【摘要】：背景與目的Asef2是近年新發(fā)現(xiàn)的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子,可被APC激活增強(qiáng)其鳥(niǎo)苷酸交換活性,并特異性的使下游小G蛋白R(shí)ac1和Cdc42活化,從而參與細(xì)胞的骨架構(gòu)建,并與腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、遷移及血管生成密切相關(guān)。既往關(guān)于該基因?yàn)閿?shù)不多的研究也僅局限于細(xì)胞及動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn),目前尚無(wú)Asef2在結(jié)腸癌組織中表達(dá)情況及其與臨床病理特征和預(yù)后關(guān)系的研究。同時(shí),隨著結(jié)腸癌生物學(xué)行為研究的深入,多種癌基因、抑癌基因及遺傳表型被發(fā)現(xiàn)在左、右半結(jié)腸癌中呈現(xiàn)差異表達(dá)情況,且同種預(yù)后標(biāo)志物在左、右半結(jié)腸癌中呈現(xiàn)不同的預(yù)后指示作用,因而,目前有學(xué)者質(zhì)疑結(jié)腸癌是否為右半及左半“兩臟器”的不同疾病。本研究第一部分?jǐn)M探討Asef2在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理的關(guān)系,并分組分析Asef2在左、右半結(jié)腸癌中的表達(dá)情況及其對(duì)預(yù)后的影響。本研究第二部分通過(guò)回顧大宗病例進(jìn)一步探討左、右半結(jié)腸癌的流行病學(xué)特征、臨床病理特征及預(yù)后的差異。材料與方法本研究第一部分首先選取38例結(jié)腸癌與配對(duì)的正常上皮組織,通過(guò)免疫組化及Western Blot技術(shù)從蛋白水平檢測(cè)癌與癌旁組織中Asef2蛋白的差異表達(dá),并用實(shí)時(shí)定量RT-PCR從mRNA水平檢測(cè)癌與癌旁Asef2 mRNA表達(dá)量的差異,同時(shí),利用GEO數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,應(yīng)用高通量寡核苷酸微陣列技術(shù)檢測(cè)癌與癌旁mRNA表達(dá)量的差異,豐富并驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果。另外,選取143例預(yù)后資料完整的結(jié)腸癌組織石蠟切片,通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)癌組織中Asef2的表達(dá),探討其表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系,同時(shí)分析左右半結(jié)腸癌中Asef2是否存在差異表達(dá),分析其對(duì)預(yù)后的指導(dǎo)意義,再次利用GEO數(shù)據(jù)庫(kù)檢索高通量數(shù)據(jù)樣本中患者的臨床病理及預(yù)后資料,完整下載后,整理、分析、驗(yàn)證Asef2在左右半結(jié)腸癌中表達(dá)的臨床及預(yù)后意義。本研究第二部分對(duì)我院外科收治的1088例結(jié)腸癌進(jìn)行回顧性分析,探討左、右半結(jié)腸癌的流行病學(xué)特點(diǎn)及臨床病理特征差異,并根據(jù)長(zhǎng)期隨訪數(shù)據(jù),用Kaplan-Meier法繪制分析不同腫瘤分期中左、右半結(jié)腸癌患者的生存曲線,Log-rank法比較生存率差異。進(jìn)一步通過(guò)COX多因素調(diào)整后,分析不同臨床特征的亞組中左、右半結(jié)腸癌的相對(duì)死亡風(fēng)險(xiǎn)。另外,根據(jù)Ⅰ-Ⅲ期患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況,分析左、右半結(jié)腸癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移模式。結(jié)果Asef2在結(jié)腸癌組織中顯著上調(diào),Western Blot檢測(cè)38例新鮮配對(duì)結(jié)腸癌組織中,32例結(jié)腸癌組織Asef2蛋白表達(dá)高于其配對(duì)的正常上皮組織,表達(dá)上調(diào)率為84.2%。181例結(jié)腸癌組織石蠟切片免疫組化染色結(jié)果顯示Asef2陽(yáng)性表達(dá)132例,陽(yáng)性表達(dá)率72.9%,而38例正常配對(duì)上皮組織中16例出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)率為42.1%。實(shí)時(shí)定量RT-PCR共檢測(cè)了21對(duì)結(jié)腸癌與配對(duì)正常上皮組織Asef2基因的相對(duì)表達(dá)量,結(jié)果顯示Asef2在其中15例(71.4%)腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)。GSE10950數(shù)據(jù)集中結(jié)腸癌Illumina Human Ref8-v2芯片檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示24對(duì)結(jié)腸癌及配對(duì)正常上皮組織中19例(79.2%)癌組織Asef2基因表達(dá)上調(diào)。181例結(jié)腸癌免疫組化結(jié)果與臨床病理資料結(jié)合分析發(fā)現(xiàn),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中Asef2表達(dá)陽(yáng)性率顯著升高(χ2=8.504,P=0.004),左半結(jié)腸癌患者Asef2表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于右半結(jié)腸癌(χ2=5.065,P=0.024),進(jìn)一步在GSE40967數(shù)據(jù)集中驗(yàn)證得到有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者及左半結(jié)腸癌患者Asef2 mRNA的表達(dá)量均顯著上調(diào)。預(yù)后分析顯示右半結(jié)腸癌中Asef2陽(yáng)性患者5年無(wú)復(fù)發(fā)生存及總生存均顯著低于Asef2陰性表達(dá)患者,而左半結(jié)腸中Asef2對(duì)預(yù)后無(wú)顯著影響。由于Asef2在左右半結(jié)腸癌呈現(xiàn)差異表達(dá),且對(duì)預(yù)后指示作用不同,我們認(rèn)為左、右半結(jié)腸癌的致癌機(jī)制可能存在差異,進(jìn)一步大宗病例回顧分析顯示首先左、右半結(jié)腸癌在流行病學(xué)上存在顯著差異,右半結(jié)腸癌中高齡患者、女性患者以及腫瘤分期較晚的患者均較左半結(jié)腸癌更多見(jiàn)；其次,左、右半結(jié)腸癌在病理特征上存在顯著差異,低分化及未分化腫瘤(25.2%比13.2%)、粘液分泌(33.5%比17.3%)及脈管瘤栓(9.9%比3.9%)均在右半結(jié)腸癌中更多見(jiàn),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。第三,左、右半結(jié)腸癌預(yù)后存在差異,右半結(jié)腸癌與左半結(jié)腸癌患者5年生存率Ⅰ/Ⅱ期分別為91.4%和88.6%(P=0.819),Ⅲ期分別為66.1%和75.4%(P=0.010),Ⅳ期分別為27.8%和38.5%(P=0.020). COX多因素分析顯示結(jié)腸癌發(fā)病部位是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(OR=1.426,95%CI: 1.100-1.848).第四,左、右半結(jié)腸癌復(fù)發(fā)模式存在差異,左半結(jié)腸癌首次復(fù)發(fā)部位發(fā)生于吻合口的比例顯著高于右半結(jié)腸癌；而右半結(jié)腸癌患者首次疾病復(fù)發(fā)表現(xiàn)為腹膜種植轉(zhuǎn)移的比例則顯著高于左半結(jié)腸癌。結(jié)論Asef2在癌組織及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中顯著上調(diào)。Asef2在左、右半結(jié)腸癌中表達(dá)差異顯著,Asef2過(guò)表達(dá)可能作為右半而不是左半結(jié)腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物。Asef2可能在不同部位結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮不同的作用。左、右半結(jié)腸癌的致癌機(jī)制可能存在差異,且流行病學(xué)特征、臨床病理特征、預(yù)后生存及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)模式均存在顯著不同。在結(jié)腸癌研究領(lǐng)域中,尤其是在中晚期結(jié)腸癌研究中,左、右半結(jié)腸癌應(yīng)視為兩種不同特征的腫瘤進(jìn)行分別研究。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Hongmei Zeng;Siwei Zhang;Jie He;;Annual report on status of cancer in China, 2011[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年01期

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本文編號(hào)：2346606