【摘要】：目的:本研究旨在探討烏索酸(Ursolic acid)對(duì)T淋巴瘤細(xì)胞株Hut-78和Jurkat增殖的體外影響及可能作用機(jī)制。方法:1.用四甲基偶氮唑鹽(MTT,Methyl thiazolyl tetrazolium)法研究10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用不同時(shí)間(4,12,24,48,72h)對(duì)Hut-78和Jurkat細(xì)胞株增殖的抑制作用;2.用AnnexinⅤ/PI-FITC標(biāo)記10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用4,24,72h后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞,并用流式細(xì)胞儀分析,檢測AnnexinⅤ+/PI-細(xì)胞比例,了解其凋亡的情況;3.用免疫印跡法(western blot)檢測10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞的細(xì)胞核因子-κB(NF-κB,nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)p65亞基、p50亞基、p52亞基和p100亞基蛋白表達(dá);用western blot法檢測10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞半胱天冬蛋白酶-8(caspase-8),caspase-9,caspase-3和蛋白的表達(dá);4.用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA,enzyme linked immunosorbent assay)法檢測用10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞上清液血管內(nèi)皮生長因子(VEGF,vascular endothelial growth factor)和環(huán)氧化物酶-2(COX-2,cyclooxygenase-2)的含量;反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)(RT-PCR,reverse transcription-polymerase chain reaction)檢測10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞VEGF和COX-2的m RNA表達(dá);5.取10,20,40和80μmol/L的烏索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞培養(yǎng)上清液與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC,human umbilical vein endothelium cell line)細(xì)胞株共同培養(yǎng)24h,檢測Matrigel培養(yǎng)體系的HUVEC形成管腔數(shù);結(jié)果:1.MTT法顯示烏索酸對(duì)Hut-78和Jurkat細(xì)胞株增殖有抑制作用(p0.05),且和藥物濃度和作用時(shí)間有關(guān)(p0.01);2.流式細(xì)胞儀分析經(jīng)烏索酸處理后兩種細(xì)胞凋亡增加(p0.05),且和藥物濃度和作用時(shí)間有關(guān)(p0.01);3.烏索酸處理72h后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞NF-κB p65和p50蛋白表達(dá)下降(p0.05),和藥物濃度有關(guān)(p0.01),但NF-κB p100蛋白和p52蛋白表達(dá)下降不明顯(p0.05);烏索酸處理72h后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞后的caspase-8、caspase-3和caspase-9蛋白表達(dá)增加(p0.05),和藥物濃度有關(guān)(p0.01);4.烏索酸處理72h后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞上清液VEGF和COX-2含量下降(p0.05),和藥物濃度有關(guān)(p0.01);烏索酸處理72h后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞后VEGF和COX-2 m RNA表達(dá)下降(p0.05),和藥物濃度有關(guān)(p0.01);5.烏索酸作用72h后的Hut-78和Jurkat細(xì)胞培養(yǎng)上清液與HUVEC細(xì)胞株共同培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)Matrigel培養(yǎng)體系的管腔數(shù)較對(duì)照組減少(p0.05),和藥物濃度有關(guān)(p0.01)。結(jié)論:1.烏索酸對(duì)T淋巴瘤細(xì)胞株Hut-78和Jurkat增殖抑制作用可能與促其凋亡(死亡受體和線粒體途徑)和抑制血管新生有關(guān);2.烏索酸作用機(jī)制可能是通過NF-κB經(jīng)典途徑完成。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of ursolic acid (Ursolic acid) on the proliferation of T lymphoma cell line Hut-78 and Jurkat in vitro and its possible mechanism. Methods: 1. The inhibitory effects of ursolic acid on the proliferation of Hut-78 and Jurkat cell lines were studied by MTT,Methyl thiazolyl tetrazolium) assay. Annexin 鈪，

本文編號(hào)：2304233