【摘要】：結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常見的癌癥之一,是第四大致死性癌癥。每年大約有100萬成人罹患結(jié)直腸癌,大約50萬人死于結(jié)直腸癌。在世界范圍內(nèi)結(jié)直腸癌發(fā)生率變化很大,這主要取決于生活方式、環(huán)境和基因型等因素。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)了很多結(jié)直腸癌的致病因素,不可改變的致病因素包括年齡、家族史、炎癥性腸道疾病,而可以預(yù)防的致病因素包括過量飲食、大量飲酒、食肉過多、高脂飲食、吸煙、經(jīng)濟發(fā)展水平低和久坐等不良的生活方式。結(jié)直腸癌的預(yù)后情況主要依賴于初次診斷時所處的發(fā)展階段。早期診斷為結(jié)直腸癌的人群中,5年生存期可達(dá)90%,而發(fā)生轉(zhuǎn)移的人群中5年生存期只有12%。由于結(jié)直腸癌的典型癥狀不明顯,結(jié)直腸癌的診斷主要依賴于篩查。在過去的20年中,引入了內(nèi)窺鏡檢查、排泄物檢查、血液檢測、鋇劑灌腸檢查等篩查項目,使得結(jié)直腸癌的早期診斷率得以提高,使許多國家結(jié)直腸癌的發(fā)病率和致死率降低。然而不幸的是,即使是進行有效的管理與統(tǒng)籌,也只有不到40%的結(jié)直腸癌患者能夠被早期診斷出來。腫瘤的一個重要特征是發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移,而腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的機制現(xiàn)在仍然未完全闡明。復(fù)雜的腫瘤遷移過程分為多個時期,包括周圍組織的侵襲、脈管系統(tǒng)的內(nèi)滲、循環(huán)系統(tǒng)的移位、侵入遠(yuǎn)端薄壁組織(肝臟、肺等)、微小轉(zhuǎn)移的建立、最終遠(yuǎn)隔臟器或組織形成肉眼可見的實體腫瘤。在因結(jié)直腸癌相關(guān)的死亡中,大約有90%的人是由于腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；研究者對結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展、遷移過程中的信號通路的基因和不同的因子進行了大量而深入的研究,取得了初步的結(jié)果。近期的研究表明,miRNA在結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用。miRNA是一類小的內(nèi)源性的調(diào)控RNA,它能夠在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控目的基因的表達(dá),50%以上的miRNA存在于染色體上的脆性位點,在腫瘤的發(fā)生時這些脆性位點會發(fā)生改變。隨著miRNA在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過程中作用的深入研究,對揭示結(jié)直腸癌的預(yù)后及分子機制將會產(chǎn)生重要意義。為此我們設(shè)計了"miRNA-134在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義研究”課題。本論文首先比較了結(jié)直腸癌組織與癌旁組織、正常人血清和結(jié)直腸癌患者血清、正常細(xì)胞系和結(jié)直腸癌細(xì)胞系miR-134(miRNA-134)表達(dá)水平的變化,并發(fā)現(xiàn)miR-134在結(jié)直腸癌組織、結(jié)直腸癌患者血清和結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)均顯著降低。然后探索了miR-134對細(xì)胞增殖、凋亡的影響。通過實驗了解miR-134的過表達(dá)和抑制內(nèi)源性miR-134表達(dá)兩方面對細(xì)胞增殖和凋亡的影響,驗證miR-134 mimics和miR-134 inhibitor的表達(dá)效果。結(jié)果表明：miR-134 mimics能夠在細(xì)胞內(nèi)有效地表達(dá)miR-134,而miR-134 inhibitor能夠有效抑制內(nèi)源性miR-134的表達(dá)。通過轉(zhuǎn)染miR-134 mimics將miR-134過表達(dá),抑制了細(xì)胞的增殖,促進了細(xì)胞的凋亡。而通過轉(zhuǎn)染miR-134 inhibitor的方法抑制內(nèi)源性miRNA的表達(dá)則能促進細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞的凋亡。因此說明miR-134在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著腫瘤抑制因子的作用。在細(xì)胞凋亡過程中,caspase-7是一個重要的調(diào)控因子。本論文通過定量PCR和WesternBlot檢測,發(fā)現(xiàn)miR-134過表達(dá)能夠促進caspase-7mRNA及蛋白表達(dá)；而抑制內(nèi)源性miR-134的表達(dá)能夠使caspase-7mRNA及蛋白表達(dá)下降,表明miRNA-134可能是通過調(diào)控caspase-7最終控制細(xì)胞的增殖與凋亡。侵襲和遷移是腫瘤細(xì)胞兩個重要的特征。通過分析miR-134對腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響,發(fā)現(xiàn)miR-134能夠抑制細(xì)胞的侵襲和遷移。實驗進一步證明了miR-134在體內(nèi)發(fā)揮抑癌基因的作用。為進一步了解裸鼠和人的組織樣本中miR-134對腫瘤細(xì)胞的影響。課題通過將過表達(dá)miR-134的腫瘤細(xì)胞注射入裸鼠體內(nèi),在裸鼠的皮下形成腫瘤。30天后處死裸鼠,稱重后分析兩組裸鼠腫瘤的重量,結(jié)果顯示miR-134過表達(dá)的細(xì)胞系中裸鼠的腫瘤顯著變小。隨之再分析了兩種腫瘤細(xì)胞中miR-134和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7的相對表達(dá)情況,結(jié)果表明miR-134能夠有效地在腫瘤細(xì)胞中過表達(dá),并使細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7的表達(dá)水平顯著升高。從而提示miR-134可能是通過調(diào)控caspase-7的表達(dá)影響腫瘤細(xì)胞的生長。最后論文分析了miR-134表達(dá)與臨床病理特征之間的相關(guān)性：比較了高表達(dá)與低表達(dá)miR-134兩組患者與臨床病理因素之間關(guān)系,發(fā)現(xiàn)低表達(dá)miR-134與腫瘤大小、陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理因素相關(guān)�；趍iR-134表達(dá)的結(jié)直腸癌Kaplan-Meier生存曲線分析,表明低表達(dá)miR-134組患者的預(yù)后比高表達(dá)miR-134組患者的預(yù)后顯著較差(p0.01)。因此提示miR-134在結(jié)直腸癌的治療及預(yù)后中可能發(fā)揮重要的作用,為結(jié)直腸癌的診斷和治療提供了思路。通過本實驗證實：miR-134在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著降低,miR-134可能與結(jié)直腸癌具有相關(guān)性；進一步分析miR-134對細(xì)胞的增殖、凋亡、分裂等的影響,發(fā)現(xiàn)miR-134能夠抑制細(xì)胞的增殖和分裂,促進細(xì)胞的凋亡,發(fā)揮著抑癌基因的作用；而miR-134能夠促進細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7表達(dá)這一現(xiàn)象表明：miR-134可能通過促進細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7的表達(dá)進而影響細(xì)胞的凋亡。這一結(jié)論在本組的裸鼠實驗中得到證實。臨床miR-134表達(dá)與臨床病理因素之間的相關(guān)性分析表明：miR-134低表達(dá)組患者的預(yù)后比miR-134高表達(dá)組患者的預(yù)后顯著較差。以上研究表明miR-134是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的一個童要的miRNA,是結(jié)直腸癌中一個潛在的分子標(biāo)志物,在結(jié)直腸癌的治療及預(yù)后中可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34

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本文編號：2361232