【摘要】：肺癌是目前中國人癌癥死亡的最主要原因,針對肺癌的早期診斷、早期治療,精準(zhǔn)靶向治療等是目前的研究熱點。本論文主要分為兩部分,第一部分:大細(xì)胞肺癌作為肺癌的的一種少見類型,其發(fā)生率低,診斷困難,其生長迅速,全身轉(zhuǎn)移發(fā)生早,預(yù)后較其他類型的非小細(xì)胞肺癌差,因此提高大細(xì)胞肺癌的臨床診斷具有十分重要的意義。大細(xì)胞肺癌是指不具有鱗癌、腺癌、小細(xì)胞肺癌的病理特點的非小細(xì)胞肺癌。Syn、CD56和Cg A等病理標(biāo)志物來區(qū)分大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌及大細(xì)胞非神經(jīng)內(nèi)分泌癌,但是診斷的敏感性,準(zhǔn)確性不高。Secretagogin(SCGN)是一種在消化系統(tǒng)腫瘤中新發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志物,研究發(fā)現(xiàn)其聯(lián)合臨床經(jīng)典Maker可以提高診斷的準(zhǔn)確率。但是在大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌中表達(dá)情況的研究不多。本研究中,我們檢測33例大細(xì)胞肺癌以及肺癌細(xì)胞系中SCGN的表達(dá),并進一步分析SCGN表達(dá)陽性的患者其臨床特征,探討其作為新的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物對大細(xì)胞肺癌的檢測的可能。第二部分:表皮生長因子受體基因作為肺腺癌重要的驅(qū)動基因,在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。EGFR酪氨酸激酶抑制劑具有腫瘤抑制作用。在具有EGFR突變的NSCLC患者中,使用EGFR-TKI療效優(yōu)于傳統(tǒng)的化療,且毒副作用小,病人耐受性好。而Rb是人體內(nèi)重要的抑癌基因,通過控制細(xì)胞周期的進程,抑制細(xì)胞的過度增殖。Rb-E2F信號通路是調(diào)控細(xì)胞周期的關(guān)鍵信號分子和通路,通常情況下,Rb與E2F1結(jié)合,使E2F1沒有活性,但在腫瘤中經(jīng)常有各種因素導(dǎo)致Rb失活,使細(xì)胞增殖,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。多項研究已經(jīng)證實,在肺癌中普遍存在Rb蛋白的表達(dá)異常。比如,有研究顯示非小細(xì)胞肺癌中約20%-40%存在Rb蛋白表達(dá)降低。因此Rb的異常普遍存在于肺癌中,是肺癌重要的發(fā)病因素。我們通過免疫組化檢測23例EGFR突變的肺腺癌患者標(biāo)本中Rb、pRb-780和pRb-795的表達(dá)情況,分析與患者的臨床信息的關(guān)系,探討使用細(xì)胞周期抑制劑是否能有效抑制EGFR突變細(xì)胞的惡性增殖。第一部分:(1)首先在用Western Blot檢測A549、H661、H1650、H292、H358、HEK293、3T3細(xì)胞系中SCGN、Cg A、Syn、CD56的表達(dá),結(jié)果示Syn,SCGN與Cg A在H1650中高表達(dá),在H358,H292以及H661中均呈低表達(dá)或者不表達(dá),具有一定的相關(guān)性,CD56僅在A549細(xì)胞系中高表達(dá)。(2)我們進行細(xì)胞免疫組化染色進一步驗證肺癌細(xì)胞系中SCGN的表達(dá)情況以及表達(dá)位置,結(jié)果提示:SCGN在免疫組化中染色結(jié)果與免疫蛋白印跡的結(jié)果是一致的。在HEK293以及A549中高表達(dá),并在細(xì)胞核以及細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。進一步在A549細(xì)胞系中對四種Maker進行免疫熒光共定位檢測,結(jié)果示在A549細(xì)胞中存在共定位表達(dá)。(3)我們通過免疫組化以及免疫熒光驗證在33例既往術(shù)后診斷為大細(xì)胞肺癌值標(biāo)本中SCGN的表達(dá)以及與其他三種Maker的表達(dá)位置關(guān)系。在17例LCNEC患者中有16例呈SCGN陽性表達(dá),16例大細(xì)胞肺癌患者中只有2例陽性(p0.001)。說明SCGN的表達(dá)與大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌顯著相關(guān)且SCGN與Cg A、Syn、CD56在大細(xì)胞肺癌中表達(dá)具有一致性(p=0.001,p=0.003和p=0.019);分析SCGN蛋白的表達(dá)與性別、年齡、吸煙狀況、轉(zhuǎn)移狀態(tài)和臨床分期,未見相關(guān)性。免疫熒光結(jié)果示SCGN與Cg A,Syn和CD56在腫瘤組織細(xì)胞中共定位表達(dá),同時SCGN表達(dá)的范圍以及染色強度要明顯高于其他的標(biāo)志物。第二部分:在23例EGFR突變的肺腺癌患者的癌組織和肺癌周圍的正常肺組織中,分別進行Rb,pRb-780,pRb-795的免疫組化染色。結(jié)果示:(1)69.6%(16/23)的患者存在Rb表達(dá)降低/缺失,73.9%(17/23)的患者存在pRb-780染色增強,69.6%(16/23)患者存在pRb-795的過表達(dá)。(2)Rb的表達(dá)情況與患者臨床病理生理特征分析后發(fā)現(xiàn),在不同年齡、性別、吸煙史、臨床分期、腫瘤位置及不同的EGFR突變位點的患者中未見顯著性差異。(3)進一步分析Rb,pRb-780,pRb-795的表達(dá)與患者臨床信息的關(guān)系,在肺癌中Rb的表達(dá)情況與患者臨床病理生理特征分析后發(fā)現(xiàn),與年齡、性別、吸煙史、臨床分期、腫瘤位置及不同的EGFR突變位點沒有顯著性差異;(4)pRb-780蛋白在III期/IV期患者中與I期/II期患者相比,pRb-780蛋白過表達(dá)率更高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.022);pRb-795在I期/II期患者相比,III期/IV期有更多的患者存在過表達(dá),但是差異不顯著(P=0.074);結(jié)論:1.SCGN在肺癌細(xì)胞系以及大細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá),且SCGN與CD56,Cg A,Syn,存在共定位表達(dá);SCGN表達(dá)的陽性率,染色程度明顯高于其他的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物,提示SCGN可以單獨或者聯(lián)合其他的標(biāo)志物用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的診斷。2.在EGFR突變的肺腺癌患者中,Rb的表達(dá)缺失/減弱或過度磷酸化;Rb功能異常可能是EGFR突變肺腺癌患者中存在的重要發(fā)病機制。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2251622