發(fā)布時(shí)間：2018-11-28 10:09

【摘要】：目的： 制備FA-BSA修飾的高分子聚合物磁性膠束作為腫瘤特異性靶向磁共振對(duì)比劑,用于腫瘤靶向磁共振成像。 方法： 1.合成：(1)采用化學(xué)共沉淀法及油酸修飾制備單分散的磁性納米粒子(SPIONs);(2)采用自由基聚合法合成陽(yáng)離子兩親高分子聚合物(poly(HFMA-co-MOTAC)-g-PEGMA);(3)采用自組裝技術(shù)制備陽(yáng)離子高分子聚合物磁性膠束(簡(jiǎn)稱(chēng)“未修飾的磁性膠束”)：(4)陽(yáng)離子磁性膠束與FA-BSA通過(guò)靜電相互作用最終合成FA-BSA修飾的磁性膠束。 2.表征：(1)使用'H NMR觀察兩親高分子聚合物的化學(xué)組成,使用FTIR觀察磁性納米粒子、高分子聚合物和FA-BSA修飾的磁性膠束的化學(xué)結(jié)構(gòu)；(2)電鏡觀察磁性膠束的物理形態(tài)和大小,DLS檢測(cè)磁性膠束的水合粒徑及分布；(3)使用熱重分析磁性膠束的載鐵含量,繪制磁滯回線觀察所制備膠束的磁性特點(diǎn)；(4)用3T磁共振掃描機(jī)及腕關(guān)節(jié)線圈,采用多回波T2WI磁共振成像方法檢測(cè)磁性膠束的橫向弛豫率。 3.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：(1)使用MTT法檢測(cè)磁性膠束的細(xì)胞毒性；(2)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)：將不同濃度的FA-BSA修飾的磁性膠束和未修飾的磁性膠束分別與人肝癌細(xì)胞Bel-7402(葉酸受體陽(yáng)性表達(dá))和Hep3B(葉酸受體陰性表達(dá))共培養(yǎng),其中未修飾的磁性膠束作為對(duì)照,分別采用磁共振成像、細(xì)胞鐵含量測(cè)定、普魯士藍(lán)染色的方法,對(duì)于兩種腫瘤細(xì)胞對(duì)兩種磁性膠束的攝取量進(jìn)行定性、定量及病理分析。 4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：(1)制備裸鼠肝癌皮下瘤模型；(2)載瘤動(dòng)物活體磁共振成像：尾靜脈注射四種不同的造影劑,包括T1對(duì)比劑Gd-DTPA,T2對(duì)比劑Feridex,以及合成的未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束,觀察所制備的FA-BSA修飾的磁性膠束對(duì)載瘤動(dòng)物活體磁共振成像的效果。其中釓、菲立磁與單純磁性膠束作為對(duì)照。(3)組織化學(xué)分析：對(duì)肝臟和腫瘤組織進(jìn)行鐵特異性普魯士藍(lán)染色,定性分析磁性膠束在肝臟和腫瘤組織中的分布和含量；(4)腫瘤組織鐵定量測(cè)定,載瘤裸鼠尾靜脈注射未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束,24h后定量測(cè)定腫瘤組織的鐵含量。 結(jié)果： 1.成功合成未修飾的磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束； 2.表征：(1)1H NMR, FTIR結(jié)果從化學(xué)結(jié)構(gòu)上證明磁性膠束合成成功；(2)電鏡顯示所合成的磁性膠束呈球形的殼-核結(jié)構(gòu),DLS測(cè)得所合成的未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾磁性膠束平均水合粒徑分別為161.5nm(PDI=0.21)、196.1nm(PDI=0.26);(3)熱重分析未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾磁性膠束的氧化鐵含量分別為27.5wt%、19.2wt%；磁滯回線測(cè)得二者的飽和磁化強(qiáng)度分別為13.9emu/g、5.5emu/g;(4)采用多回波T2WI磁共振掃描分析測(cè)定未修飾的磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束的橫向弛豫率分別為243.9mM-1s-1、179.5mM-1s-1。 3.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：(1)MTT法檢測(cè)不同濃度兩種磁性膠束(從25μg/mL到100μg/mL)與正常肝細(xì)胞孵育24,48h,細(xì)胞活性均在80%以上,說(shuō)明兩種磁性膠束沒(méi)有細(xì)胞毒性,可應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)；(2)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn),無(wú)論是葉酸受體陽(yáng)性的Bcl-7402細(xì)胞,還是葉酸受體陰性的Hep3B細(xì)胞,兩者對(duì)FA-BSA修飾的磁性膠束的攝取均高于未修飾的磁性膠束；但是對(duì)于FA-BSA修飾的磁性膠束,Bel-7402的攝取量高于Hep3B細(xì)胞對(duì)其的攝取量：而對(duì)未修飾的磁性膠束,兩種腫瘤細(xì)胞Bel-7402、Hep3B的攝取率基本相同：Hep3B、Bel-7402細(xì)胞對(duì)未修飾的磁性膠束攝取率分別為(6.174±0.19)%,(6.43±0.45)%：Hep3B、Bel-7402細(xì)胞對(duì)FA-BSA修飾的磁性膠束攝取率分別為(8.83±0.41)%,(12.07+1.29)%。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：(1)尾靜脈注射對(duì)比劑后1h-24h, FA-BSA修飾的磁性膠束實(shí)驗(yàn)組皮下瘤T2信號(hào)降低最明顯,而對(duì)照組(未修飾的磁性膠束及Feridex)腫瘤信號(hào)改變程度較小。(2)肝臟普魯士藍(lán)染色結(jié)果表明Feridex在肝臟沉積較多,未修飾的磁性膠束在肝臟沉積較少,而FA-BSA修飾的磁性膠束在肝臟無(wú)明顯沉積。腫瘤普魯士藍(lán)染色結(jié)果表明FA-BSA修飾的磁性膠束在腫瘤組織的聚集明顯高于未修飾的磁性膠束：而Feridex組僅僅在腫瘤組織血管內(nèi)可以看到少許藍(lán)色顆粒,作為陰性對(duì)照Gd-DTPA組在腫瘤組織沒(méi)有看到藍(lán)色顆粒。(3)腫瘤組織鐵含量測(cè)定：腫瘤組織對(duì)未修飾的磁性膠束和FA-BSA修飾的磁性膠束的平均攝取率分別為(1.54±0.041)%,(2.91±0.035)%。 結(jié)論： 1.成功制備高分子磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束； 2.體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均說(shuō)明FA-BSA修飾的磁性膠束具有很強(qiáng)的磁共振成像能力,并且能顯著增加腫瘤細(xì)胞與腫瘤組織對(duì)磁性膠束的攝取,可以作為高表達(dá)葉酸受體的腫瘤的靶向?qū)Ρ葎?3.未修飾的高分子磁性膠束也有一定的腫瘤靶向作用和磁共振成像效果。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R730.4

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1 李歡;FA-BSA修飾磁性膠束的制備及其應(yīng)用[D];華中科技大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2362537