【摘要】：金雀異黃素是大豆中的主要成分,是大豆異黃酮的主要活性物質(zhì),同時也是一種酪氨酸酶抑制劑,近來研究報道在中藥中也廣泛存在。目前已有多項報道研究證明,金雀異黃素作為一種常見的植物雌激素,存在于多種中藥中,主要分為三類,分別為補益藥、活血化瘀藥和其他類,補益藥中如菟絲子、淫羊藿、補骨脂、女貞子,活血化瘀藥中如丹參、牛膝、紅花、王不留行,其他如大豆、葛根等也已被報道含有金雀異黃素成分。作為一種常見的植物雌激素,金雀異黃素具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化的作用,對多種腫瘤均有廣泛治療效果。宮頸癌作為一種惡性程度高、發(fā)病率高的常見腫瘤,正危害著廣大女性的生殖健康,特別是年輕女性健康。目前主要根據(jù)臨床具體情況,選擇手術(shù)治療,放、化療和中醫(yī)藥治療等單獨使用,或者聯(lián)合治療。手術(shù)治療雖然是目前最有效可行的診治方案,但手術(shù)主要適用于Ⅱa期以下的早期患者,并要求患者無嚴(yán)重內(nèi)外科合并癥和無手術(shù)禁忌癥,對于晚期患者,已有轉(zhuǎn)移或者不能耐受手術(shù)治療的患者具有局限性。放射療法可單獨發(fā)揮作用,也可伴隨外科手術(shù)同時進行,適用于癌變晚期患者及不能耐受手術(shù)者。但放射治療仍然有其局限性,放射治療對宮頸癌并不十分敏感且對周圍正常組織具有毒性,易產(chǎn)生多項并發(fā)癥,并且研究證明放射治療并不能延長其生存率�；瘜W(xué)治療更是對心、肝、腎等臟器具有毒副作用,并且會產(chǎn)生耐藥性,治療效果也不盡人意。因此尋找一種能有效提高患者存活率且不良反應(yīng)較小的抗腫瘤藥物,是目前研究的熱門方向。目前,研究中草藥及其有效成分作為抗腫瘤藥物已成為宮頸癌治療的熱點之一。本次研究中,我們從10種抗腫瘤中藥有效成分中篩選出了金雀異黃素作為研究對象,主要探究了金雀異黃素對宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲的作用以及機制探討。研究內(nèi)容分為三部分:第一部分多種抗腫瘤中藥成分的篩選目的:探討10種抗腫瘤中藥有效成分對人宮頸癌Hela細胞的作用,進而篩選出具有顯著抑制其細胞增殖的藥物進行下一步深入研究。方法:通過CCK-8細胞增殖實驗分別對人宮頸癌Hela細胞進行10種抗腫瘤中藥有效成分的篩選。結(jié)果:1、多種待篩物對人宮頸癌Hela細胞的活性抑制作用不一,并非所有的待篩物均具有抑制作用。2、多種待篩物中,當(dāng)藥物為高濃度100μM時,金雀異黃素、淫羊藿苷、隱丹參酮、厚樸酚、莪術(shù)醇、齊墩果酸以及丹參酮Ⅰ抑制作用有顯著差異(p0.01)。3、其中金雀異黃素的CCK-8實驗結(jié)果顯示,金雀異黃素的抑制細胞活性的作用與藥物濃度和刺激時間有關(guān),并且,高濃度(100μM)的抑制作用明顯,而低濃度(12.5-50μM)對細胞活性沒有明顯的作用。結(jié)論:通過查找文獻,找出了 10種具有抗腫瘤效果的中藥有效成分,對宮頸癌細胞通過細胞增殖實驗的方法進行篩選,篩選得到金雀異黃素、淫羊藿苷、隱丹參酮、厚樸酚、莪術(shù)醇、齊墩果酸以及丹參酮Ⅰ具有抑制細胞增殖的作用,由于金雀異黃素作用較為顯著、并且目前文獻報道不多,因而選其進行下一步深入研究。第二部分金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細胞的增殖遷移作用的研究目的:研究不同濃度的金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細胞的增殖遷移的作用。方法:通過CCK-8細胞增殖實驗、細胞計數(shù)以及集落實驗分別探討其對Hela活性的影響:通過劃痕實驗、粘附實驗以及Transewell小室實驗分別探討其對細胞遷移、侵襲的影響。結(jié)果:1、通過CCK-8以及細胞計數(shù),發(fā)現(xiàn)金雀異黃素對Hela細胞活性的影響與藥物濃度和刺激時間有關(guān),高濃度(1OOμM)在24h和48h時明顯抑制細胞增殖作用,而低濃度(12.5-50μM)對細胞活性沒有明顯作用;通過細胞集落實驗,發(fā)現(xiàn)金雀異黃素(25-100μM)與溶劑對照組相比,細胞不形成團塊狀,具有明顯抑制細胞集落形成的作用,這一結(jié)果表明,不同濃度的金雀異黃素(25-100μM)均能夠抑制宮頸癌Hela細胞增殖。2、通過細胞粘附實驗,發(fā)現(xiàn)金雀異黃素明顯能夠抑制Hela細胞的粘附,并且與藥物濃度呈正相關(guān)。3、通過劃痕實驗,發(fā)現(xiàn)金雀異黃素具有抑制Hela細胞遷移的作用。4、通過Transewell小室實驗進一步驗證了金雀異黃素具有抑制Hela細胞遷移、侵襲的作用。結(jié)論:金雀異黃素具有抑制宮頸癌Hela細胞增殖、粘附、遷移和侵襲的作用,并且與藥物濃度和刺激時間有關(guān)。第三部分金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細胞增殖遷移作用機制的研究目的:從蛋白以及基因表達水平上探討在FAK-paxillin信號通路中,金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細胞增殖、粘附、遷移和侵襲的作用機制。方法:通過Western blot探究其蛋白表達情況,通過RT-PCR探究其mRNA表達情況。結(jié)果:1、不同濃度的金雀異黃素能夠抑制磷酸化FAK、paxillin的蛋白表達和β-catenin、Vimentin的蛋白表達。2、不同濃度的金雀異黃素能夠抑制磷酸化p38和p42/44的蛋白表達。3、不同濃度的金雀異黃素能夠抑制FAK、paxillin、Snail和TwistmRNA的表達。結(jié)論:金雀異黃素是通過抑制了 FAK-paxillin信號通路在蛋白、基因?qū)用嫔系谋磉_,從而抑制了宮頸癌Hela細胞的增殖、粘附、遷移和侵襲作用,該RNA、蛋白調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的靶向治療對宮頸癌的診療提供了新的可能性。
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【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

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本文編號：2271031