【摘要】：目的:鉬靶X線上微鈣化表現(xiàn),經(jīng)常是提示腫瘤惡性的征象,然而具體機制不詳。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是TGF-β超家族的重要成員之一,可促進骨、軟骨生成,調(diào)控細胞增殖和分化,及調(diào)節(jié)多種臟器生長發(fā)育。有研究發(fā)現(xiàn)BMPs與異位鈣化密切相關(guān),且BMP-2在多種腫瘤有異常表達。本文旨在研究BMP-2在伴微鈣化乳腺癌中的表達及與臨床病理學特征、預(yù)后之間的關(guān)系,探究其對乳腺癌的影響及調(diào)控機制。方法:1.收集天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院529例伴微鈣化病例,分析微鈣化與患者臨床病理學特征及預(yù)后的關(guān)系。并從中選取100例患者,切蠟塊進行免疫組化分析,了解其中BMP-2、Runx2、OPN的表達情況,分析BMP-2與預(yù)后的關(guān)系。2.體外實驗驗證BMP-2與乳腺癌細胞生物學行為的關(guān)系。選出低表達BMP-2的細胞系MCF-7,以及高表達BMP-2的細胞系MBA-MD-231,分別通過加rh BMP-2刺激BMP-2表達,以及加入BMP-2抑制劑Noggin來抑制BMP-2的表達,應(yīng)用MTT檢測BMP-2對腫瘤細胞增殖的影響,應(yīng)用平板克隆實驗檢測BMP-2對細胞克隆形成能力的影響,應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測BMP-2對細胞凋亡的影響,應(yīng)用劃痕試驗和Transwell實驗檢測BMP-2對侵襲遷徙能力的影響。3.我們對BMP-2調(diào)控乳腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的機制進行研究,首先利用real-time PCR和Western blot等技術(shù)分析細胞系中BMP-2與EMT相關(guān)指標的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)其調(diào)控EMT的可能,為探究其調(diào)控EMT的可能機制,我們應(yīng)用real-time PCR和Western blot等技術(shù)在乳腺癌細胞系驗證BMP-2與PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白的關(guān)系。以及加入PI3K/Akt通路抑制劑LY294002后,BMP-2對EMT的調(diào)控是否受到抑制來進一步驗證其可能的作用通路。4.建乳腺癌移植瘤模型,觀察BMP-2對移植瘤的生長、轉(zhuǎn)移等情況的影響,并應(yīng)用real-time PCR技術(shù)和免疫組化方法檢測移植瘤中EMT相關(guān)蛋白表達的變化。結(jié)果:1.伴微鈣化乳腺癌患者腫瘤較大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高,并且無進展生存相對較差,伴微鈣化為影響預(yù)后的獨立因素之一。在伴微鈣化乳腺癌組織中,BMP-2、Runx2、OPN表達明顯增高,提示三者可能參與微鈣化形成,異位骨形成可能為微鈣化形成的機制之一。BMP-2高表達與患者無進展生存明顯相關(guān),為獨立預(yù)后因素之一。2.外源性rh BMP-2可促進人乳腺癌細胞MCF-7中BMP-2的表達。而BMP-2抑制劑Noggin可以抑制MBA-MD-231細胞中BMP-2表達。體外實驗結(jié)果顯示,rh BMP-2可促進乳腺癌細胞增殖、克隆形成以及遷移侵襲能力,并且可使凋亡能力下降。而Noggin可抑制BMP-2的作用,從而抑制腫瘤增殖、克隆形成,抑制乳腺癌細胞侵襲遷移能力,并且可以促進凋亡。提示BMP-2可促進乳腺癌細胞惡性程度。3.在乳腺癌MCF-7細胞中,BMP-2的表達與EMT一些指標顯著相關(guān)。隨著BMP-2濃度增加,上皮表型E-cadherin、Cx43表達顯著下調(diào),而間質(zhì)表型N-cadherin、FN、Vimentin m RNA表達水平顯著上調(diào)。BMP-2可促進PI3K/Akt信號通路p-PI3K、p-Akt和p-m TOR表達,進而調(diào)控EMT進程。而加入此信號通路抑制劑LY294002后,p-PI3K、p-Akt、p-m TOR未出現(xiàn)明顯的上調(diào),EMT相關(guān)指標無明顯改變,BMP-2調(diào)控EMT的作用明顯減弱�？梢夿MP-2可以通過激活PI3K/Akt信號通路促進MCF-7細胞發(fā)生EMT,從而誘導(dǎo)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。4.應(yīng)用經(jīng)BMP-2處理過的乳腺癌MCF-7細胞成功建立BMP-2高表達移植瘤模型。BMP-2組移植瘤增長速度明顯快于對照組。BMP-2組出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及骨轉(zhuǎn)移的比例明顯大于對照組。與對照組相比,BMP-2組E-cadherin表達減弱,Vimentin表達增強,提示出現(xiàn)EMT現(xiàn)象。體內(nèi)實驗進一步驗證BMP-2可促進EMT進程,調(diào)控乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移。結(jié)論:1.乳腺癌伴微鈣化這一特征與腫瘤惡性度密切相關(guān)。2.BMP-2高表達于伴微鈣化乳腺癌中,且與轉(zhuǎn)移密切相關(guān),是預(yù)后不良的指標。3.經(jīng)BMP-2刺激后乳腺癌增殖轉(zhuǎn)移能力增強,惡性度提高。4.BMP-2可誘導(dǎo)PI3K/Akt通路關(guān)鍵蛋白磷酸化,調(diào)控EMT相關(guān)指標變化,誘導(dǎo)EMT進程,從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移。5.體內(nèi)實驗證實BMP-2可促進腫瘤增長以及腫瘤轉(zhuǎn)移,可能作為控制乳腺癌生長轉(zhuǎn)移的新靶點。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：2264095