【摘要】：目的:研究氨基酸轉(zhuǎn)運載體基因SLC7A5(solute carrier family 7,member 5)在腫瘤細胞中發(fā)揮的生物學(xué)效應(yīng)及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。方法:利用基因表達綜合(Gene Expression Omnibus,GEO)數(shù)據(jù)庫分析SLC7A5在人正常組織和相應(yīng)的腫瘤組織中的表達情況;構(gòu)建SLC7A5基因的重組質(zhì)粒,采用噻唑藍(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法、流式細胞儀技術(shù)檢測該基因?qū)δ[瘤細胞增殖的影響;通過生物信息學(xué)方法分析SLC7A5基因啟動子及其轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,構(gòu)建該基因的啟動子質(zhì)粒,并利用熒光素酶報告基因系統(tǒng)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)探討轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)對SLC7A5基因的表達調(diào)控。結(jié)果:GEO數(shù)據(jù)庫分析顯示SLC7A5的分布具有組織特異性,且在大多數(shù)的腫瘤組織中的表達水平明顯高于相應(yīng)的正常組織;MTT比色法、流式細胞儀檢測結(jié)果表明SLC7A5具有促進細胞增殖的作用;通過啟動子分析、載體構(gòu)建、報告基因檢測和RT-PCR實驗證實TGF-β1可上調(diào)SLC7A5啟動子的活性,從而促進該基因的表達。結(jié)論:SLC7A5基因在腫瘤細胞中發(fā)揮促癌作用,且受TGF-β1信號通路的調(diào)控。
[Abstract]:Aim: to study the biological effects and transcriptional regulation of amino acid transporter gene SLC7A5 (solute carrier family 7 member 5 in tumor cells. Methods: the expression of SLC7A5 in human normal tissues and corresponding tumor tissues was analyzed by using gene expression and (Gene Expression Omnibus,GEO database. The recombinant plasmid of SLC7A5 gene was constructed and the effect of the gene on the proliferation of tumor cells was detected by methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT colorimetry and flow cytometry. The promoter plasmid of SLC7A5 gene and its transcription factor binding site were constructed by bioinformatics, and the luciferase reporter gene system was used. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to investigate the regulation of transforming growth factor 尾 1 (transforming growth factor- 尾 1 TGF- 尾 1 on the expression of SLC7A5 gene. Results: GEO database analysis showed that the distribution of SLC7A5 was tissue specific and the expression level in most tumor tissues was significantly higher than that in normal tissues. The results of MTT colorimetry and flow cytometry showed that SLC7A5 could promote cell proliferation. Through promoter analysis, vector construction, reporter gene detection and RT-PCR assay, it was confirmed that TGF- 尾 1 could up-regulate the activity of SLC7A5 promoter and promote the expression of the gene. Conclusion: SLC7A5 gene plays a promoting role in tumor cells and is regulated by TGF- 尾 1 signaling pathway.
【作者單位】： 湖南大學(xué)生物學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81270735)~~
【分類號】：R730.2

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本文編號：2311002