【摘要】：目的:1.構(gòu)建U87EGFRvⅢ與wt U87混合培養(yǎng)模型,在不同比例的模型中驗(yàn)證EGFRvⅢ的促生長(zhǎng)作用及其詳細(xì)分子機(jī)制;進(jìn)一步在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證EGFRvⅢ對(duì)膠質(zhì)瘤異質(zhì)性的驅(qū)動(dòng)作用,為膠質(zhì)瘤的靶向治療提供新的途徑。2.通過(guò)F25P preproinsulin與信號(hào)肽酶Spase的特異性結(jié)合,從而干擾U87EGFRvⅢ細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上外分泌蛋白的合成與裝配過(guò)程,抑制U87EGFRvⅢ細(xì)胞對(duì)周圍細(xì)胞的生長(zhǎng)支持作用,為靶向治療EGFRvⅢ陽(yáng)性膠質(zhì)瘤提供新思路。3.通過(guò)干擾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上信號(hào)肽肽酶SPP及分析其外分泌表達(dá)譜,闡明SPP在膠質(zhì)瘤進(jìn)展中的分子機(jī)制。方法:1.通過(guò)臨床標(biāo)本的不同位點(diǎn)取材,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)不同位點(diǎn)EGFRvⅢ,EGFR,Ki-67,STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表達(dá)水平變化。2.用U87EGFRvⅢ與wt U87混合培養(yǎng),MTT及細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)不同混合比例水平的增殖變化;Western blot方法檢測(cè)STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表達(dá)水平變化。3.構(gòu)建膠質(zhì)瘤顱內(nèi)原位模型,研究不同比例EGFRvⅢ的促腫瘤生長(zhǎng)效果。4.利用含F(xiàn)25P preproinsulin的慢病毒處理U87EGFRvⅢ,分析其上清液對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87,LN229和U251的表型及功能的影響。5.構(gòu)建膠質(zhì)瘤顱內(nèi)原位動(dòng)物模型,使用DOX誘導(dǎo),檢測(cè)F25P preproinsulin的體內(nèi)抑瘤效果。6.用表達(dá)si-HM13的慢病毒處理U87EGFRvⅢ細(xì)胞,分析其上清液中外分泌蛋白的表達(dá)譜及其對(duì)U87,LN229和U251細(xì)胞表型及功能的影響.7.構(gòu)建膠質(zhì)瘤顱內(nèi)原位動(dòng)物模型,檢測(cè)si-HM13的體內(nèi)抑瘤效果。結(jié)果:1.膠質(zhì)瘤同一標(biāo)本中不同位點(diǎn)EGFRvⅢ,EGFR,Ki-67,STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表達(dá)存在顯著異質(zhì)性。2.不同比例U87EGFRvⅢ與wt U87混合培養(yǎng)細(xì)胞的增殖速率明顯不同,U87EGFRvⅢ比例為30%時(shí)增殖速率達(dá)到平臺(tái)期。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)EGFRvⅢ對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)有驅(qū)動(dòng)作用。4.含F(xiàn)25P preproinsulin慢病毒處理的U87EGFRvⅢ的上清液對(duì)U87,LN229和U251的表型及功能改變有明顯的影響。5.膠質(zhì)瘤顱內(nèi)模型證實(shí)誘導(dǎo)表達(dá)F25P preproinsulin能抑制膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)。6.si-HM13慢病毒處理的U87EGFRvⅢ細(xì)胞的外分泌表達(dá)譜變化明顯,其中TGF-β1變化最為顯著。7.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)Lenti-si-HM13能顯著降低小鼠血液中TGF-β1和TGF-α的含量及抑制腫瘤的生長(zhǎng)。結(jié)論:1.膠質(zhì)瘤內(nèi)存在明顯的異質(zhì)性,EGFRvⅢ對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)有驅(qū)動(dòng)作用。2.F25P preproinsulin能特異性結(jié)合信號(hào)肽酶Spase,影響EGFRvⅢ的外分泌蛋白合成。3.體內(nèi)外研究顯示誘導(dǎo)表達(dá)F25P preproinsulin能抑制膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。4.Lenti-si-HM13能影響膠質(zhì)瘤EGFRvⅢ細(xì)胞外分泌蛋白在內(nèi)置網(wǎng)上的合成與裝配,進(jìn)而引起其表達(dá)譜的改變。5.敲低HM13的表達(dá)能在小鼠體內(nèi)抑制膠質(zhì)瘤的進(jìn)展。
[Abstract]:Objective: 1. The mixed culture model of U87EGFRv 鈪，

本文編號(hào)：2367594