【摘要】：【目的】探討TGF-β1調(diào)控的mi RNA在三陰性乳腺癌(TNBC)惡性演進(jìn)中的生物學(xué)功能和分子機制,為TNBC的臨床診斷、治療和預(yù)后評估提供新的生物標(biāo)志物和新的分子治療靶點�！痉椒ā康谝徊糠�:1、應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中microRNA基因芯片篩選的五種TGF-β1調(diào)控的miRNA表達(dá)量。2、利用外源性TGF-β1細(xì)胞因子刺激五種不同侵襲性的乳腺癌細(xì)胞株,檢測miR-196a-3p的表達(dá)水平與各細(xì)胞株侵襲性的相關(guān)性。3、應(yīng)用Transwell實驗檢測過表達(dá)miR-196a-3p的MDA-MB-231細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。4、應(yīng)用MTT實驗檢測過表達(dá)miR-196a-3p的MDA-MB-231細(xì)胞增殖水平的改變。第二部分:1、應(yīng)用實時熒光定量PCR篩選出外源性TGF-β1細(xì)胞因子刺激下表達(dá)水平升高的miR-196a-3p候選靶基因。2、應(yīng)用實時熒光定量PCR和Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染miR-196a-3p模擬物后,MDA-MB-231細(xì)胞中候選靶基因ZNF280B與NRP2 mRNA和蛋白水平的表達(dá)改變。3、應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染不同濃度梯度的miR-196a-3p模擬物后,MDA-MB-231細(xì)胞中候選靶基因NRP2的表達(dá)水平變化。4、應(yīng)用熒光素酶雙報告基因系統(tǒng)驗證miR-196a-3p對NRP2的3’-UTR是否具有抑制調(diào)控作用。第三部分:1、應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測NRP2 siRNA對MDA-MB-231細(xì)胞中NRP2表達(dá)水平的抑制效率。2、應(yīng)用Transwell實驗檢測低表達(dá)NRP2的MDA-MB-231細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。3、應(yīng)用MTT實驗檢測低表達(dá)NRP2的MDA-MB-231細(xì)胞增殖水平的改變。第四部分:1、構(gòu)建裸鼠移植瘤模型,檢測miR-196a-3p對TNBC移植瘤生長的影響。2、構(gòu)建TNBC肺轉(zhuǎn)移模型,檢測miR-196a-3p對TNBC肺轉(zhuǎn)移的影響。3、應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測乳腺癌組織與正常乳腺組織中mi R-196a-3p表達(dá)水平的差異。4、應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測不同分子亞型的乳腺癌中miR-196a-3p表達(dá)水平的差異。【結(jié)果】第一部分:1、miR-196a-3p在MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞之間差異性表達(dá)最明顯。2、隨著乳腺癌細(xì)胞株侵襲性逐漸增強,miR-196a-3p的表達(dá)水平逐漸下降。在侵襲性最強的MDA-MB-231細(xì)胞中,其表達(dá)水平最低。3、高表達(dá)的miR-196a-3p能夠抑制MDA-MB-231細(xì)胞的遷移和侵襲能力。4、高表達(dá)的miR-196a-3p對MDA-MB-231細(xì)胞的增殖能力沒有影響。第二部分:1、在外源性TGF-β1細(xì)胞因子刺激下,MDA-MB-231細(xì)胞中ZNF280B和NRP2的表達(dá)水平升高。2、在MDA-MB-231細(xì)胞中,只有NRP2 mRNA和蛋白表達(dá)水平與高表達(dá)的miR-196a-3p呈負(fù)相關(guān)。3、隨著MDA-MB-231細(xì)胞中miR-196a-3p模擬物轉(zhuǎn)染濃度的升高,候選靶基因NRP2的表達(dá)水平逐漸下降。4、miR-196a-3p能夠與靶基因NRP2的3’-UTR特異性位點互補配對結(jié)合,從而發(fā)揮對NRP2的抑制調(diào)控作用。第三部分:1、NRP2 siRNA顯著抑制MDA-MB-231細(xì)胞中NRP2的表達(dá)水平。2、NRP2 siRNA能夠抑制MDA-MB-231細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3、NRP2siRNA對MDA-MB-231細(xì)胞的增殖能力沒有影響。第四部分:1、miR-196a-3p對TNBC移植瘤的生長沒有影響。2、miR-196a-3p顯著抑制TNBC肺轉(zhuǎn)移進(jìn)程。3、乳腺癌組織中miR-196a-3p呈低表達(dá)狀態(tài)。4、miR-196a-3p在基底樣型乳腺癌中表達(dá)最低�！窘Y(jié)論】在TNBC發(fā)展過程中,腫瘤微環(huán)境的TGF-β1濃度升高,抑制了下游miR-196a-3p的表達(dá),促使miRNA對癌基因NRP2的調(diào)控抑制作用消失,靶基因NRP2表達(dá)水平得以上升,腫瘤細(xì)胞獲得更強的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,從而加速了TNBC的肺轉(zhuǎn)移進(jìn)程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：2362896