【摘要】：目前惡性腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,早期診斷和治療是預(yù)防腫瘤惡化和降低死亡率的最有效的方法。腫瘤標(biāo)志物是指在腫瘤的發(fā)生和增殖的過程中,由腫瘤細(xì)胞自身產(chǎn)生或機體對腫瘤細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)而生成的一類物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物的檢測對于腫瘤的早期診斷以及預(yù)后具有重要的臨床意義,傳統(tǒng)的檢測手段包括:電化學(xué)分析法、熒光法、電化學(xué)發(fā)光法、放射免疫檢測法、酶聯(lián)免疫分析法、聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、表面等離子體共振、表面增強拉曼光譜法等。但這些方法均有其局限性,如相對復(fù)雜的樣品前處理、昂貴的儀器設(shè)備、低特異性和低靈敏性、檢測周期長等。因此,研究出操作簡單、檢測靈敏、經(jīng)濟的方法用于腫瘤標(biāo)志物的檢測具有十分重要的意義。適配體是一類通過人工篩選得到的能與靶標(biāo)特異性結(jié)合的單鏈寡聚核苷酸片段。與抗體相比,適配體具有分子量小、穩(wěn)定性好、可回收、易修飾、無毒性和免疫原性低等特點,已廣泛應(yīng)用于生物分析的各個領(lǐng)域,如金屬離子、小分子、蛋白質(zhì)、活細(xì)胞、病毒及細(xì)菌等的檢測。本文中我們將適配體的特異性識別能力和熒光法與電化學(xué)法的高靈敏性結(jié)合起來構(gòu)建了甲胎蛋白和miRNA-21的多種檢測方法,并將其應(yīng)用于實際樣品的檢測,具體內(nèi)容包括:第一章:介紹了甲胎蛋白和miRNAs兩種腫瘤標(biāo)志物,對適配體的定義、特點、篩選過程及應(yīng)用進行了概述,簡述了基于適配體的熒光法和電化學(xué)分析法,在此基礎(chǔ)上闡述了本論文的主要內(nèi)容及創(chuàng)新之處。第二章:構(gòu)建了一種熒光增強型的適配體生物傳感器用于甲胎蛋白的分析檢測。該方法利用了氧化石墨烯的熒光猝滅能力和適配體的特異性結(jié)合能力對甲胎蛋白進行了定量分析。當(dāng)甲胎蛋白不存在時,適配體會吸附在氧化石墨烯表面,從而拉近適配體末端標(biāo)記的熒光染料與氧化石墨烯的距離,使熒光發(fā)生猝滅。而隨著甲胎蛋白的加入,適配體會與它特異性結(jié)合并折疊成適配體/甲胎蛋白復(fù)合物,這種結(jié)構(gòu)與氧化石墨烯的親和力下降,會從氧化石墨烯表面脫落下來,從而使熒光得以恢復(fù)。該傳感器的熒光強度會在一定范圍內(nèi)隨著甲胎蛋白濃度的增加而增加,因此,可用此方法對甲胎蛋白進行定量分析。第三章:構(gòu)建了一種基于二茂鐵修飾的適配體電化學(xué)生物傳感器用于甲胎蛋白的檢測。本方法將適配體的5’端以金-硫鍵固定到電極表面,當(dāng)甲胎蛋白不存在時,電極表面的適配體呈自然卷曲結(jié)構(gòu),適配體3’端標(biāo)記的二茂鐵接近電極表面,發(fā)生電子信號的轉(zhuǎn)移,而隨著甲胎蛋白的加入,適配體會與之相結(jié)合,使二茂鐵遠(yuǎn)離電極表面,電化學(xué)信號降低。通過這種電化學(xué)信號的變化可以實現(xiàn)對甲胎蛋白的靈敏檢測。第四章:構(gòu)建了一種基于莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA-21電化學(xué)生物傳感器。本實驗將二茂鐵修飾的莖環(huán)結(jié)構(gòu)探針通過金-硫鍵固定在金電極表面,由于探針中莖環(huán)結(jié)構(gòu)的存在,會使得二茂鐵接近電極表面,檢測到比較強的電化學(xué)信號,而隨著mi RNA-21的加入,miRNA-21會與探針鏈通過堿基互補配對形成剛性雙鏈結(jié)構(gòu),使二茂鐵遠(yuǎn)離電極表面,導(dǎo)致電化學(xué)信號的降低,最終實現(xiàn)miRNA-21的檢測。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TP212;R730.4

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本文編號：2283650