【摘要】：背景胃癌是最常見惡性腫瘤之一,是癌癥相關(guān)死亡的主要原因。2012年新增胃癌病例數(shù)為951600,723100人死于胃癌。多數(shù)胃癌患者死于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,5年生存率較低。TGF-β信號通路的激活可通過誘導(dǎo)上皮向間質(zhì)的轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。DACH1在多種腫瘤中表達(dá)降低,其表達(dá)在肝癌和結(jié)腸癌中被證明受啟動子區(qū)甲基化調(diào)控。研究報(bào)道DACH1可以抑制TGF-β信號通路在乳腺癌和結(jié)腸癌中的異常激活。目的本研究的目的是探討DACH1在胃癌中的表達(dá)改變及甲基化調(diào)控,明確胃癌中DACH1的甲基化在胃癌診斷、預(yù)后判斷和化療敏感性方面的潛在應(yīng)用價(jià)值。通過研究DACH1對TGF-β信號通路活性的調(diào)控,探討DACH1對于胃癌細(xì)胞EMT、侵襲、遷移能力的影響,明確DACH1在胃癌發(fā)生中的作用及機(jī)制。方法RT-PCR用于檢測DACH1在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)及5-aza (5-aza-2'-deoxycytidine)去甲基化處理后DACH1的表達(dá)恢復(fù)：應(yīng)用MSP(甲基化特異性PCR)檢測胃癌細(xì)胞系、正常胃黏膜組織、胃癌癌旁組織和胃癌組織中DACH1的甲基化改變。應(yīng)用SPSS15.O軟件分析DACH1甲基化和胃癌患者臨床病理特點(diǎn)間的相關(guān)性。免疫組織化學(xué)(IHC)方法分析胃癌和癌旁組織中DACH1表達(dá)水平,分析DACH1勺表達(dá)與甲基化的相關(guān)性。熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)和western blot檢測DACH1對TGF-β信號通路活性及下游蛋白(Smad2/3、p-Smad2/3、E-cadherin、vimentin、MMP2和MMP9)的影響：應(yīng)用CCK-8、克隆形成、流式細(xì)胞術(shù)及裸鼠成瘤的實(shí)驗(yàn)研究DACH1對胃癌細(xì)胞增殖、生長的影響。結(jié)果DACH1的表達(dá)沉默或降低的胃癌細(xì)胞系,其DACH1啟動子區(qū)發(fā)生高甲基化,經(jīng)去甲基化藥物5-aza處理后可恢復(fù)表達(dá)。胃癌組織中DACH1甲基化率為63.3(62/98)：癌旁組織中DACH1的甲基化率為38%(19/50),而在正常胃黏膜組織中未發(fā)現(xiàn)DACH1的甲基化(0/8例)。DACH1甲基化與胃癌組織中DACH1的表達(dá)降低(p0.01)、腫瘤分級(p0.01)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(p0.05)。DACH1通過抑制TGF-β信號通路而抑制胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲；DACH1能夠抑制胃癌細(xì)胞的EMT、下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達(dá)。DACH1恢復(fù)表達(dá)后可將胃癌細(xì)胞阻滯在G2/M期,抑制胃癌細(xì)胞的增殖和克隆形成,增加胃癌細(xì)胞對多西他賽(docetaxel)的敏感性。DACH1恢復(fù)表達(dá)的胃癌細(xì)胞的成瘤能力明顯減低,瘤體體積和重量均低于對照組。結(jié)論DACH1甲基化是胃癌的頻發(fā)事件,DACH1甲基化與胃癌的預(yù)后和轉(zhuǎn)移相關(guān)。DACH1的表達(dá)受甲基化調(diào)控。DACH1在體內(nèi)、體外抑制胃癌細(xì)胞的生長。DACH1可通過抑制TGF-β言號通路而抑制胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。DACH1甲基化是胃癌對多西他賽耐藥的標(biāo)志物。
[Abstract]:Background gastric cancer is one of the most common malignant tumors and the main cause of cancer-related deaths. Most gastric cancer patients died of recurrence and metastasis, and the 5-year survival rate was low. Activation of TGF- 尾 signaling pathway could induce epithelial to interstitial transformation (epithelial-mesenchymal transition, EMT) promoted tumor invasion and metastasis. DACH1 expression was decreased in many tumors. Its expression has been demonstrated to be regulated by promoter methylation in liver and colon cancer. It is reported that DACH1 can inhibit the abnormal activation of TGF- 尾 signaling pathway in breast and colon cancer. Objective to investigate the expression and methylation regulation of DACH1 in gastric cancer, and to determine the potential value of DACH1 methylation in the diagnosis, prognosis and chemosensitivity of gastric cancer. By studying the effect of DACH1 on the activity of TGF- 尾 signaling pathway, the effect of DACH1 on the invasion and migration of gastric cancer cell line EMT, was investigated, and the role and mechanism of DACH1 in gastric carcinogenesis were clarified. Methods RT-PCR was used to detect the expression of DACH1 in gastric cancer cell lines and the recovery of DACH1 expression after 5-aza (5-aza-2'-deoxycytidine) demethylation. MSP (methylation specific PCR) was used to detect the expression of DACH1 in gastric cancer cell lines and normal gastric mucosa. Methylation of DACH1 in paracancerous and gastric cancer tissues. The correlation between DACH1 methylation and clinicopathological features of gastric cancer was analyzed by SPSS15.O software. Immunohistochemical (IHC) method was used to analyze the expression of DACH1 in gastric cancer and adjacent tissues, and the correlation between the expression of DACH1 and methylation was analyzed. Luciferase reporter gene system and western blot were used to detect the effects of DACH1 on the activity of TGF- 尾 signaling pathway and downstream proteins (Smad2/3,p-Smad2/3,E-cadherin,vimentin,MMP2 and MMP9). The effects of DACH1 on the proliferation and growth of gastric cancer cells were studied by CCK-8, clone formation, flow cytometry and tumorigenesis in nude mice. Results the expression of DACH1 in gastric cancer cell lines with silencing or decreasing expression was hypermethylated in the DACH1 promoter region, and could be recovered after treatment with demethylating drug 5-aza. The methylation rate of DACH1 in gastric cancer was 63.3 (62 / 98): the methylation rate of DACH1 was 38% (19 / 50) in paracancerous tissues, but no methylation of DACH1 was found in normal gastric mucosa (0 / 8 cases). DACH1 methylation was associated with decreased expression of DACH1 (p0.01), tumor grade (p0.01) and lymphocytosis in gastric cancer tissues. DACH1 inhibits the migration of gastric cancer cells by inhibiting TGF- 尾 signaling pathway (p0.05). DACH1 could inhibit the expression of matrix metalloproteinase MMP-2 and MMP-9 in gastric cancer cells by EMT, down-regulation. When DACH1 returned to the expression level, it could block gastric cancer cells to G2 / M phase, and inhibit the proliferation and clone formation of gastric cancer cells. The sensitivity of gastric cancer cells to docetaxel (docetaxel) was increased. The tumorigenic ability of gastric cancer cells recovered from DACH1 was significantly decreased, and the tumor volume and weight were lower than those of the control group. Conclusion DACH1 methylation is a frequent event in gastric cancer. DACH1 methylation is associated with the prognosis and metastasis of gastric cancer. The expression of DACH1 is regulated by methylation. DACH1 in vivo. DACH1 can inhibit the migration and invasion of gastric cancer cells by inhibiting TGF- 尾 pathway in vitro. DACH1 methylation is a marker of docetaxel resistance in gastric cancer.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉紅,王文奇,劉倩;血管內(nèi)皮生長因子與胃癌的關(guān)系[J];山東醫(yī)藥;2002年22期

2 劉文仕,吉建霞;胃癌85例誤診分析[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;2002年07期

3 王國仁,程一真;二維及彩色多普勒血流顯像對胃癌的診斷價(jià)值[J];中國超聲診斷雜志;2002年10期

4 戈之錚;胃癌的胃鏡下診斷[J];胃腸病學(xué);2002年03期

5 王秀玲;胃癌診斷剖析[J];診斷學(xué)理論與實(shí)踐;2002年03期

6 陳峻青;為完善胃癌的現(xiàn)代外科治療而共同努力[J];中華胃腸外科雜志;2002年01期

7 陳憲;客觀認(rèn)識螺旋CT對胃癌的應(yīng)用價(jià)值[J];臨床放射學(xué)雜志;2002年08期

8 喬智紅,孫海輝,李慎江;胃癌多層螺旋CT診斷價(jià)值[J];中國醫(yī)師雜志;2003年11期

9 陳新文,黃躍衡,羅群英;青壯年胃癌48例分析[J];臨床醫(yī)學(xué);2003年01期

10 何仲恒,呂發(fā)金;螺旋CT在進(jìn)展期胃癌診斷中的價(jià)值探討[J];放射學(xué)實(shí)踐;2003年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 武淑蘭;魏志杰;殷宇明;;胃癌致微血管病性溶血性貧血的診斷[A];第十一屆全國紅細(xì)胞疾病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

2 丁濤;;超聲在診斷胃癌中的應(yīng)用[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第三屆全國肌肉骨骼超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

3 陳曉康;呂國榮;蘇若瑟;;應(yīng)用彩色能量多普勒血流顯像對胃癌的診斷價(jià)值[A];慶祝中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會成立20周年——第八屆全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

4 于吉人;;胃癌的術(shù)前系統(tǒng)評估[A];2004年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

5 楊軍樂;寧文德;董季平;徐敏;;多層螺旋CT在胃癌診斷中的應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

6 張曉鵬;;胃癌磁共振成像研究進(jìn)展[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張麗紅;常維平;黃賢會;;螺旋CT在特殊部位胃癌診斷中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會放射醫(yī)師分會首屆會員大會暨第四屆醫(yī)學(xué)影像山東論壇、山東省第16次放射學(xué)會議暨山東省第14屆醫(yī)學(xué)影像學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

8 陳靜;;彩色多普勒超聲檢查在胃癌的應(yīng)用[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第七屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年

9 劉池波;梁勇;王海寶;楊林軍;梁津逍;;胃癌患者中血清淀粉樣蛋白A的測定及臨床意義[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會暨細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)改革會議論文集[C];2008年

10 吳厚賓;;腹腔鏡在胃癌診治中的應(yīng)用進(jìn)展(綜述)[A];江西省第二屆胃腸外科學(xué)術(shù)會議暨江西省第十二次中西醫(yī)結(jié)合普通外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 錢錚;新技術(shù)能提高胃癌診斷準(zhǔn)確率[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2009年

2 記者 陳青;胃癌患者從“存活”邁向“樂活”[N];文匯報(bào);2010年

3 李楠;胃癌診斷敏感性從不足30%提高到57.4%[N];健康報(bào);2008年

4 通訊員 李楠;胃癌“轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)”研究見成效[N];上�？萍紙�(bào);2008年

5 記者 楚燕　通訊員 那偉 高樹灼;廈門胃癌研究達(dá)國際領(lǐng)先水平[N];廈門日報(bào);2009年

6 胡德榮;新型胃癌分子標(biāo)志物研究獲突破[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

7 本報(bào)記者 周芳;改善飲食習(xí)慣 早發(fā)現(xiàn)早治療[N];吉林日報(bào);2006年

8 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院 楊燕貽;胃癌防治有哪些錯誤觀念[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

9 特約記者 程守勤;胃癌診斷又有新方法[N];家庭醫(yī)生報(bào);2003年

10 重慶萬州 黃瓊;胃癌的手術(shù)治療[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 靳斌;胃癌相關(guān)抗原MG7-Ag的鑒定和功能分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 張開立;高發(fā)區(qū)（大連）胃癌發(fā)病分子基礎(chǔ)的探討[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

3 劉希雙;胃癌發(fā)生的分子機(jī)制及其臨床意義[D];山東大學(xué);2011年

4 王欣;紅外譜學(xué)與顯微成像在胃癌與中藥研究中的應(yīng)用[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2012年

5 趙紅;昆參顆粒影響血管生成因子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究及其治療進(jìn)展期胃癌的臨床觀察[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

6 羅治文;胃癌及癌旁組織定量比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

7 張建娜;共聚焦激光顯微內(nèi)鏡檢查診斷胃癌標(biāo)準(zhǔn)的建立及對胃癌的診斷價(jià)值[D];山東大學(xué);2008年

8 張琳;MiR-206-PAX3-MET信號通路在胃癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

9 梁平;磷脂酶C-ε1基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達(dá)與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

10 李汶娟;胃癌新的診斷標(biāo)記和治療靶位的研究[D];山東大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 康秀梅;胃癌64排螺旋CT灌注成像研究[D];鄭州大學(xué);2010年

2 傅健飛;青年胃癌的臨床病理特征分析[D];浙江大學(xué);2006年

3 彭沖;胰島素樣生長因子1及其結(jié)合蛋白3對胃癌診斷的意義[D];青島大學(xué);2013年

4 侯小明;血清腫瘤標(biāo)志物及組織蛋白的表達(dá)與胃癌預(yù)后的相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2008年

5 王華秀;激光拉曼光譜在胃癌研究中的應(yīng)用[D];中南大學(xué);2009年

6 李響;三維超聲參數(shù)與進(jìn)展期胃癌腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量的相關(guān)性分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

7 閆玉蘭;影響胃癌術(shù)后預(yù)后及復(fù)發(fā)的多因素分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

8 米婷;血清腫瘤標(biāo)志物的測定在胃癌診治中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2011年

9 劉天舟;腹腔鏡治療進(jìn)展期胃癌的臨床研究[D];吉林大學(xué);2011年

10 李平;胃癌組織中誘捕受體3蛋白及增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2004年

，

本文編號：2281263