【摘要】：背景與目的胃癌是我國(guó)最常見的高發(fā)腫瘤之—,鑒別能夠用于早期診斷及化療敏感與耐藥的預(yù)后標(biāo)志物具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。金屬硫蛋白2A (Metallothionein, MT2A)和NF-κBB均被認(rèn)為是與腫瘤藥物敏感性相關(guān)的分子,而且以NF-κB信號(hào)通路為靶標(biāo)的治療干預(yù)被認(rèn)為是抑制腫瘤生長(zhǎng)、改善腫瘤化療耐藥的有效舉措。課題組前期研究表明,MT2A在胃癌細(xì)胞與組織中表達(dá)降低。大蒜衍生物己二烯三硫化物(Diallyl Trisulfide, DATS)及其聯(lián)用化療藥多西他賽(Docetaxel, DOC)可通過表觀遺傳機(jī)制上調(diào)MT2A,增加IκB-α表達(dá),抑制NF-κB活性,從而抑制胃癌細(xì)胞體內(nèi)外增殖。這些結(jié)果提示,MT2A在胃癌中起到抑癌基因樣作用,參與調(diào)控NF-κB信號(hào)通路,而且MT2A-NF-KB通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展、檢測(cè)癌癥患者預(yù)后、增強(qiáng)腫瘤化療耐藥敏感性等方面具有重要作用。然而MT2A調(diào)控IKB-a具體機(jī)制尚不清楚。通過序列結(jié)構(gòu)分析,發(fā)現(xiàn)IκB-α基因啟動(dòng)子區(qū)域有一鋅指結(jié)構(gòu)樣基序(]motif),可能是鋅指蛋白Kruppel家族成員,骨髓鋅指1(Myeloid Zinc-Finger 1, MZF1)特異結(jié)合DNA并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要結(jié)構(gòu)域。我們據(jù)此推測(cè)胃癌中MZF1可能作為一新的抑癌基因,與MT2A木目互作用,是MT2A調(diào)控IκB-α的一個(gè)重要分子靶點(diǎn)。本研究通過檢測(cè)分析胃癌細(xì)胞和組織中的MZF1差異表達(dá)與表觀調(diào)控,研究MZF1的生物學(xué)功能,探討MZF1與MT2A的相互作用關(guān)系,以期闡明MT2A/MZF1-NF-kB通路在DATS和DOC抗胃癌效應(yīng)中的分子作用基礎(chǔ),為胃癌患者的個(gè)體化精準(zhǔn)診療提供有效的分子靶標(biāo)。材料與方法采用RT-PCR、qPCR和Western Blot等檢測(cè)分析胃癌組織細(xì)胞中MZF1的表達(dá),以及過表達(dá)或干擾MT2A或MZF1后的MZF1與MT2A表達(dá)變化；通過甲基化特異性PCR、硫化測(cè)序及染色質(zhì)免疫共沉淀-qPCR分析胃癌組織細(xì)胞中MZF1基因的DNA甲基化及組蛋白修飾狀態(tài)；應(yīng)用MTT檢測(cè)、細(xì)胞遷移和侵襲等研究MZF1對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲的影響,探討MZF1在胃癌中的生物學(xué)功能。借助免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀及細(xì)胞免疫熒光等技術(shù)分析MT2A與MZF1的相互關(guān)系。結(jié)果1、在人胃癌細(xì)胞及組織中,MZF1普遍低表達(dá)或不表達(dá),啟動(dòng)子區(qū)CpG島呈現(xiàn)DNA高甲基化狀態(tài),并伴隨著組蛋白乙酰化修飾降低；去甲基化藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)以及去乙酰化酶抑制劑曲古抑菌素A(Trichostation A, TS A)處理可逆轉(zhuǎn)上調(diào)MZF1在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)。2、在人胃癌細(xì)胞系BGC823中過表達(dá)MZF1,可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖能力、侵襲和遷移能力較空載對(duì)照極顯著降低(P0.01)；而在表達(dá)MZF1的人永生化胃細(xì)胞系GES-1中干擾MZF1表達(dá)后,可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力較空載對(duì)照顯著增強(qiáng)(P0.05)。3、BGC823細(xì)胞過表達(dá)MT2A或經(jīng)DATS和DOC誘導(dǎo)處理,均可檢測(cè)出MZF1與MT2A的相互結(jié)合；共聚焦熒光顯微鏡觀察顯示兩者共定位于細(xì)胞核中；染色質(zhì)免疫共沉淀分析提示MZF1與MT2A蛋白均與IκB-α基因的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。4、在BGC823細(xì)胞中,過表達(dá)MT2A, MZF1的表達(dá)上調(diào)；在過表達(dá)MT2A的BGC823細(xì)胞中干擾MT2A后,MZF1的表達(dá)降低；但在過表達(dá)MT2A的細(xì)胞中干擾MZF1,MT2A的表達(dá)未見明顯變化。5、在BGC823, DATS和DOC可誘導(dǎo)MT2A和MZF1的表達(dá)；干擾MT2A, DATS和DOC對(duì)MZF1表達(dá)的誘導(dǎo)作用受到明顯抑制。結(jié)論1、在胃癌細(xì)胞中,MZF1及MT2A呈現(xiàn)表觀沉默現(xiàn)象并受其啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化及組蛋白乙酰化調(diào)控。2、MZF1抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲。3、在胃癌細(xì)胞中,MZF1可與MT2A相互作用,并通過調(diào)控IκB-α的轉(zhuǎn)錄表達(dá)發(fā)揮抑癌基因樣作用。4、MZF1的表達(dá)可能受到MT2A的調(diào)控。5、DATS及DOC可表觀上調(diào)MZF1的表達(dá),進(jìn)而發(fā)揮其抗腫瘤作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2388636