【摘要】：本實驗探究乳腺癌MCF-7細胞中干擾PGI的表達對HIF-1α的調(diào)控以及對細胞凋亡的影響。首先,使用慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染構(gòu)建干擾PGI(PGI-si RNA)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,然后使用Hoechst33258染色和流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞的凋亡,隨后,采用RT-PCR檢測PGI、HIF-1α和LDHA基因的表達,Western blotting檢測Bcl-2、Bax、PGI、LDHA、HIF-1α和ERK蛋白的表達。成功構(gòu)建PGI-si RNA的MCF-7穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株后,Hoechst33258染色實驗結(jié)果顯示,PGI-si RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株中出現(xiàn)核固縮、染色質(zhì)凝集等形態(tài)學(xué)改變,FCM結(jié)果亦表明PGI-si RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株發(fā)生細胞凋亡。RT-PCR結(jié)果顯示,PGI-si RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株中PGI、LDHA和HIF-1α基因表達下調(diào);Western blotting結(jié)果顯示,PGI-si RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株中LDHA、HIF-1α、ERK和Bcl-2蛋白表達下調(diào),Bax蛋白表達上調(diào)。以上實驗結(jié)果表明:在乳腺癌MCF-7細胞中,干擾PGI可抑制HIF-1α的表達,同時促進MCF-7細胞凋亡。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the effect of interfering PGI expression on HIF-1 偽 and apoptosis in breast cancer MCF-7 cells. First, the stable cell lines interfering with PGI (PGI-si RNA) were constructed by using lentivirus plasmid transfection, then apoptosis was detected by Hoechst33258 staining and flow cytometry (FCM), and then the expression of PGI,HIF-1 偽 and LDHA genes was detected by RT-PCR. The expression of Bcl-2,Bax,PGI,LDHA,HIF-1 偽 and ERK protein was detected by Western blotting. The results of Hoechst33258 staining showed that nuclear pyknosis, chromatin agglutination and other morphological changes were observed in PGI-si RNA stable transformed cell lines after the successful construction of MCF-7 stably transformed cell lines of PGI-si RNA. FCM results also showed that apoptosis occurred in PGI-si RNA stable cell lines. RT-PCR showed that the expression of PGI,LDHA and HIF-1 偽 genes were down-regulated in PGI-si RNA stably transformed cell lines. Western blotting results showed that the expression of LDHA,HIF-1 偽, ERK and Bcl-2 protein was down-regulated and Bax protein was up-regulated in PGI-si RNA stable cell line. The results showed that interfering with PGI could inhibit the expression of HIF-1 偽 and promote the apoptosis of MCF-7 cells in breast cancer MCF-7 cells.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)干細胞與組織工程研究室重慶醫(yī)科大學(xué);
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31271368)資助
【分類號】：R737.9

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