【摘要】：目的：以97例肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本為基礎(chǔ),結(jié)合病人的臨床資料和預(yù)后隨訪資料,研究miR-630在肝癌組織中的表達(dá)情況,探討miR-630的表達(dá)與肝癌病人臨床病理參數(shù)及手術(shù)預(yù)后的關(guān)系。方法：連續(xù)選取2010年1月至2012年12月間在華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院肝臟外科中心手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌組織97例,全部標(biāo)本均經(jīng)過病理科組織學(xué)確診,結(jié)合肝癌病人臨床病理參數(shù)及預(yù)后隨訪進(jìn)行分析。結(jié)果：結(jié)合臨床資料顯示：miR-630的表達(dá)與肝癌轉(zhuǎn)移,包膜完整性,腫瘤的分化程度(Edmonson分級(jí)),腫瘤的TNM分期,腫瘤的BCLC分期分級(jí)相關(guān)。將97例肝癌組織表達(dá)miR-630從高到低排序,以中位數(shù)為界,高于中位數(shù)的歸為高表達(dá)組,反之歸為低表達(dá)組。結(jié)合隨訪資料分析顯示,miR-630表達(dá)水平相對(duì)高的病人較之表達(dá)水平相對(duì)低的病人具有更低的復(fù)發(fā)率和更長(zhǎng)的總體生存時(shí)間。四個(gè)表卡方檢驗(yàn)顯示：miR-630的表達(dá)與AFP水平,腫瘤數(shù)目,血管侵襲,Edmonson分級(jí),BCLC分期呈負(fù)相關(guān)。單因素分析顯示：miR-630的表達(dá)水平的降低是一個(gè)評(píng)估肝癌病人手術(shù)切除治療后復(fù)發(fā)和生存時(shí)間的一個(gè)顯著而獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。結(jié)論：miR-630相對(duì)高表達(dá)的肝癌病人提示可能具有較低的轉(zhuǎn)移概率和較好的預(yù)后。目的：這部分以中等轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞系為研究工具,通過轉(zhuǎn)染miR-630的模擬物mimics或者miR-630的抑制物來研究miR-630對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為的影響。方法：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mimics或inhibitors,在轉(zhuǎn)染后的5天內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。如：用CCK-8實(shí)驗(yàn),探討miR-630對(duì)細(xì)胞增值能力的影響;用Transwell實(shí)驗(yàn),細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),探討miR-630對(duì)細(xì)胞遷移或者侵襲能力的影響；用免疫熒光實(shí)驗(yàn),探討miR-630對(duì)細(xì)胞形態(tài)及上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化的影響。以慢病毒為工具構(gòu)建穩(wěn)定的miR-630敲減的細(xì)胞系,用裸鼠皮下成瘤模型,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中探討miR-630對(duì)肝癌致瘤性的影響;用裸鼠肝臟原位種植模型,探討miR-630對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果：在中等轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞中,無論是轉(zhuǎn)染miR-630 mimics還是inhibitors細(xì)胞的增值能力都沒有發(fā)生改變。轉(zhuǎn)染miR-630 mimics的細(xì)胞,遷移,侵襲能力都減弱,細(xì)胞形態(tài)更上皮化；而轉(zhuǎn)染了inhibitors的細(xì)胞遷移,侵襲能力都增強(qiáng),細(xì)胞發(fā)生了間質(zhì)樣的改變。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞穩(wěn)定敲減miR-630并沒有改變肝癌細(xì)胞系的致瘤能力；然而卻增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞系肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及肺轉(zhuǎn)移的能力。結(jié)論：miR-630能抑制肝癌細(xì)胞的遷移,侵襲,上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化以及轉(zhuǎn)移,而對(duì)增值能力沒有影響。目的：探討miR-630在肝癌中通過抑制何種可能的癌基因調(diào)控肝癌惡性生物學(xué)行為的。方法：用生物信息庫(kù)預(yù)測(cè)miR-630的靶基因；熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄分析,免疫組化,Western blotting, RT-PCR檢測(cè)Slug是否為miR-630的靶基因。用Transwell,劃痕,細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),Western blotting, RT-PCR在功能學(xué)角度驗(yàn)證miR-630通過靶向抑制Slug從而抑制肝細(xì)胞癌的遷移,侵襲,上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化。結(jié)果：熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄分析顯示miR-630能結(jié)合Slug mRNA 3'UTR端;免疫組化相關(guān)性分析顯示肝癌組織中miR-630的表達(dá)與Slug呈負(fù)相關(guān)；Western blotting, RT-PCR檢測(cè)顯示miR-630能抑制Slug的表達(dá),以及抑制上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化相關(guān)的間質(zhì)樣標(biāo)記物；Transwell,劃痕實(shí)驗(yàn)顯示抑制Slug能逆轉(zhuǎn)miR-630 inhibitors導(dǎo)致的遷移,侵襲能力增強(qiáng)；細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),Western blotting, RT-PCR檢測(cè)顯示抑制Slug能逆轉(zhuǎn)miR-630 inhibitors導(dǎo)致的上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化相關(guān)的標(biāo)記物表達(dá)改變。結(jié)論：miR-630在肝細(xì)胞癌中通過靶向抑制Slug調(diào)控其遷移,侵襲,上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化。目的：研究調(diào)控miR-630的上游信號(hào)通路方法：利用RT-PCR檢測(cè)TGF-β對(duì)miR-630表達(dá)的影響；用NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/) and Jaspar (http://jaspar.genereg.net/)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)可能的抑制miR-630轉(zhuǎn)錄的結(jié)合位點(diǎn)；用熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄分析判斷調(diào)控miR-630轉(zhuǎn)錄的核心序列；用染色質(zhì)免疫共沉淀法(CHIP)驗(yàn)證SP1, c-jun與相應(yīng)轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合；用熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄分析探討該核心序列是否能調(diào)控miR-630轉(zhuǎn)錄；用RT-PCR驗(yàn)證SP1, c-jun 在 miR-630表達(dá)過程中發(fā)揮的作用；用Western blot探討SP1, c-jun能否間接上調(diào)miR-630的靶基因Slug。從功能學(xué)回復(fù)實(shí)驗(yàn)角度驗(yàn)證TGF-β是抑制miR-630表達(dá)的上游調(diào)控因子。如：用Transwell實(shí)驗(yàn),劃痕實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證miR-630逆轉(zhuǎn)TGF-β刺激導(dǎo)致的細(xì)胞遷移,侵襲能力增強(qiáng)；細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),Western blot, RT-PCR實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證miR-630逆轉(zhuǎn)TGF-β刺激導(dǎo)致的上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化。結(jié)果：用濃度為5ng/ml TGF-β培養(yǎng)基處理Bel7402, HL, PT-PCR檢測(cè)示miR-630表達(dá)在24小時(shí)內(nèi)呈時(shí)間依賴性降低；用TGF-β Smad, non-Smad信號(hào)通路抑制劑配合TGF-β聯(lián)合處理細(xì)胞,RT-PCR結(jié)果檢測(cè)示Erk, JNK, P38信號(hào)通路抑制劑可上調(diào)miR-630表達(dá)；NCBI和Jaspar數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)顯示miR-630轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游lkb堿基序列包含多個(gè)Erk, JNK, P38信號(hào)通路下游細(xì)胞因子結(jié)合位點(diǎn)；熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄分析檢測(cè)示miR-630轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游79bp為調(diào)控miR-630轉(zhuǎn)錄的重要序列：染色質(zhì)免疫共沉淀法(CHIP)驗(yàn)證結(jié)果示：該79bp可結(jié)合SP1, c-jun,其分別為Erk,JNK信號(hào)通路下游細(xì)胞因子；熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄分析再次驗(yàn)證該79bp為為調(diào)控miR-630轉(zhuǎn)錄的重要序列,并且SP1, c-jun結(jié)合位點(diǎn)為阻遏蛋白結(jié)合序列；RT-PCR結(jié)果示：SP1, c-jun在TGF-β下調(diào)miR-630表達(dá)中起重要作用；Western blot結(jié)果證明抑制SP1, c-jun,能部分逆轉(zhuǎn)TGF-β誘導(dǎo)的Slug表達(dá)上調(diào)；Transwell,劃痕實(shí)驗(yàn)顯示抑制miR-630 mimics能逆轉(zhuǎn)TGF-β導(dǎo)致的遷移,侵襲能力增強(qiáng)；細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),Western blotting, RT-PCR檢測(cè)顯示抑制miR-630 mimics能逆轉(zhuǎn)TGF-β導(dǎo)致的上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化及相關(guān)的標(biāo)記物表達(dá)改變。結(jié)論：TGF-β通過激活其下游的Erk/SP1,JNK/c-jun信號(hào)通路抑制miR-630表達(dá),從而調(diào)控肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;早期發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌可增加治療機(jī)會(huì)[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2000年02期

2 Schafer DF,潘朝法,李蘇云;肝細(xì)胞癌[J];第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年01期

3 中沼安二,林淑蘭,姚楨;有關(guān)小肝細(xì)胞癌病理學(xué)的最新認(rèn)識(shí)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年05期

4 靜雨;;美國(guó)肝細(xì)胞癌發(fā)病率增高[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年01期

5 張玉勛;;肝細(xì)胞癌的非手術(shù)治療[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年05期

6 徐宏勇,李開宗,付由池,竇科峰,李景夢(mèng),何揚(yáng)舉;bcl-x,bax基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年14期

7 蔡端;多中心源肝細(xì)胞癌的特征:與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的比較[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2002年02期

8 張春平;與白介素-18水平升高有關(guān)的肝細(xì)胞癌自發(fā)性消退[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2003年03期

9 薛海鷗,岳莉;兒童肝細(xì)胞癌1例報(bào)告[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

10 德力,白志剛,牧榮,賴玉書,金燦浩,夏醫(yī)君;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 卞讀軍;;肝細(xì)胞癌經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞前后磁共振波譜研究[A];2009中華醫(yī)學(xué)會(huì)影像技術(shù)分會(huì)第十七次全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2009年

2 賈建偉;趙潔;;肝細(xì)胞癌領(lǐng)域研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國(guó)中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2009年

3 陳孝平;;肝細(xì)胞癌外科治療進(jìn)展[A];湖北省第21屆腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2011年

4 張杰;劉軍建;韓云;張寧;芮靜安;金城;周柔麗;;用熒光差異顯示法篩選肝細(xì)胞癌相關(guān)新基因[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 馮仕庭;李子平;譚國(guó)勝;孫燦輝;彭振鵬;;中晚期肝細(xì)胞癌的多層螺旋CT血管造影表現(xiàn)及臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

6 張法標(biāo);方哲平;王義;董輝;叢文銘;;上皮鈣粘素和β-連接素在兒童肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

7 陳鐘杰;;螺旋CT診斷原發(fā)型肝細(xì)胞癌28例[A];2008年浙江省放射學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2008年

8 賈克東;;肝細(xì)胞癌的診斷進(jìn)展及治療現(xiàn)狀[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

9 李秋萍;龍順欽;楊小兵;鄧宏;蔡姣芝;潘宗奇;河文峰;周宇姝;歐陽(yáng)育樹;廖桂雅;吳萬(wàn)垠;;癌服靈治療晚期肝細(xì)胞癌的臨床研究[A];2012·中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會(huì)第三次會(huì)議論文集[C];2012年

10 朱明華;祝峙;劉曉紅;林靜;曲建慧;陳穎;曹曉哲;王力;倪燦榮;;乙型肝炎病毒感染與肝細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)系的分子病理學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)臨床腫瘤學(xué)協(xié)作專業(yè)委員會(huì)主任委員 秦叔逵;治療肝細(xì)胞癌 別只盯著靶向藥[N];健康報(bào);2013年

2 記者 王丹 管九蘋;肝細(xì)胞癌標(biāo)志物研究獲新進(jìn)展[N];健康報(bào);2013年

3 吳一福;四軍醫(yī)大唐都醫(yī)院發(fā)現(xiàn)硒蛋白P與肝細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

4 黎彬;肝癌研究重要進(jìn)展——預(yù)測(cè)肝癌轉(zhuǎn)移成為可能[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

5 錢文彩;α2δ1陽(yáng)性細(xì)胞為新的肝細(xì)胞癌干細(xì)胞[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2013年

6 新美;基礎(chǔ)研究進(jìn)展推動(dòng)肝臟病學(xué)進(jìn)步[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

7 周金蓮;MIB-1和bcl-2表達(dá)預(yù)測(cè)肝癌發(fā)生[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

8 張金山;要靈活運(yùn)用影像學(xué)提供的方法和手段[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

9 李杰;不能手術(shù)切除肝細(xì)胞癌的治療[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

10 ;修復(fù)肝細(xì)胞 改善肝功能[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白蘭;乙肝病毒捕獲細(xì)胞因子和信號(hào)級(jí)聯(lián)以逃避宿主免疫并維持持續(xù)感染[D];武漢大學(xué);2014年

2 何洪衛(wèi);肝細(xì)胞癌內(nèi)γδT細(xì)胞浸潤(rùn)減少及功能缺陷的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 蔡曉燕;淋巴細(xì)胞在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的差異性表達(dá)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 向?qū)?細(xì)胞周期因子FoxM1促進(jìn)肝臟再殖的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 康富標(biāo);共刺激分子B7-H3在肝細(xì)胞癌的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 楊純;Gankyrin正反饋調(diào)控Nrf2在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抗氧化作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 高霞;PNPLA3基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達(dá)與乙肝病毒感染易感性及乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的關(guān)聯(lián)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

8 彭晨星;microRNA結(jié)合位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性對(duì)肝細(xì)胞癌預(yù)后影響的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 田偉;γδT細(xì)胞免疫治療肝細(xì)胞癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

10 葉甲舟;RBM8A與肝細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及凋亡生物學(xué)特性的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王飛;CDH17調(diào)控肝細(xì)胞癌的生物學(xué)機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳中博;咖啡攝入與肝細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的Meta分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張華鵬;核受體輔激活蛋白5在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

4 郭慧敏;血清sCD25測(cè)定在肝細(xì)胞癌診斷中的意義[D];鄭州大學(xué);2015年

5 凌青霞;雙氧化酶1（Duox1）在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)調(diào)控及作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 李會(huì)芬;血清Talin-1在肝細(xì)胞癌診斷中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

7 蒙錦瑩;血管生長(zhǎng)相關(guān)因子的血清濃度與肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 戰(zhàn)勇;肝細(xì)胞癌術(shù)前造影參數(shù)與生物學(xué)表現(xiàn)相關(guān)性及術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素討論[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

9 姚樂;microRNA-32在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床預(yù)后意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 吳華;MACC1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2266142