial lesions such as gliomas.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41

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本文編號：2394887