【摘要】：研究背景骨肉瘤好發(fā)于青少年和兒童,是一種常見的原發(fā)性惡性腫瘤,其發(fā)病率高、進(jìn)展快,惡性程度高且容易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,遠(yuǎn)期生存率低。統(tǒng)計(jì)顯示,單純行截肢手術(shù)的骨肉瘤患者5年生存率大約是16%。骨肉瘤好發(fā)于四肢長(zhǎng)骨的干骺端,其它如髂骨、脊柱等部位也可發(fā)生。早期骨肉瘤的治療方法以外科截肢為主,然而這種手術(shù)創(chuàng)傷大、致殘率高,且患者遠(yuǎn)期生存率低。隨著外科手術(shù)的進(jìn)步和術(shù)前、術(shù)后化療理念的引入,目前骨肉瘤的臨床緩解率和遠(yuǎn)期生存率獲得了很大的提高。然而,盡管外科手術(shù)及和新輔助化療已獲得了很大的發(fā)展,但臨床上仍有大部分患者預(yù)后較差,我國(guó)統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)中,2015例患者中無病生存率占比56.0%,無復(fù)發(fā)生存率占比60.0%,復(fù)發(fā)率9.1%,肺轉(zhuǎn)移率24.8%,造成這一結(jié)果的主要原因是肺轉(zhuǎn)移和耐藥的發(fā)生。由于目前關(guān)于骨肉瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制尚不明確,因此闡明骨肉瘤發(fā)生的分子機(jī)制,對(duì)于骨肉瘤的診斷和治療具有重要意義。miRNA是近年來發(fā)現(xiàn)的一種小分子非編碼RNA,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制中起重要的調(diào)控作用。它們通過與基因的3’UTR序列互補(bǔ)結(jié)合導(dǎo)致腫瘤關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄抑制以及表達(dá)下調(diào)。研究表明,miRNAs的異常表達(dá)與骨肉瘤的增殖、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等生物學(xué)行為具有密切聯(lián)系。miR-143在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)異常下調(diào),其通過調(diào)控抗凋亡蛋白BCL-2的表達(dá),抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。另外,miR-143還靶向調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13 MMP-13)的表達(dá),調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲,同時(shí)還可介導(dǎo)瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性。miR-199a-3p也是介導(dǎo)骨肉瘤發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)重要的miRNA分子,在骨肉瘤細(xì)胞中上調(diào)miR-199a-3p表達(dá),導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞增殖和遷移受到抑制。此外,miR-21在人骨肉瘤組織中呈現(xiàn)異常高表達(dá),其可通過靶向調(diào)控RECK,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的促進(jìn)作用。近年來的研究揭示了很多在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用的miRNA,但是目前還未有一個(gè)miRNA應(yīng)用于骨肉瘤治療。因此,目前的研究重點(diǎn)在于揭示在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用的miRNA,并闡明其調(diào)控下游靶基因的具體機(jī)制,從而為骨肉瘤的診斷和治療提供新的分子靶標(biāo)和治療策略。整合素αV亞基(integrin subunit alpha V, ITGAV),屬于整合素α鏈家族成員。其可通過精-甘-天冬序列(arg-gly-asp, R-G-D)與多種細(xì)胞外基質(zhì)配體相結(jié)合,介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的信號(hào)傳導(dǎo)。研究表明,ITGAV在調(diào)控腫瘤血管生成、腫瘤的遷移和侵襲等過程中發(fā)揮了重要作用。首先,ITGAV與胞外配體結(jié)合能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌和激活金屬基質(zhì)蛋白蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP),通過一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞并誘導(dǎo)其遷移；同時(shí),ITGAV還能與bFGF和VEGF協(xié)同作用,抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,誘導(dǎo)腫瘤新生血管的生成。目前的研究還表明,ITGAV的表達(dá)水平可能對(duì)腫瘤的診斷、治療和預(yù)后具有指示意義。研究發(fā)現(xiàn),ITGAV的表達(dá)水平與結(jié)腸癌的進(jìn)展密切相關(guān),與腦膠質(zhì)腫瘤的惡性程度密切相關(guān),與喉和下咽鱗狀細(xì)胞癌的分化程度和有無發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。而且,高表達(dá)ITGAV往往提示惡性腫瘤的預(yù)后較差�，F(xiàn)有的研究也表明,在ITGAV在人骨肉瘤組織中呈強(qiáng)陽性表達(dá),且ITGAV的表達(dá)水平與骨肉瘤的惡性程度和臨床分期密切相關(guān)。同時(shí),在臨床治療中,化療效果顯著的骨肉瘤組織中ITGAV的表達(dá)水平明顯下降,反之,對(duì)化療不敏感的骨肉瘤組織中ITGAV的表達(dá)水平下降不明顯,提示了ITGAV不僅可以預(yù)判骨肉瘤的惡性程度,也可作為臨床中判斷化療效果的參考指標(biāo)。本課題組在前期研究中通過基因芯片篩選骨肉瘤中差異表達(dá)的miRNA發(fā)現(xiàn),miR-548c-3p在骨肉瘤組織和癌旁組織樣本中表達(dá)具有顯著差異性。有研究表明,miR-548d可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,引起細(xì)胞周期阻滯,從而抑制癌細(xì)胞的增殖。在乳腺癌中,niR-548-3p主要通過與ECHS1的3'UTR相結(jié)合,抑制ECHS1的表達(dá),從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。但目前關(guān)于miR-548-3p對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移、侵襲、周期和凋亡等生物學(xué)功能的影響仍不清楚。研究目的(1)闡明miR-548c-3p在骨肉瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平,研究其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移、侵襲、周期和凋亡等生物學(xué)功能的影響。(2)闡明miR-548c-3p通過調(diào)控靶基因ITGAV影響骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的分子機(jī)制。研究方法第一部分：闡明niR-548c-3p在骨肉瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平,以及它對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移、侵襲、周期和凋亡等生物學(xué)功能的影響。第一步：通過熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-548c-3p在20對(duì)骨肉瘤細(xì)胞株、骨肉瘤組織和癌旁組織樣本中的mRNA表達(dá)水平,然后通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其中的差異性,從而初步分析miR-548c-3p在骨肉瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)模式；第二步：選擇miR-548c-3p表達(dá)量較低的骨肉瘤細(xì)胞株SAOS2進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn),合成miR-548c-3p mimics,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞SAOS2,設(shè)三個(gè)組：Control組(只加lipofactamine)、NC組(lipofactamine+NC)和miR-548c-3p組(lipofactamine+miR-548c-3p),通過熒光定量PCR檢測(cè)miR-548c-3p表達(dá)水平來驗(yàn)證niR-548c-3p的轉(zhuǎn)染效率；第三步：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將NC和miR-548c-3p轉(zhuǎn)染至骨肉瘤細(xì)胞SAOS2,設(shè)control組(只加lipofactamine),分別在轉(zhuǎn)染Oh、24h、48h、72h和96h等五個(gè)時(shí)間點(diǎn)取細(xì)胞進(jìn)行CCK8檢測(cè),比較Control組、NC組和miR-548c-3p組SAOS2細(xì)胞增殖能力；第四步：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將NC和miR-548c-3p轉(zhuǎn)染至骨肉瘤細(xì)胞SAOS2,設(shè)control組(只加lipofactamine),轉(zhuǎn)染48小時(shí)后提取細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),進(jìn)行平板克隆實(shí)驗(yàn),比較Control組、NC組和miR-548c-3p組SAOS2細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞儀檢測(cè)三組SAOS2細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡的檢測(cè),采用PI單染和PI/AnexinV雙染法檢測(cè)在骨肉瘤細(xì)胞中過表達(dá)miR-548c-3p對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響；第五步：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將NC和miR-548c-3p轉(zhuǎn)染至骨肉瘤細(xì)胞SAOS2,設(shè)control組(只加lipofactamine),轉(zhuǎn)染48小時(shí)后提取細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),分別使用不含matrixgel和含有matrixgel的transwell小室進(jìn)行細(xì)胞遷移和侵襲能力檢測(cè),分析在骨肉瘤細(xì)胞中過表達(dá)miR-548c-3p對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響；第六步：將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞通過皮下注射的方式打入裸鼠腋下部位,細(xì)胞分組為：control組(lipofatamine組)、NC組和miR-548c-3p組。細(xì)胞注射10天后腋下部位皮下可見腫瘤性凸起,此后每隔3-4天對(duì)腫瘤的大小進(jìn)行測(cè)量,記錄數(shù)據(jù)繪制腫瘤的生長(zhǎng)曲線,通過裸鼠成瘤模型分析miR-548c-3p對(duì)細(xì)胞體內(nèi)增殖能力的影響。第二部分：闡明miR-548c-3p調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的分子機(jī)制。第一步：通過在線軟件[argetscan7.0 (http://www.targetscan.org/)和miRbase (http://www.mirbase.org/)預(yù)測(cè)并篩選miR-548c-3p的靶基因ITGAV;第二步：提取癌組織和癌旁組織的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,通過熒光定量PCR檢測(cè)ITGAV在骨肉瘤組織和癌旁組織中的nRNA表達(dá)情況。提取癌組織和癌旁組織中的蛋白,通過WESTERN-BLOT檢測(cè)ITGAV在骨肉瘤組織和癌旁組織中的蛋白表達(dá)情況；第三步：合成niRNA-548c-3p mimics、NC mimics、miRNA-548c-3p inhibitor和NC inhibitor。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將miRNA-548c-3p mimics、NC mimics、 miRNA-548c-3p inhibitor和NC inhibitor轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞,從而實(shí)現(xiàn)在骨肉瘤細(xì)胞中上調(diào)或下調(diào)miRNA-548c-3p的表達(dá)。細(xì)胞分組為：miRNA-548c-3p mimics組、NC mimics組、 miRNA-548c-3p inhibitor組和NC inhibitor組；NC mimics組是miRNA-548c-3p mimics組的對(duì)照,NC inhibitor組是miRNA-548c-3p inhibitor組的對(duì)照。通過熒光定量PCR和WB檢測(cè)各組細(xì)胞中ITGAV的mRNA和蛋白表達(dá)水平；第四步：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將miRNA-548c-3p mimics、 miRNA-548c-3p inhibitor、 NC分別與ITGAV 3'UTR野生型載體或突變型ITGAV 3'UTR突變型載體共轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞,通過熒光素酶活性檢測(cè)分析miRNA-548c-3p是否與ITGAV 3'UTR結(jié)合；第五步：合成ITGAV的siRNA,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞,NC作為對(duì)照。通過熒光定量PCR和WB檢測(cè)各組細(xì)胞中ITGAV的mRNA和蛋白表達(dá)水平,驗(yàn)證siRNA的轉(zhuǎn)染效率；第六步：選取siRNA轉(zhuǎn)染效率高的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),分別通過進(jìn)行CCK8檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖能力,通過平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的克隆形成能力,第七步：選取siRNA轉(zhuǎn)染效率高的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),采用流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞周期分布情況,研究下調(diào)ITGAV表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞周期分布的影響；第八步：選取siRNA轉(zhuǎn)染效率高的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),通過PI/AnexinV雙染法流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡率,研究下調(diào)ITGAV表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、miR-548c-3p在骨肉瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平,以及它對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移、侵襲、周期和凋亡等生物學(xué)功能的影響。熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示miR-548c-3p在癌組織中的表達(dá)顯著低于在癌旁組織中的表達(dá)水平(p0.0001)；miR-548c-3p在骨肉瘤細(xì)胞株143B(P=0.0036)、 SaoS2 (P=0.0007)、HOS (P=0.0091)中的表達(dá)水平顯著低于在成骨細(xì)胞株OB3中的表達(dá)水平。CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)檢測(cè)miR-548c-3p組細(xì)胞增殖能力比NC組低,P值分別為P=0.0013、P=0.0007和P=0.0001,這說明miR-548c-3p抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖能力。平板克隆檢測(cè)結(jié)果顯示miR-548c-3p組細(xì)胞形成克隆數(shù)目比NC組少(P=0.0015),這說明miR-548c-3p抑制骨肉瘤細(xì)胞克隆形成能力。細(xì)胞周期結(jié)果顯示,miR-548c-3p組的G2/M期細(xì)胞比例高于NC組(P0.0001),而S期比例低于NC組(P=0.003),G1期比例與NC組無明顯差異(P=0.4165)。這說明過表達(dá)miR-548c-3p導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示, control組和NC組的細(xì)胞早期、晚期和總凋亡率沒有顯著差別(P=0.7969、P=0.6505和P=0.7552)；miR-548c-3p組的早期、晚期和總細(xì)胞凋亡率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于NC組(P=0.0025、P=0.0001和P=0.0006)。這說明miR-548c-3p可以促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞凋亡。transwell檢測(cè)顯示,control組和NC組的細(xì)胞遷移和侵襲能力相似(P=0.8971和P0.999)；miR-548c-3p組的遷移和侵襲能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于NC組(P=0.002和P=0.0027)。這說明miR-548c-3p可以抑制骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,control組(lipofatamine組)和NC組裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)速度相似,而miR-548c-3p組裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于control組(lipofatamine組)和NC組。這說明niR-548c-3p可以抑制骨肉瘤細(xì)胞的體內(nèi)增殖能力。2、miR-548c-3p通過調(diào)控靶基因ITGAV影響骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的分子機(jī)制熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示ITGAV在骨肉瘤組織中的表達(dá)水平顯著高于在癌旁組織中的表達(dá)水平(P0.0001)；miRNA-548c-3p mimics組中ITGAV的mRNA表達(dá)水平低于NC mimics組(P0.0001)；miRNA-548c-3p inhibitor組中ITGAV的mRNA表達(dá)水平高于NC inhibitor組(P0.0001)。WB檢測(cè)結(jié)果顯示,miRNA-548c-3p mimics組中ITGAV的蛋白表達(dá)水平低于NC mimics組；miRNA-548c-3p inhibitor組中ITGAV的蛋白表達(dá)水平高于NC inhibitor組。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示,與ITGAV 3'UTR野生型載體共轉(zhuǎn)染,miRNA-548c-3p組熒光素酶活性低于NC組(P=0.0002),miRNA-548c-3p inhibitor組熒光素酶活性與NC組無明顯差異(P=0.3635)；而與ITGAV 3'UTR突變型載體共轉(zhuǎn)染,三組之間的熒光素酶活性無明顯差異,這說明miRNA-548c-3p通過與ITGAV 3'UTR中的“GAUUUUU"序列進(jìn)行特異性的互補(bǔ)結(jié)合。熒光定量PCR結(jié)果顯示,siRNA組細(xì)胞中ITGAV的mRNA表達(dá)水平低于NC組；WB結(jié)果顯示siRNA組細(xì)胞中ITGAV的蛋白表達(dá)水平低于NC組(P0.0001)。CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示siRNA組細(xì)胞增殖速度低于NC組(P0.0001)。平板克隆檢測(cè)結(jié)果顯示siRNA組細(xì)胞形成的克隆數(shù)少于NC組(P=0.0016)。細(xì)胞周期結(jié)果顯示,G0/G1期百分比與NC組無顯著差異(P=0.7132),S期細(xì)胞的百分比低于NC組(P0.0001),G2/M期細(xì)胞百分比高于NC組(P=0.0005)。細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示siRNA組細(xì)胞早期、晚期和總凋亡率均高于NC組(P0.0001)。結(jié)論1) miR-548c-3p在骨肉瘤組織和細(xì)胞株中低表達(dá),其表達(dá)模式符合抑癌基因的表達(dá)模式；2)在骨肉瘤細(xì)胞中過表達(dá)miR-548c-3p可抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖和克隆形成能力,這說明miR-548c-3p參與調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞增殖；3)在骨肉瘤細(xì)胞中過表達(dá)miR-548c-3p可抑制骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲形成能力,這說明miR-548c-3p參與調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲；4)在骨肉瘤細(xì)胞中過表達(dá)miR-548c-3p可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,這說明miR-548c-3p可能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡參與調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞增殖；5)通過生物信息學(xué)方法篩選出miRNA-548c-3p的下游靶基因ITGAV;熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和免疫印跡的結(jié)果顯示miRNA-548c-3p通過與ITGAV 3'UTR中的“GAUUUUU"序列進(jìn)行特異性的互補(bǔ)結(jié)合,從而下調(diào)ITGAV的表達(dá),這可能是miRNA-548c-3p調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞增殖能力的分子機(jī)制；6)CCK8和平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,下調(diào)ITGAV的表達(dá)抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖和克隆形成能力；7)PI單染法流式細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示,下調(diào)ITGAV的表達(dá)使細(xì)胞周期阻滯與G1期,這個(gè)結(jié)果與miRNA-548c-3p對(duì)細(xì)胞周期影響一致；8) PI/AnexinV雙染法流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示,下調(diào)ITGAV的表達(dá)使細(xì)胞凋亡率上升,這個(gè)結(jié)果與miRNA-548c-3p對(duì)細(xì)胞凋亡影響一致。綜上所述,我們研究揭示了miR-548c-3p在骨肉瘤中的表達(dá)模式和生物學(xué)功能,同時(shí)闡明了其通過調(diào)控下游靶基因ITGAV從而影響骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的作用機(jī)制。這些機(jī)制的闡明。為深入了解骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制提供了理論指導(dǎo),同時(shí)為骨肉瘤的診斷和治療提供了新的靶點(diǎn)和新的策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1

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2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細(xì)胞骨分化標(biāo)志檢測(cè)及臨床意義[A];中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)第七屆全國(guó)小兒腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

3 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動(dòng)子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];泛長(zhǎng)江流域骨科新進(jìn)展暨第九屆全國(guó)骨科護(hù)理研討會(huì)論文匯編[C];2007年

4 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動(dòng)子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];第八屆全國(guó)脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

5 胡宏偉;孫其志;;骨肉瘤的治療進(jìn)展[A];第十七屆中國(guó)康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第三屆海峽兩岸OS會(huì)議論文匯編[C];2008年

6 于秀淳;王偉;;影響骨肉瘤新輔助化療療效的多因素分析[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議教育集[C];2006年

7 張瑤;;四肢長(zhǎng)骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 張瑤;;四肢長(zhǎng)骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國(guó)第八屆骨科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

9 張志明;;外傷誘發(fā)骨肉瘤一例分析[A];第四次全國(guó)法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集（上卷）[C];1991年

10 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構(gòu)建及其抗骨肉瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年浙江省骨科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 任勇 李運(yùn)紅 胡顏;莫名關(guān)節(jié)痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日?qǐng)?bào);2006年

2 黃金昶;骨肉瘤可試用斑蝥治療[N];健康報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉巍;UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞侵襲過程中的作用及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳杰;HDAC5在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 馬萬里;miR-148a在骨肉瘤患者體內(nèi)的表達(dá)及其功能機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 田吉光;CD271~+骨肉瘤干細(xì)胞特性研究及以DNA-PK為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)骨肉瘤化療耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 成功;內(nèi)臟脂肪素對(duì)U2OS細(xì)胞株遷移與侵襲的影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 方永超;環(huán)氧化酶-2和miR-143在骨肉瘤中的表達(dá)和臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 趙健;microRNA-21在骨肉瘤細(xì)胞MG63中作用機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 韓康;microRNA-194在骨肉瘤中作用及機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 朱U，

本文編號(hào)：2264538