發(fā)布時(shí)間：2018-10-14 16:45

【摘要】：金雀異黃素是大豆中的主要成分,是大豆異黃酮的主要活性物質(zhì),同時(shí)也是一種酪氨酸酶抑制劑,近來研究報(bào)道在中藥中也廣泛存在。目前已有多項(xiàng)報(bào)道研究證明,金雀異黃素作為一種常見的植物雌激素,存在于多種中藥中,主要分為三類,分別為補(bǔ)益藥、活血化瘀藥和其他類,補(bǔ)益藥中如菟絲子、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、女貞子,活血化瘀藥中如丹參、牛膝、紅花、王不留行,其他如大豆、葛根等也已被報(bào)道含有金雀異黃素成分。作為一種常見的植物雌激素,金雀異黃素具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化的作用,對(duì)多種腫瘤均有廣泛治療效果。宮頸癌作為一種惡性程度高、發(fā)病率高的常見腫瘤,正危害著廣大女性的生殖健康,特別是年輕女性健康。目前主要根據(jù)臨床具體情況,選擇手術(shù)治療,放、化療和中醫(yī)藥治療等單獨(dú)使用,或者聯(lián)合治療。手術(shù)治療雖然是目前最有效可行的診治方案,但手術(shù)主要適用于Ⅱa期以下的早期患者,并要求患者無嚴(yán)重內(nèi)外科合并癥和無手術(shù)禁忌癥,對(duì)于晚期患者,已有轉(zhuǎn)移或者不能耐受手術(shù)治療的患者具有局限性。放射療法可單獨(dú)發(fā)揮作用,也可伴隨外科手術(shù)同時(shí)進(jìn)行,適用于癌變晚期患者及不能耐受手術(shù)者。但放射治療仍然有其局限性,放射治療對(duì)宮頸癌并不十分敏感且對(duì)周圍正常組織具有毒性,易產(chǎn)生多項(xiàng)并發(fā)癥,并且研究證明放射治療并不能延長(zhǎng)其生存率。化學(xué)治療更是對(duì)心、肝、腎等臟器具有毒副作用,并且會(huì)產(chǎn)生耐藥性,治療效果也不盡人意。因此尋找一種能有效提高患者存活率且不良反應(yīng)較小的抗腫瘤藥物,是目前研究的熱門方向。目前,研究中草藥及其有效成分作為抗腫瘤藥物已成為宮頸癌治療的熱點(diǎn)之一。本次研究中,我們從10種抗腫瘤中藥有效成分中篩選出了金雀異黃素作為研究對(duì)象,主要探究了金雀異黃素對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的作用以及機(jī)制探討。研究?jī)?nèi)容分為三部分:第一部分多種抗腫瘤中藥成分的篩選目的:探討10種抗腫瘤中藥有效成分對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的作用,進(jìn)而篩選出具有顯著抑制其細(xì)胞增殖的藥物進(jìn)行下一步深入研究。方法:通過CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)分別對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞進(jìn)行10種抗腫瘤中藥有效成分的篩選。結(jié)果:1、多種待篩物對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的活性抑制作用不一,并非所有的待篩物均具有抑制作用。2、多種待篩物中,當(dāng)藥物為高濃度100μM時(shí),金雀異黃素、淫羊藿苷、隱丹參酮、厚樸酚、莪術(shù)醇、齊墩果酸以及丹參酮Ⅰ抑制作用有顯著差異(p0.01)。3、其中金雀異黃素的CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,金雀異黃素的抑制細(xì)胞活性的作用與藥物濃度和刺激時(shí)間有關(guān),并且,高濃度(100μM)的抑制作用明顯,而低濃度(12.5-50μM)對(duì)細(xì)胞活性沒有明顯的作用。結(jié)論:通過查找文獻(xiàn),找出了 10種具有抗腫瘤效果的中藥有效成分,對(duì)宮頸癌細(xì)胞通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的方法進(jìn)行篩選,篩選得到金雀異黃素、淫羊藿苷、隱丹參酮、厚樸酚、莪術(shù)醇、齊墩果酸以及丹參酮Ⅰ具有抑制細(xì)胞增殖的作用,由于金雀異黃素作用較為顯著、并且目前文獻(xiàn)報(bào)道不多,因而選其進(jìn)行下一步深入研究。第二部分金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖遷移作用的研究目的:研究不同濃度的金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖遷移的作用。方法:通過CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞計(jì)數(shù)以及集落實(shí)驗(yàn)分別探討其對(duì)Hela活性的影響:通過劃痕實(shí)驗(yàn)、粘附實(shí)驗(yàn)以及Transewell小室實(shí)驗(yàn)分別探討其對(duì)細(xì)胞遷移、侵襲的影響。結(jié)果:1、通過CCK-8以及細(xì)胞計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)金雀異黃素對(duì)Hela細(xì)胞活性的影響與藥物濃度和刺激時(shí)間有關(guān),高濃度(1OOμM)在24h和48h時(shí)明顯抑制細(xì)胞增殖作用,而低濃度(12.5-50μM)對(duì)細(xì)胞活性沒有明顯作用;通過細(xì)胞集落實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)金雀異黃素(25-100μM)與溶劑對(duì)照組相比,細(xì)胞不形成團(tuán)塊狀,具有明顯抑制細(xì)胞集落形成的作用,這一結(jié)果表明,不同濃度的金雀異黃素(25-100μM)均能夠抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖。2、通過細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)金雀異黃素明顯能夠抑制Hela細(xì)胞的粘附,并且與藥物濃度呈正相關(guān)。3、通過劃痕實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)金雀異黃素具有抑制Hela細(xì)胞遷移的作用。4、通過Transewell小室實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了金雀異黃素具有抑制Hela細(xì)胞遷移、侵襲的作用。結(jié)論:金雀異黃素具有抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖、粘附、遷移和侵襲的作用,并且與藥物濃度和刺激時(shí)間有關(guān)。第三部分金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖遷移作用機(jī)制的研究目的:從蛋白以及基因表達(dá)水平上探討在FAK-paxillin信號(hào)通路中,金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖、粘附、遷移和侵襲的作用機(jī)制。方法:通過Western blot探究其蛋白表達(dá)情況,通過RT-PCR探究其mRNA表達(dá)情況。結(jié)果:1、不同濃度的金雀異黃素能夠抑制磷酸化FAK、paxillin的蛋白表達(dá)和β-catenin、Vimentin的蛋白表達(dá)。2、不同濃度的金雀異黃素能夠抑制磷酸化p38和p42/44的蛋白表達(dá)。3、不同濃度的金雀異黃素能夠抑制FAK、paxillin、Snail和TwistmRNA的表達(dá)。結(jié)論:金雀異黃素是通過抑制了 FAK-paxillin信號(hào)通路在蛋白、基因?qū)用嫔系谋磉_(dá),從而抑制了宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖、粘附、遷移和侵襲作用,該RNA、蛋白調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的靶向治療對(duì)宮頸癌的診療提供了新的可能性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2271031