【摘要】：目的通過計(jì)算機(jī)虛擬篩選和細(xì)胞活性篩選,獲得能靶向抑制腫瘤壞死因子β(TNFβ)的細(xì)胞毒活性的小分子抑制劑。方法根據(jù)TNFβ與腫瘤壞死因子Ⅰ型受體(TNFR1)結(jié)合的復(fù)合晶體結(jié)構(gòu),采用計(jì)算機(jī)虛擬篩選方法初步選擇對(duì)接結(jié)果較好的105個(gè)小分子化合物(C1~C105),并對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞活性篩選;MTT法檢測小分子化合物抑制TNFβ對(duì)L929細(xì)胞的細(xì)胞毒性;流式細(xì)胞術(shù)測定小分子化合物對(duì)TNFβ引起的細(xì)胞凋亡的抑制作用;采用碘化丙啶(PI)單染和流式分析技術(shù)檢測小分子化合物對(duì)L929細(xì)胞周期的影響;采用Western blot和雙轉(zhuǎn)盤激光共聚焦顯微鏡分析小分子化合物對(duì)TNFβ引起的下游Caspase 3活化的抑制作用。結(jié)果 C35能有效抑制TNFβ引起的細(xì)胞毒作用,且這種抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性(半數(shù)抑制濃度=8.19μmol/L);C35具有較低的細(xì)胞毒性,且對(duì)L929細(xì)胞周期無影響;C35能阻斷TNFβ與其受體結(jié)合后引起的細(xì)胞凋亡通路,顯著抑制TNFβ引起的L929細(xì)胞凋亡。結(jié)論成功篩選到一個(gè)TNFβ小分子抑制劑C35,其能阻斷TNFβ引起的細(xì)胞凋亡通路,高效抑制TNFβ的細(xì)胞毒活性。
[Abstract]:Objective to obtain small molecular inhibitors targeting tumor necrosis factor 尾 (TNF 尾) by computer virtual screening and cell activity screening. Methods according to the compound crystal structure of TNF 尾 combined with tumor necrosis factor type I receptor (TNFR1), 105 small molecular compounds (C1~C105) with good docking results were selected by computer virtual screening method and their cellular activity was screened. The cytotoxicity of TNF 尾 to L929 cells was detected by MTT assay, and the apoptosis induced by TNF 尾 was detected by flow cytometry. The effects of small molecular compounds on the cell cycle of L929 cells were detected by (PI) single staining and flow cytometry, and the inhibition of Caspase 3 activation induced by TNF 尾 by Western blot and double disc laser confocal microscopy was analyzed. Results C35 could effectively inhibit cytotoxicity induced by TNF 尾 in a dose-dependent manner (half inhibitory concentration = 8.19 渭 mol/L), C35 had lower cytotoxicity and had no effect on cell cycle of L929 cells. C35 could block the apoptotic pathway induced by TNF 尾 binding to its receptor and significantly inhibit the apoptosis of L929 cells induced by TNF 尾. Conclusion C35, a small molecule inhibitor of TNF 尾, can block the apoptosis pathway induced by TNF 尾 and inhibit the cytotoxic activity of TNF 尾.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液病醫(yī)院(血液學(xué)研究所) 實(shí)驗(yàn)血液學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31271484,31471116) 天津市自然科學(xué)基金重點(diǎn)基金(12JCZDJC24600) 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生創(chuàng)新基金(100023-0710-1013)
【分類號(hào)】：R730.231

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本文編號(hào)：2352478