【摘要】：有證據(jù)表明肝癌含有一定數(shù)量的具有自我更新能力的癌干細(xì)胞亞群。然而,癌干細(xì)胞是如何被調(diào)控的還不清楚。腫瘤微環(huán)境中一些生物介質(zhì)可以導(dǎo)致癌干細(xì)胞快速可逆性改變。本文旨在探討,在腫瘤微環(huán)境中有較高含量,又是細(xì)胞關(guān)鍵的調(diào)控因子的亞硝酸鹽是如何調(diào)控人肝癌干細(xì)胞樣細(xì)胞表型的。用SMMC-7721細(xì)胞系無血清培養(yǎng)獲得細(xì)胞球。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期,體外克隆形成實驗和球形成實驗檢測細(xì)胞自我更新能力,侵襲實驗檢測細(xì)胞侵襲能力,癌干細(xì)胞標(biāo)志物檢測采用流式細(xì)胞術(shù)和Westen blot方法,MTT檢測細(xì)胞活力。皮下注射SMMC-7721球形成細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型,活性氧(ROS)檢測試劑盒檢測移植瘤組織內(nèi)ROS水平,免疫熒光檢測組織內(nèi)缺氧有誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)。結(jié)果顯示,SMMC-7721細(xì)胞系來源的球細(xì)胞自我更新能力增強,干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)增加,耐藥性增強,提示球形成細(xì)胞富集了較多的具有癌干細(xì)胞特征的細(xì)胞。用亞硝酸鈉(150μmol·L~(-1))處理親本細(xì)胞和球形成細(xì)胞后,G_0/G_1期細(xì)胞比例增加,肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD90和EpCAM表達(dá)增加,細(xì)胞耐藥能力和侵襲能力增強。與親本細(xì)胞相比,亞硝酸鹽對球形成細(xì)胞的上述作用明顯增強。體內(nèi)實驗結(jié)果也顯示,亞硝酸鹽促進(jìn)球形成細(xì)胞移植瘤生長,組織內(nèi)ROS水平下降,HIF-1α累積。結(jié)果表明,亞硝酸鹽通過上調(diào)肝癌干細(xì)胞"干性"增強肝癌細(xì)胞侵襲能力。
[Abstract]:There is evidence that liver cancer contains a certain number of self-renewing cancer stem cell subsets. However, it is unclear how cancer stem cells are regulated. Some biological mediators in tumor microenvironment can cause rapid reversible changes of cancer stem cells. The aim of this paper is to investigate how nitrite, which is a key regulatory factor and a high content of tumor microenvironment, regulates the phenotype of human hepatoma stem cell like cells. The cell spheres were obtained by serum-free culture of SMMC-7721 cell line. The cell cycle was detected by flow cytometry, the ability of cell self-renewal was detected by colony formation in vitro and the ability of cell invasion was detected by invasiveness assay. Cancer stem cell markers were detected by flow cytometry and Westen blot, and MTT was used to detect cell viability. The xenograft tumor model of nude mice was established by subcutaneous injection of SMMC-7721 ball forming cells. Reactive oxygen species (Ros) (ROS) assay kit was used to detect the level of ROS in transplanted tumor tissues. Immunofluorescence was used to detect hypoxia inducible factor-1 偽 (HIF-1 偽). The results showed that the spherical cells derived from SMMC-7721 cell lines had enhanced self-renewal ability, increased expression of stem cell markers and increased drug resistance, which suggested that more cells with the characteristics of cancer stem cells were enriched in the globe-forming cells. After treated with sodium nitrite (150 渭 mol L ~ (-1), the proportion of G_0/G_1 phase cells increased, the expression of CD133,CD90 and EpCAM, and the ability of cell resistance and invasion increased. Compared with parental cells, nitrite significantly enhanced the effect of nitrite on globular cells. The results of in vivo experiments also showed that nitrite promoted the growth of granuloma, decreased the level of ROS and accumulated HIF-1 偽 in tissues. The results showed that nitrite enhanced the invasion ability of hepatoma cells by up-regulating the "dryness" of hepatoma stem cells.
【作者單位】： 河南大學(xué)護(hù)理學(xué)院;河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院;河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家環(huán)保公益項目專項(200809115) 省部共建河南大學(xué)科研項目(SBGJ090702)
【分類號】：R735.7

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本文編號：2281083