【摘要】：背景及目的:皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)在皮膚非黑素惡性腫瘤中發(fā)病率占第二位,是一種起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞的惡性增殖性疾病。日光性角化(Actinic keratosis,AK)、鮑恩氏病(Bowens disease,BD)與皮膚鱗癌同為復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞來(lái)源的皮膚病變,AK是SCC的癌前病變,BD是原位鱗癌,都可以向SCC進(jìn)展而獲得侵襲性。三者均多發(fā)生于身體暴露部位,給患者身心造成相當(dāng)程度的痛苦,影響患者的生活質(zhì)量。隨著老齡化社會(huì)的來(lái)臨,老年人口增加,多種慢性疾病呈現(xiàn)出增長(zhǎng)趨勢(shì),皮膚腫瘤也相應(yīng)增多,自癌前病變、原位鱗癌到具有侵襲性的鱗癌是一個(gè)多階段多因素參與的復(fù)雜過(guò)程,三者之間的具體聯(lián)系和發(fā)展進(jìn)程有待我們更為深入的探究。PKD1是鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴性的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶D家族中最重要的一員,該蛋白在基因水平被稱為PRKD1m RNA,位于人類(lèi)染色體的14qll位置,廣泛表達(dá)于各組織和器官中,在調(diào)節(jié)一系列細(xì)胞生物學(xué)行為、維持細(xì)胞功能方面發(fā)揮十分重要的作用。PKD1蛋白在多種腫瘤組織中異常表達(dá),皮膚病領(lǐng)域內(nèi)已證實(shí)在基底細(xì)胞癌、黑色素瘤等皮膚惡性腫瘤中表達(dá)異常,對(duì)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化具有重要的影響。多數(shù)研究指出PKD1對(duì)細(xì)胞的作用是通過(guò)其自身的磷酸化來(lái)調(diào)節(jié)的,其與皮膚疾病相關(guān)的最重要的兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)是Ser916和Tyr463。本實(shí)驗(yàn)從基因和蛋白水平上檢測(cè)PKD1及其兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916在SCC、BD、AK及正常表皮組織中的表達(dá)情況,以期探討PKD1在皮膚鱗狀細(xì)胞癌的逐步形成和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮的作用和意義。方法:1.運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)PKD1轉(zhuǎn)錄水平(PRKD1m RNA)在SCC組、BD組、AK組及正常對(duì)照組各樣本中的表達(dá)情況,分析PRKD1m RNA在各組中的表達(dá)差異。2.運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)SCC組、BD組、AK組及正常對(duì)照組各樣本中PKD1總蛋白及其磷酸化位點(diǎn)p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916的蛋白表達(dá)情況。3.運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色法(Immunohistochemical staining method)檢測(cè)SCC組、BD組、AK組及正常對(duì)照組的石蠟組織中PKD1總蛋白及其磷酸化位點(diǎn)p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916的蛋白表達(dá)在組織的具體部位。結(jié)果:1.正常皮膚組織、SCC、BD、AK組織中PRKD1m RNA的表達(dá)量分別為0.640.09,5.371.06,2.690.72,2.430.46,四組間PRKD1m RNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.37,均P0.05)其中,SCC組織中PRKD1m RNA的表達(dá)量是正常組的8.4倍且明顯較BD和AK組高(均P0.05),BD和AK組織之間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.免疫組織化學(xué)檢測(cè)PKD1在皮膚鱗癌組織和原位鱗癌(BD)組織中主要表達(dá)在棘層細(xì)胞及異形細(xì)胞的胞質(zhì)和包膜,明顯高于正常對(duì)照組織(χ2BD=4.29,χ2SCC=12.96,均P0.01),SCC組中PKD1的表達(dá)隨著鱗癌病理分級(jí)的提高而增加。AK組和正常對(duì)照組相比差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.20,P0.05)。p-PKD1-Ser916僅在部分高分化SCC的癌巢部分少量表達(dá),但和正常組相比并無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fisher確切檢驗(yàn),P0.05),低分化鱗癌組織中反而未發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。p-PKD1-tyr463僅在SCC、BD組織少量表達(dá),兩者之間相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.69,P0.01)。在SCC組中PKD1與其磷酸化位點(diǎn)Tyr463的表達(dá)呈正相關(guān)(rcc=0.479,P0.05)。3.Western blot檢測(cè)PKD1及其磷酸化位點(diǎn)Ser916和Tyr463在各組中的表達(dá)與免疫組化結(jié)果大致趨勢(shì)相符,以GAPDH為內(nèi)參蛋白,PKD1僅在SCC和BD組織中高表達(dá),p-PKD1-tyr463僅在SCC組織中高表達(dá),而p-PKD1-Ser916在各組組織中表達(dá)量均較低。結(jié)論:1.PKD1及其磷酸化位點(diǎn)tyr463在皮膚鱗狀細(xì)胞癌及原位鱗癌中均有不同程度的高表達(dá),且PKD1總蛋白在隨著鱗癌組織病理分級(jí)的提高而增加。2.PKD1及其磷酸化位點(diǎn)Tyr463可能參與復(fù)層鱗狀上皮來(lái)源的皮膚腫瘤的形成和進(jìn)一步發(fā)展,在皮膚鱗狀細(xì)胞癌形成進(jìn)程中PKD1可能通過(guò)Tyr463位點(diǎn)活化而發(fā)揮促進(jìn)作用,有望成為皮膚鱗狀細(xì)胞癌治療的新靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5;R758.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊雷;劉暖;毛秉豫;徐國(guó)昌;葉松山;張培華;張t歐，

本文編號(hào)：2286824