【摘要】：目的:1.構建U87EGFRvⅢ與wt U87混合培養(yǎng)模型,在不同比例的模型中驗證EGFRvⅢ的促生長作用及其詳細分子機制;進一步在體內實驗和體外實驗中驗證EGFRvⅢ對膠質瘤異質性的驅動作用,為膠質瘤的靶向治療提供新的途徑。2.通過F25P preproinsulin與信號肽酶Spase的特異性結合,從而干擾U87EGFRvⅢ細胞中內質網(wǎng)上外分泌蛋白的合成與裝配過程,抑制U87EGFRvⅢ細胞對周圍細胞的生長支持作用,為靶向治療EGFRvⅢ陽性膠質瘤提供新思路。3.通過干擾內質網(wǎng)上信號肽肽酶SPP及分析其外分泌表達譜,闡明SPP在膠質瘤進展中的分子機制。方法:1.通過臨床標本的不同位點取材,免疫組織化學方法檢測不同位點EGFRvⅢ,EGFR,Ki-67,STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表達水平變化。2.用U87EGFRvⅢ與wt U87混合培養(yǎng),MTT及細胞克隆形成實驗方法檢測不同混合比例水平的增殖變化;Western blot方法檢測STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表達水平變化。3.構建膠質瘤顱內原位模型,研究不同比例EGFRvⅢ的促腫瘤生長效果。4.利用含F(xiàn)25P preproinsulin的慢病毒處理U87EGFRvⅢ,分析其上清液對膠質瘤細胞U87,LN229和U251的表型及功能的影響。5.構建膠質瘤顱內原位動物模型,使用DOX誘導,檢測F25P preproinsulin的體內抑瘤效果。6.用表達si-HM13的慢病毒處理U87EGFRvⅢ細胞,分析其上清液中外分泌蛋白的表達譜及其對U87,LN229和U251細胞表型及功能的影響.7.構建膠質瘤顱內原位動物模型,檢測si-HM13的體內抑瘤效果。結果:1.膠質瘤同一標本中不同位點EGFRvⅢ,EGFR,Ki-67,STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表達存在顯著異質性。2.不同比例U87EGFRvⅢ與wt U87混合培養(yǎng)細胞的增殖速率明顯不同,U87EGFRvⅢ比例為30%時增殖速率達到平臺期。3.體內實驗證實EGFRvⅢ對膠質瘤的生長有驅動作用。4.含F(xiàn)25P preproinsulin慢病毒處理的U87EGFRvⅢ的上清液對U87,LN229和U251的表型及功能改變有明顯的影響。5.膠質瘤顱內模型證實誘導表達F25P preproinsulin能抑制膠質瘤的生長。6.si-HM13慢病毒處理的U87EGFRvⅢ細胞的外分泌表達譜變化明顯,其中TGF-β1變化最為顯著。7.體內實驗證實Lenti-si-HM13能顯著降低小鼠血液中TGF-β1和TGF-α的含量及抑制腫瘤的生長。結論:1.膠質瘤內存在明顯的異質性,EGFRvⅢ對膠質瘤的生長有驅動作用。2.F25P preproinsulin能特異性結合信號肽酶Spase,影響EGFRvⅢ的外分泌蛋白合成。3.體內外研究顯示誘導表達F25P preproinsulin能抑制膠質瘤的生長和轉移。4.Lenti-si-HM13能影響膠質瘤EGFRvⅢ細胞外分泌蛋白在內置網(wǎng)上的合成與裝配,進而引起其表達譜的改變。5.敲低HM13的表達能在小鼠體內抑制膠質瘤的進展。
[Abstract]:Objective: 1. The mixed culture model of U87EGFRv 鈪，

本文編號：2367594