發(fā)布時間：2018-11-28 07:52

【摘要】：背景與目的:乳腺癌是女性的第一位好發(fā)腫瘤。早期診療效果較好,但一旦發(fā)生轉移則嚴重影響患者的生存時間與生活質量。骨骼,特別是胸骨、脊柱是乳腺癌首要的轉移部位,一旦發(fā)生骨轉移則無有效治愈方法。目前乳腺癌骨轉移的治療方案一般采用姑息治療或手術治療,以改善癥狀為主,尚無治愈方法。乳腺癌骨轉移后會導致一系列骨相關事件,包括病理性骨折、神經(jīng)脊髓壓迫、高鈣血癥、骨痛等,嚴重影響患者的生存時間與生存質量。乳腺癌骨轉移后一般表現(xiàn)為溶骨性病變,但是乳腺癌細胞并不能直接引起溶骨。骨重塑依賴于成骨細胞所介導的成骨作用與破骨細胞介導的溶骨作用相互協(xié)調,乳腺癌骨轉移破壞了正常的骨重塑平衡,進而引起溶骨性病變。在這過程中腫瘤細胞分泌多種因子調控成骨與破骨細胞的生理活動,目前已發(fā)現(xiàn)腫瘤可分泌RANKL、PThrP、TGF-?、IL等多種因子促進破骨細胞分化成熟及其介導的骨吸收,但腫瘤細胞對成骨細胞分化的調控作用尚不清楚。Semaphorin 4D(Sema 4D)是一類軸突引導生長因子,近年來發(fā)現(xiàn)其在肺癌、前列腺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中高表達,與腫瘤的惡性進展密切相關。2011年日本學者發(fā)現(xiàn)小鼠破骨細胞可分泌Sema 4D調控成骨細胞的分化與遷移,在Sema 4D-/-小鼠成骨細胞分化與遷移能力增強,表明Sema 4D除了參與軸突引導、腫瘤進展等,還參與骨代謝調控。因此我們假設,乳腺癌來源的Sema 4D在乳腺癌骨轉移所引起的成骨抑制及腫瘤進展中發(fā)揮重要作用。本課題通過shRNA干擾表達、Transwell共培養(yǎng)模擬乳腺癌骨轉移微環(huán)境等方法,研究Sema 4D在乳腺癌骨轉移中對乳腺癌細胞自身及成骨細胞分化的作用與可能機制,為乳腺癌骨轉移防治提供新的理論基礎。方法:1.通過實時熒光定量PCR、蛋白免疫印跡實驗、細胞免疫熒光等方法檢測Sema4D在乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7細胞系的表達,篩選Sema 4D高表達細胞細胞系。2.sh RNA慢病毒轉染Sema 4D高表達乳腺癌細胞系,嘌呤霉素篩選、擴增,實時熒光定量PCR、蛋白免疫印跡實驗、細胞免疫熒光等方法確定干擾效率,建立穩(wěn)定的Sema 4D低表達乳腺癌細胞系。3.通過CCK-8、Transwell遷移實驗、劃痕實驗、FCM流式周期檢測干擾Sema 4D表達對乳腺癌MDA-MB-231細胞系增殖、遷移及周期的影響。4.通過Transwell共培養(yǎng)模擬乳腺癌骨轉移微環(huán)境,應用實時熒光定量PCR、堿性磷酸酶染色、茜素紅染色觀察Sema 4D干擾前后乳腺癌細胞調控成骨前體細胞分化能力的變化,以明確Sema 4D在乳腺癌溶骨性骨損害中的作用。5.通過蛋白免疫印跡實驗檢測Transwell共培養(yǎng)下Sema 4D干擾前后乳腺癌細胞調控成骨前體細胞AKT、p-AKT表達的變化,確定Sema 4D作用的可能機制。結果:1.Sema 4D在高侵襲性乳腺癌細胞系MDA-MB-231中m RNA及蛋白表達表達均明顯高于低侵襲性乳腺癌細胞系MCF-7;2.Sema 4D sh RNA轉染后乳腺癌MDA-MB-231細胞Sema 4D m RNA及蛋白表達水平明顯降低,成功建立Sema 4D干擾表達乳腺癌細胞模型;3.干擾Sema 4D表達可明顯抑制乳腺癌細胞系的增殖、遷移及細胞周期;4.乳腺癌細胞與成骨細胞共培養(yǎng)體系中,乳腺癌細胞可明顯抑制成骨前體細胞的分化,干擾Sema 4D表達后,乳腺癌細胞系對成骨分化的抑制效應明顯減弱;5.乳腺癌細胞明顯抑制成骨前體細胞AKT的磷酸化水平,沉默Sema 4D表達后,成骨前體細胞AKT磷酸化表達水平明顯增高。結論:1.Sema 4D在高侵襲性乳腺癌MDA-MB-231細胞系中高表達;2.Sema 4D sh RNA可有效干擾乳腺癌MDA-MB-231細胞Sema 4D表達;3.Sema 4D可促進乳腺癌細胞增殖、遷移及細胞周期,在促進乳腺癌惡性進展中發(fā)揮重要作用;4.干擾Sema 4D表達后,乳腺癌細胞對成骨細胞分化的抑制效應減弱,Sema 4D在乳腺癌抑制成骨分化效應中發(fā)揮部分作用;5.乳腺癌來源的Sema 4D可能通過下調AKT磷酸化,進而抑制成骨細胞分化。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉燕,權瑞;乳腺癌骨轉移的放射治療35例[J];中國腫瘤臨床與康復;2000年03期

2 陳輝利,趙青梅,杜光祖;乳腺癌骨轉移3年以上存活病例分析[J];華南國防醫(yī)學雜志;2000年01期

3 巨愛平;乳腺癌骨轉移12例綜合治療臨床觀察[J];臨床腫瘤學雜志;2001年01期

4 蔣國勤;乳腺癌骨轉移模型的建立[J];中國普外基礎與臨床雜志;2001年05期

5 王躍珍,孫曉江,劉林林,孫寶勝,呂鵬;208例乳腺癌骨轉移相關因素分析[J];中國實驗診斷學;2004年04期

6 柴楓;;乳腺癌骨轉移86例回顧性分析[J];實用醫(yī)藥雜志;2006年05期

7 徐海濱;胡祖健;胡望華;史紅仙;何俊玲;黃建;;乳腺癌骨轉移綜合治療初探[J];中華乳腺病雜志(電子版);2007年01期

8 葉謙;;100例乳腺癌患者核素骨顯像結果分析[J];實用醫(yī)技雜志;2007年09期

9 周圍;周恩相;王澤強;郭瓊;;乳腺癌骨轉移57例回顧性分析[J];實用醫(yī)藥雜志;2007年05期

10 鄔健明;張勇;王偉;;乳腺癌骨轉移致股骨頸病理性骨折1例報告[J];西南軍醫(yī);2008年03期

相關會議論文 前10條

1 魏志真;董峰;;乳腺癌骨轉移的臨床特點分析[A];中華醫(yī)學會放射醫(yī)學與防護學分會第三次全中國青年學術交流會論文摘要匯編[C];2001年

2 魏志真;董峰;;乳腺癌骨轉移的臨床特點分析[A];中華醫(yī)學會放射醫(yī)學與防護學分會第三次全國中青年學術交流會論文匯編[C];2001年

3 徐海濱;胡祖健;胡望華;史紅仙;何俊玲;黃建;;乳腺癌骨轉移綜合治療初探[A];2005年浙江省外科學術會議論文匯編[C];2005年

4 蔡鋼;陳佳藝;朱驥;俞曉立;章真;郭小毛;胡超蘇;;乳腺癌骨轉移的放射治療和預后因素[A];2007第六屆全國放射腫瘤學學術年會論文集[C];2007年

5 蔡鋼;陳佳藝;朱驥;俞曉立;章真;郭小毛;胡超蘇;;乳腺癌骨轉移的放射治療和預后因素[A];2007第六屆全國放射腫瘤學學術年會論文集[C];2007年

6 劉兆U，

本文編號：2362268