【摘要】：目的:應(yīng)用人工合成S100A14-siRNA干擾乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7Tax R細(xì)胞內(nèi)S100A14基因的表達(dá),同時(shí)聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng),觀察S100A14-siRNA對(duì)乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 Tax R凋亡和耐藥的影響,為乳腺癌新輔助化療中紫杉醇耐藥的基因治療提供新思路。方法:體外培養(yǎng)普通乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 Tax R,并將兩種細(xì)胞株分別分為三組:(1)空白對(duì)照組(DMSO);(2)陰性對(duì)照組(Scramble-siRNA);(3)實(shí)驗(yàn)組(S100A14-siRNA)。1.應(yīng)用western blot檢測(cè)正常乳腺細(xì)胞株MCF-10、普通乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 Tax R細(xì)胞內(nèi)S100A14的蛋白表達(dá)情況。2.人工合成S100A14-siRNA,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MCF-7、MCF-7 Tax R細(xì)胞,應(yīng)用western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染S100A14-siRNA對(duì)細(xì)胞內(nèi)S100A14蛋白表達(dá)水平的影響。3.轉(zhuǎn)染siRNA后,聯(lián)合應(yīng)用不同濃度的紫杉醇培養(yǎng)MCF-7 Tax R 48 h,應(yīng)用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性變化情況。4.應(yīng)用倒置相差顯微鏡、Hoechst 33342熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)(Annexin V-FITC/PI雙染法)檢測(cè)MCF-7 Tax R轉(zhuǎn)染siRNA后,聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。5.應(yīng)用western blot檢測(cè)MCF-7 Tax R轉(zhuǎn)染siRNA后,聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞中線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白的影響。結(jié)果:1.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 Tax R中S100A14蛋白表達(dá)量明顯高于紫杉醇敏感細(xì)胞MCF-7和乳腺正常細(xì)胞MCF-10,組間兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染siRNA 48 h后,MCF-7和MCF-7Tax R的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)S100A14的蛋白表達(dá)量與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比明顯減少,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.MCF-7 Tax R轉(zhuǎn)染siRNA后,聯(lián)合不同濃度的紫杉醇培養(yǎng)48 h,MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,MCF-7 Tax R的陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率隨紫杉醇濃度的升高均有下降的趨勢(shì),但同一濃度下實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率明顯低于陰性對(duì)照組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.MCF-7 Tax R轉(zhuǎn)染siRNA后,聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)48 h,倒置相差顯微鏡觀察顯示,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞大量死亡;Hoechst 33342熒光染色顯示,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核僅剩少量高度凝集縮小、呈亮藍(lán)色染色的核碎片;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,MCF-7 Tax R空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞早期凋亡率分別為(9.11±2.01)%、(11.45±1.09)%、(13.14±1.87)%,晚期凋亡率分別為(8.01±1.63)%、(7.54±0.99)%、(72.12±2.47)%,總凋亡率分別為(17.12±3.67)%、(18.99±2.29)%、(85.26±5.01)%,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的早期、晚期、總凋亡率均明顯高于兩對(duì)照組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.MCF-7 Tax R轉(zhuǎn)染siRNA后,聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)48 h,western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與兩對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)量下調(diào),Bid、Bax、活化caspase-9、活化caspase-7和活化PARP蛋白表達(dá)量上調(diào),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.S100A14的高表達(dá)與乳腺癌紫杉醇耐藥相關(guān)。2.S100A14-siRNA可有效轉(zhuǎn)染乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞MCF-7 Tax R并沉默S100A14的蛋白表達(dá)。3.沉默S100A14可提高M(jìn)CF-7 Tax R細(xì)胞對(duì)化療藥物紫杉醇的敏感性,逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥。4.沉默S100A14并聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)可通過線粒體凋亡通路誘導(dǎo)MCF-7 Tax R細(xì)胞發(fā)生凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2349031