【摘要】：背景與目的胃癌是我國最常見的高發(fā)腫瘤之—,鑒別能夠用于早期診斷及化療敏感與耐藥的預(yù)后標(biāo)志物具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。金屬硫蛋白2A (Metallothionein, MT2A)和NF-κBB均被認(rèn)為是與腫瘤藥物敏感性相關(guān)的分子,而且以NF-κB信號通路為靶標(biāo)的治療干預(yù)被認(rèn)為是抑制腫瘤生長、改善腫瘤化療耐藥的有效舉措。課題組前期研究表明,MT2A在胃癌細(xì)胞與組織中表達(dá)降低。大蒜衍生物己二烯三硫化物(Diallyl Trisulfide, DATS)及其聯(lián)用化療藥多西他賽(Docetaxel, DOC)可通過表觀遺傳機(jī)制上調(diào)MT2A,增加IκB-α表達(dá),抑制NF-κB活性,從而抑制胃癌細(xì)胞體內(nèi)外增殖。這些結(jié)果提示,MT2A在胃癌中起到抑癌基因樣作用,參與調(diào)控NF-κB信號通路,而且MT2A-NF-KB通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展、檢測癌癥患者預(yù)后、增強(qiáng)腫瘤化療耐藥敏感性等方面具有重要作用。然而MT2A調(diào)控IKB-a具體機(jī)制尚不清楚。通過序列結(jié)構(gòu)分析,發(fā)現(xiàn)IκB-α基因啟動子區(qū)域有一鋅指結(jié)構(gòu)樣基序(]motif),可能是鋅指蛋白Kruppel家族成員,骨髓鋅指1(Myeloid Zinc-Finger 1, MZF1)特異結(jié)合DNA并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要結(jié)構(gòu)域。我們據(jù)此推測胃癌中MZF1可能作為一新的抑癌基因,與MT2A木目互作用,是MT2A調(diào)控IκB-α的一個(gè)重要分子靶點(diǎn)。本研究通過檢測分析胃癌細(xì)胞和組織中的MZF1差異表達(dá)與表觀調(diào)控,研究MZF1的生物學(xué)功能,探討MZF1與MT2A的相互作用關(guān)系,以期闡明MT2A/MZF1-NF-kB通路在DATS和DOC抗胃癌效應(yīng)中的分子作用基礎(chǔ),為胃癌患者的個(gè)體化精準(zhǔn)診療提供有效的分子靶標(biāo)。材料與方法采用RT-PCR、qPCR和Western Blot等檢測分析胃癌組織細(xì)胞中MZF1的表達(dá),以及過表達(dá)或干擾MT2A或MZF1后的MZF1與MT2A表達(dá)變化；通過甲基化特異性PCR、硫化測序及染色質(zhì)免疫共沉淀-qPCR分析胃癌組織細(xì)胞中MZF1基因的DNA甲基化及組蛋白修飾狀態(tài)；應(yīng)用MTT檢測、細(xì)胞遷移和侵襲等研究MZF1對胃癌細(xì)胞生長、遷移和侵襲的影響,探討MZF1在胃癌中的生物學(xué)功能。借助免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀及細(xì)胞免疫熒光等技術(shù)分析MT2A與MZF1的相互關(guān)系。結(jié)果1、在人胃癌細(xì)胞及組織中,MZF1普遍低表達(dá)或不表達(dá),啟動子區(qū)CpG島呈現(xiàn)DNA高甲基化狀態(tài),并伴隨著組蛋白乙酰化修飾降低；去甲基化藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)以及去乙酰化酶抑制劑曲古抑菌素A(Trichostation A, TS A)處理可逆轉(zhuǎn)上調(diào)MZF1在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)。2、在人胃癌細(xì)胞系BGC823中過表達(dá)MZF1,可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖能力、侵襲和遷移能力較空載對照極顯著降低(P0.01)；而在表達(dá)MZF1的人永生化胃細(xì)胞系GES-1中干擾MZF1表達(dá)后,可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力較空載對照顯著增強(qiáng)(P0.05)。3、BGC823細(xì)胞過表達(dá)MT2A或經(jīng)DATS和DOC誘導(dǎo)處理,均可檢測出MZF1與MT2A的相互結(jié)合；共聚焦熒光顯微鏡觀察顯示兩者共定位于細(xì)胞核中；染色質(zhì)免疫共沉淀分析提示MZF1與MT2A蛋白均與IκB-α基因的啟動子區(qū)結(jié)合。4、在BGC823細(xì)胞中,過表達(dá)MT2A, MZF1的表達(dá)上調(diào)；在過表達(dá)MT2A的BGC823細(xì)胞中干擾MT2A后,MZF1的表達(dá)降低；但在過表達(dá)MT2A的細(xì)胞中干擾MZF1,MT2A的表達(dá)未見明顯變化。5、在BGC823, DATS和DOC可誘導(dǎo)MT2A和MZF1的表達(dá)；干擾MT2A, DATS和DOC對MZF1表達(dá)的誘導(dǎo)作用受到明顯抑制。結(jié)論1、在胃癌細(xì)胞中,MZF1及MT2A呈現(xiàn)表觀沉默現(xiàn)象并受其啟動子區(qū)DNA甲基化及組蛋白乙�；{(diào)控。2、MZF1抑制胃癌細(xì)胞的生長、遷移和侵襲。3、在胃癌細(xì)胞中,MZF1可與MT2A相互作用,并通過調(diào)控IκB-α的轉(zhuǎn)錄表達(dá)發(fā)揮抑癌基因樣作用。4、MZF1的表達(dá)可能受到MT2A的調(diào)控。5、DATS及DOC可表觀上調(diào)MZF1的表達(dá),進(jìn)而發(fā)揮其抗腫瘤作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;第五屆金屬硫蛋白國際會議將于2004年10月10-13日在北京召開[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2003年05期

2 雍政,何冰,郭軍華;硒與金屬硫蛋白的研究進(jìn)展[J];解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào);2003年04期

3 ;第五屆金屬硫蛋白(Metallothionein,MT)國際會議將于2005年10月8～12日在北京召開。[J];藥物生物技術(shù);2005年03期

4 楊在昌;鎘對小鼠肝腎中鋅分布的影響——金屬硫蛋白的作用[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1979年05期

5 王國欽;胰臟的金屬硫蛋白防止鎘對胰島素分泌的抑制[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1979年05期

6 徐兆發(fā);馮兆良;;鎘金屬硫蛋白[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1983年02期

7 陳水錦;;大鼠各組織對金屬誘導(dǎo)金屬硫蛋白合成的反應(yīng)[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1983年02期

8 金泰異;任錫麟;;金屬硫蛋白測定的進(jìn)展[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1986年01期

9 胥寶會;誘導(dǎo)金屬硫蛋白對放射線損傷的防護(hù)作用——使小鼠致死率下降[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1987年05期

10 程時(shí);;金屬硫蛋白[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1987年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 雍政;何冰;徐卓立;郭軍華;;硒誘導(dǎo)金屬硫蛋白的分離、純化與鑒定[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會論文摘要集（第一部分）[C];2002年

2 蔣與剛;郭長江;高蘭興;顧景范;;鋅誘導(dǎo)金屬硫蛋白合成及其對肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第八次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2000年

3 郭軍華;徐卓立;劉穎;賀衛(wèi)W;茹炳根;;探索一種有機(jī)硒誘導(dǎo)的新型金屬硫蛋白[A];海峽兩岸三地藥理學(xué)學(xué)術(shù)報(bào)告會論文匯編[C];2001年

4 何冰;雍政;徐卓立;郭軍華;;利用蛋白質(zhì)芯片質(zhì)譜分離純化金屬硫蛋白[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會論文摘要集（第一部分）[C];2002年

5 劉林;王建秀;;金屬硫蛋白與多肽相互作用的研究[A];中國化學(xué)會第26屆學(xué)術(shù)年會分析化學(xué)分會場論文集[C];2008年

6 耿乃志;崔燕;;金屬硫蛋白的研究進(jìn)展[A];2009年全國基層優(yōu)秀中醫(yī)表彰大會暨全國第二次民間驗(yàn)方、診療技術(shù)學(xué)術(shù)研討會會議論文集[C];2009年

7 劉樹剛;孔祥英;;鋅對幼鼠腦發(fā)育及金屬硫蛋白表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];四川省營養(yǎng)學(xué)會1997年學(xué)術(shù)會議暨婦幼營養(yǎng)保健學(xué)習(xí)班專題報(bào)告及論文摘要匯編[C];1997年

8 郝守進(jìn);茹炳根;;環(huán)境中鉛的毒性及其解毒機(jī)理的研究[A];Risk Assessment of Toxic Chemicals--Proceedings of CCAST (World Laboratory) Workshop[C];2001年

9 應(yīng)晨江;;金屬硫蛋白促排鉛作用及對微量元素的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第七屆理事會青年工作委員會第三次學(xué)術(shù)會議暨微量營養(yǎng)素與慢性病青年學(xué)者高峰論壇論文集[C];2012年

10 張敬旭;符紹蓮;;金屬硫蛋白對鉛致胚胎氧化損傷的保護(hù)作用[A];第六屆全國優(yōu)生科學(xué)大會論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 羅梅;適量飲用茅臺酒有益于健康與金屬硫蛋白有關(guān)[N];貴州日報(bào);2005年

2 孫英威 呼濤;我國成功獲取金屬硫蛋白[N];中國鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)報(bào);2003年

3 孫國根邋王春;應(yīng)對鎘接觸者“易感”篩選[N];科技日報(bào);2008年

4 三水;“五元一次方程”解讀茅臺[N];中華工商時(shí)報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李景喜;海藻中類金屬硫蛋白/多肽的檢測分析及對金屬誘導(dǎo)響應(yīng)研究[D];中國海洋大學(xué);2015年

2 陳偉強(qiáng);心理應(yīng)激條件下腦金屬硫蛋白的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

3 楊麗芳;金屬硫蛋白的心肌保護(hù)機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

4 陳亮;金屬硫蛋白，金屬硫蛋白抗體與鎘致腎功能損傷[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 于立博;新疆鷹嘴豆中金屬硫蛋白對鉛毒性作用的干預(yù)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

6 帥怡;金屬硫蛋白抗阿霉素心臟毒性作用的基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];四川大學(xué);2007年

7 常秀麗;應(yīng)答蛋白基因表達(dá)在鎘接觸中作為生物標(biāo)志物的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

8 劉秋菊;金屬硫蛋白拮抗血管緊張素Ⅱ/p53通路誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的體內(nèi)體外研究[D];吉林大學(xué);2010年

9 謝東揚(yáng);靈芝中一種DNase的特征和MT基因序列分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2007年

10 黃國健;金屬硫蛋白與銅抗腫瘤作用相互關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王洋;金屬硫蛋白檢測方法的研究[D];吉林大學(xué);2010年

2 何冰;蛋白質(zhì)表達(dá)指紋圖譜研究硒代金屬硫蛋白對放射肺損傷的防護(hù)作用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

3 吳傳松;類金屬硫蛋白產(chǎn)生菌的分離培養(yǎng)及特性研究[D];華中科技大學(xué);2009年

4 王同青;玉米金屬硫蛋白的表達(dá)、純化及其光譜學(xué)特性研究[D];太原理工大學(xué);2016年

5 林舒曄;人髓樣鋅指結(jié)構(gòu)1的表觀調(diào)控及其與金屬硫蛋白2A在抑制胃癌中的相互作用[D];北京交通大學(xué);2016年

6 柳大軍;融合表達(dá)人金屬硫蛋白重組乳酸菌的構(gòu)建及其預(yù)防慢性鉛中毒的應(yīng)用研究[D];暨南大學(xué);2016年

7 鄒海平;重金屬對農(nóng)田蚯蚓體內(nèi)金屬硫蛋白和相關(guān)酶活性的影響[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 蘇郁潔;金屬硫蛋白在原核生物中的表達(dá)及在環(huán)境治理中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2007年

9 王凱;蚯蚓金屬硫蛋白的誘導(dǎo)、測定及硒對銻中毒的解毒機(jī)理[D];河北大學(xué);2013年

10 艾丹丹;銅、鋅、鎘與金屬硫蛋白的結(jié)合特性及其對植物中金屬硫蛋白的脅迫效應(yīng)研究[D];河北大學(xué);2012年

，

本文編號：2388636