【摘要】：背景及目的:皮膚鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)在皮膚非黑素惡性腫瘤中發(fā)病率占第二位,是一種起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細胞的惡性增殖性疾病。日光性角化(Actinic keratosis,AK)、鮑恩氏病(Bowens disease,BD)與皮膚鱗癌同為復層鱗狀上皮細胞來源的皮膚病變,AK是SCC的癌前病變,BD是原位鱗癌,都可以向SCC進展而獲得侵襲性。三者均多發(fā)生于身體暴露部位,給患者身心造成相當程度的痛苦,影響患者的生活質(zhì)量。隨著老齡化社會的來臨,老年人口增加,多種慢性疾病呈現(xiàn)出增長趨勢,皮膚腫瘤也相應增多,自癌前病變、原位鱗癌到具有侵襲性的鱗癌是一個多階段多因素參與的復雜過程,三者之間的具體聯(lián)系和發(fā)展進程有待我們更為深入的探究。PKD1是鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴性的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶D家族中最重要的一員,該蛋白在基因水平被稱為PRKD1m RNA,位于人類染色體的14qll位置,廣泛表達于各組織和器官中,在調(diào)節(jié)一系列細胞生物學行為、維持細胞功能方面發(fā)揮十分重要的作用。PKD1蛋白在多種腫瘤組織中異常表達,皮膚病領域內(nèi)已證實在基底細胞癌、黑色素瘤等皮膚惡性腫瘤中表達異常,對表皮角質(zhì)形成細胞的增殖和分化具有重要的影響。多數(shù)研究指出PKD1對細胞的作用是通過其自身的磷酸化來調(diào)節(jié)的,其與皮膚疾病相關的最重要的兩個磷酸化位點是Ser916和Tyr463。本實驗從基因和蛋白水平上檢測PKD1及其兩個磷酸化位點p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916在SCC、BD、AK及正常表皮組織中的表達情況,以期探討PKD1在皮膚鱗狀細胞癌的逐步形成和發(fā)展過程中發(fā)揮的作用和意義。方法:1.運用實時定量PCR方法檢測PKD1轉錄水平(PRKD1m RNA)在SCC組、BD組、AK組及正常對照組各樣本中的表達情況,分析PRKD1m RNA在各組中的表達差異。2.運用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)技術檢測SCC組、BD組、AK組及正常對照組各樣本中PKD1總蛋白及其磷酸化位點p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916的蛋白表達情況。3.運用免疫組織化學染色法(Immunohistochemical staining method)檢測SCC組、BD組、AK組及正常對照組的石蠟組織中PKD1總蛋白及其磷酸化位點p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916的蛋白表達在組織的具體部位。結果:1.正常皮膚組織、SCC、BD、AK組織中PRKD1m RNA的表達量分別為0.640.09,5.371.06,2.690.72,2.430.46,四組間PRKD1m RNA表達差異具有統(tǒng)計學意義(F=21.37,均P0.05)其中,SCC組織中PRKD1m RNA的表達量是正常組的8.4倍且明顯較BD和AK組高(均P0.05),BD和AK組織之間差異無明顯統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.免疫組織化學檢測PKD1在皮膚鱗癌組織和原位鱗癌(BD)組織中主要表達在棘層細胞及異形細胞的胞質(zhì)和包膜,明顯高于正常對照組織(χ2BD=4.29,χ2SCC=12.96,均P0.01),SCC組中PKD1的表達隨著鱗癌病理分級的提高而增加。AK組和正常對照組相比差異無明顯統(tǒng)計學意義(χ2=1.20,P0.05)。p-PKD1-Ser916僅在部分高分化SCC的癌巢部分少量表達,但和正常組相比并無明顯統(tǒng)計學意義(Fisher確切檢驗,P0.05),低分化鱗癌組織中反而未發(fā)現(xiàn)其表達。p-PKD1-tyr463僅在SCC、BD組織少量表達,兩者之間相比無明顯統(tǒng)計學差異(χ2=1.69,P0.01)。在SCC組中PKD1與其磷酸化位點Tyr463的表達呈正相關(rcc=0.479,P0.05)。3.Western blot檢測PKD1及其磷酸化位點Ser916和Tyr463在各組中的表達與免疫組化結果大致趨勢相符,以GAPDH為內(nèi)參蛋白,PKD1僅在SCC和BD組織中高表達,p-PKD1-tyr463僅在SCC組織中高表達,而p-PKD1-Ser916在各組組織中表達量均較低。結論:1.PKD1及其磷酸化位點tyr463在皮膚鱗狀細胞癌及原位鱗癌中均有不同程度的高表達,且PKD1總蛋白在隨著鱗癌組織病理分級的提高而增加。2.PKD1及其磷酸化位點Tyr463可能參與復層鱗狀上皮來源的皮膚腫瘤的形成和進一步發(fā)展,在皮膚鱗狀細胞癌形成進程中PKD1可能通過Tyr463位點活化而發(fā)揮促進作用,有望成為皮膚鱗狀細胞癌治療的新靶點。
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【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5;R758.1

【參考文獻】

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1 楊雷;劉暖;毛秉豫;徐國昌;葉松山;張培華;張t歐，

本文編號：2286824