【摘要】：目的:乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤,近年來(lái)發(fā)病率逐年上升,已躍居女性惡性腫瘤的第一位。手術(shù)切除輔以術(shù)后化療和內(nèi)分泌治療是乳腺癌治療的主要方法。近年來(lái),乳腺癌的分子機(jī)制研究和治療取得了巨大進(jìn)展,但乳腺癌仍然嚴(yán)重危害女性的生命及生活質(zhì)量,其中腫瘤局部擴(kuò)散、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后和限制生存率的主要原因。深入研究乳腺癌的分子發(fā)病機(jī)制,探索浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的機(jī)制,尋找新的抗癌策略,可以為乳腺癌患者尤其是缺乏有效治療的患者提供新的靶向治療,有效提高病人預(yù)后及生存率。Nek9是Nek家族成員之一,Nek9在中心粒復(fù)制、分離和紡錘體的形成等細(xì)胞周期過(guò)程中起重要作用,Nek9的異常表達(dá)也可以引起胞質(zhì)的異常分裂及同源染色體的錯(cuò)誤分離,目前為止,關(guān)于Nek9的相關(guān)研究,尤其是其在腫瘤中作用的報(bào)道甚少。本研究擬檢測(cè)Nek9在乳腺癌及常見(jiàn)良性乳腺疾病中的表達(dá)情況,研究其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,并初步探討其作用機(jī)制。方法:收集乳腺癌及常見(jiàn)良性乳腺病變標(biāo)本,并完善相關(guān)臨床病理資料。采用免疫組化方法檢測(cè)浸潤(rùn)性乳腺癌及正常乳腺組織、乳腺增生、纖維腺瘤、導(dǎo)管內(nèi)癌中NEK9蛋白的表達(dá)情況,比較同一病例浸潤(rùn)性癌與導(dǎo)管上皮增生、導(dǎo)管內(nèi)癌、浸潤(rùn)癌以及淋巴結(jié)內(nèi)轉(zhuǎn)移癌之間的表達(dá)差異,并分析NEK9表達(dá)水平與臨床病理指標(biāo)的之間的關(guān)系。分別將siRNA和含Nek9的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)激素受體陽(yáng)性乳腺癌MCF-7細(xì)胞系,將含Nek9的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468,Western blot檢測(cè)Nek9的干擾效率和過(guò)表達(dá)效率。EdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞增殖能力的變化;遷移與浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)觀察Nek9對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移浸潤(rùn)能力的影響;通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Nek9對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:在316例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中,NEK9的表達(dá)與組織學(xué)級(jí)別(p0.0001)、腫瘤大小(p=0.0087)、HER-2擴(kuò)增(p=0.0016)、p53 突變(p0.000l)、ki67 高表達(dá)(p=0.0020)顯著相關(guān);與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān),結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.0001);三陰性乳腺癌中NEK9表達(dá)降低或缺失明顯高于其他分子亞型(p0.0001)。我們發(fā)現(xiàn)激素受體陽(yáng)性乳腺癌中,導(dǎo)管內(nèi)癌、浸潤(rùn)性癌、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中NEK9表達(dá)依次降低(p0.0001),但導(dǎo)管內(nèi)癌與導(dǎo)乳腺增生之間NEK9表達(dá)沒(méi)有差異。體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)沉默Nek9可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和浸潤(rùn),抑制凋亡,同時(shí)導(dǎo)致處于G2和M期的腫瘤細(xì)胞增多,同樣的,將Nek9的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系中,細(xì)胞的遷移浸潤(rùn)能力受到抑制,細(xì)胞增殖能力下降,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,同時(shí)處于G2和M期的細(xì)胞減少,影響細(xì)胞周期過(guò)程。結(jié)論:1.在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中,NEK9的表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)級(jí)別、HER-2擴(kuò)增、p53功能失常、高增殖指數(shù)呈負(fù)相關(guān),與ER、PR的表達(dá)水平呈正相關(guān)。2.NEK9表達(dá)降低或缺失多見(jiàn)于三陰性乳腺癌,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)亦顯示封閉Nek9促進(jìn)三陰性乳腺癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),Nek9或參與了三陰性乳腺癌的發(fā)病。3.同一病例中,從導(dǎo)管內(nèi)癌到浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌到腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,NEK9的表達(dá)逐步下降,體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)干擾Nek9可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移和浸潤(rùn),提示Nek9在乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。4.NEK9表達(dá)異�？赡芡ㄟ^(guò)抑制細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期G2/M檢測(cè)點(diǎn)失控,從而促進(jìn)細(xì)胞增殖,參與三陰性乳腺癌的發(fā)生,并在乳腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮作用。5.NEK9有望成為新的生物標(biāo)記物,幫助發(fā)現(xiàn)新的乳腺癌分子亞型,為乳腺癌的診斷、治療、預(yù)后提供新的研究依據(jù)。
[Abstract]:Objective: Breast cancer is a common malignant tumor of women. In recent years, the incidence of breast cancer has increased year by year. Surgical removal and postoperative chemotherapy and endocrine therapy are the main methods of the treatment of breast cancer. In recent years, the molecular mechanism of breast cancer has made great progress in the research and treatment, but the breast cancer still seriously harms the life and quality of life of the female, in which the local diffusion of the tumor, the metastasis of the lymph node and the metastasis of distant organs are the main causes of the prognosis and the limited survival rate of the patients. To study the molecular pathogenesis of breast cancer, to explore the mechanism of invasion and metastasis, to find a new anti-cancer strategy, to provide new targeted therapy for patients with breast cancer, especially those who lack effective treatment, and to effectively improve the prognosis and survival rate of the patients. Nek9 is one of the Nek family members, and Nek9 plays an important role in the process of cell cycle such as the replication, separation and spindle formation of the central granule. The abnormal expression of Nek9 can also cause the abnormal division of the cytoplasm and the error separation of the homologous chromosomes. So far, the related research on Nek9, in particular its role in the tumor. Objective To study the expression of Nek9 in breast cancer and common benign breast diseases, and to study the role of Nek9 in the development of breast cancer. Methods: The specimens of breast cancer and common benign breast lesions were collected and the relevant clinical and pathological data were improved. The expression of NEK9 protein in invasive breast cancer and normal breast tissue, breast hyperplasia, fibroadenoma and intraductal carcinoma was detected by immunohistochemistry. The relationship between the expression level of NEK9 and the clinical pathological index was analyzed. The siRNA and the plasmid containing Nek9 were transiently transfected into the human breast cancer MCF-7 cell line of the hormone receptor, and the plasmid containing Nek9 was transfected into the three-negative breast cancer cell line MDA-MB-468, and the interference efficiency and the overexpression efficiency of the Nek9 were detected by Western blot. The effects of Nek9 on cell cycle and cell apoptosis were measured by flow cytometry. Results: In 316 cases of invasive ductal carcinoma, the expression of NEK9 was significantly related to the histological grade (p0.01), tumor size (p = 0.0087), HER-2 amplification (p = 0. 0016), p53 mutation (p0. 000l), ki67 high expression (p = 0.0020), negative correlation with ER and PR expression and statistical significance (p0.01); The decrease or deletion of NEK9 in three-negative breast cancer was significantly higher than that of other molecular subtypes (p0.01). In the case of hormone receptor-positive breast cancer, the expression of NE9 in the ductal carcinoma, invasive carcinoma and axillary lymph node metastasis was decreased in turn (p0.01), but there was no difference in the expression of NEK9 between the intraductal carcinoma and the mammary gland hyperplasia. In vitro experiments, it is confirmed that the silence Nek9 can promote cell proliferation, migration and infiltration, inhibit the apoptosis, and at the same time lead to the increase of the tumor cells in the G2 and M phase, and the same, the plasmid of the Nek9 is transiently transfected into the breast cancer cell line, the migration and infiltration capacity of the cells is inhibited, The cell proliferation ability is decreased, the cell apoptosis is promoted, and the cells in the G2 and M phase are reduced and the cell cycle process is affected. Conclusion: 1. In the breast invasive ductal carcinoma, the expression of NEK9 was negatively correlated with the tumor size, the histological grade, HER-2 amplification, the abnormal p53 function and the high proliferation index, which was positively correlated with the expression level of ER and PR. The cell experiment also revealed that the closure of Nek9 promoted the growth of three-negative breast cancer cells, Nek9, or the onset of three-negative breast cancer. In the same case, the expression of NEK9 was gradually decreased from the intraductal carcinoma to the invasive ductal carcinoma to the axillary lymph node metastasis, and the in vitro experiment also confirmed that the interference with Nek9 could promote the migration and infiltration of breast cancer cells, It is suggested that Nek9 plays an important role in the invasion and metastasis of breast cancer. 5. NEK9 is expected to be a new biomarker to help discover new molecular subtypes of breast cancer and provide a new basis for the diagnosis, treatment and prognosis of breast cancer.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2363371