【摘要】：背景： 大量流行病學(xué)研究表明肥胖與各種癌癥的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，肥胖通常會(huì)導(dǎo)致肝臟疾病，如非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）和更嚴(yán)重的非酒精性脂肪型肝炎（NASH），進(jìn)而導(dǎo)致肝臟發(fā)生脂肪性炎癥，亦可導(dǎo)致肝纖維化，從而誘發(fā)肝硬化，而后者是公認(rèn)的發(fā)生肝癌的高危因素之一。有研究報(bào)道在肥胖小鼠動(dòng)物模型中，無論是飲食或遺傳性肥胖都是強(qiáng)烈的誘導(dǎo)肝癌發(fā)生的因素，大量的研究表明肥胖可能通過誘導(dǎo)促癌細(xì)胞因子IL-6和TNF的產(chǎn)生進(jìn)而促進(jìn)肝臟炎癥，并通過激活致癌基因轉(zhuǎn)錄因子STAT等途徑促進(jìn)肝癌發(fā)生和發(fā)展。microRNA(miRNA)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類非編碼單鏈小分子RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控多基因的表達(dá)，是基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵成分，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝、增殖、凋亡、分化和發(fā)育，其表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致腫瘤等重大疾病。多項(xiàng)研究證據(jù)表明miRNA在肝癌的進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用，并且直接參與肝癌的分化、凋亡、侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的過程�；诖�，本論文立足于miR-27a，早先對(duì)其的研究發(fā)現(xiàn)miR-27a在脂肪細(xì)胞的分化中起關(guān)鍵作用，而最近研究表明miR-27a在乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中扮演著癌基因的角色，但是miR-27a在肥胖誘導(dǎo)的肝癌中的作用和機(jī)制尚不清楚。本文重點(diǎn)研究miR-27a對(duì)肥胖人群肝癌發(fā)生發(fā)展的作用，并探討其促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，為肥胖肝癌的診斷和治療提供新靶點(diǎn)。 目的： 探討脂肪組織分泌的miR-27a在促進(jìn)原發(fā)性肝癌發(fā)生和介導(dǎo)肥胖相關(guān)惡性腫瘤發(fā)生的機(jī)制，并為腫瘤的生長(zhǎng)并干預(yù)腫瘤的形成和進(jìn)展提供新的思路。方法： 首先應(yīng)用Real-time PCR法檢測(cè)肥胖原發(fā)性肝癌和非肥胖原發(fā)性肝癌，健康人群對(duì)照組血清中miR-27a的表達(dá)水平，和肥胖原發(fā)性肝癌，非肥胖原發(fā)性肝癌患者肝癌組織，癌旁肝組織，以及大網(wǎng)膜組織中miR-27a的表達(dá)水平。采用免疫組織化學(xué)染色方法測(cè)定臨床組織樣本中FOXO1，P21，P27，CyclinD1的表達(dá)情況。通過構(gòu)建過表達(dá)miR-27a的3T3-L1脂肪細(xì)胞，并與肝癌細(xì)胞株HepG2分組共培養(yǎng)，隨后檢測(cè)各組肝癌細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞周期，，并通過RT-PCR法和western blot法測(cè)定FOXO1，P21，P27，CyclinD1的mRNA和蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果： 所有原發(fā)性肝癌患者的腫瘤組織miR-27a水平較癌旁組織明顯升高；肥胖肝癌患者的腫瘤組織miR-27a表達(dá)水平是非肥胖肝癌患者2倍，這表明miR-27a上調(diào)可能可以作為肥胖相關(guān)肝癌的生物學(xué)診斷標(biāo)記物；相比非肥胖肝癌患者和健康人群，肥胖肝癌患者血清miR-27a水平明顯升高；肥胖肝癌患者體內(nèi)大網(wǎng)膜脂肪組織中的miR-27a水平，約為非肥胖肝癌患者和健康人群5倍。miR-27a高表達(dá)的肝癌組織中FOXO1，P21和P27表達(dá)水平顯著降低，CyclinD1表達(dá)水平顯著升高。而miR-27a低表達(dá)的癌旁組織中FOXO1，P21和P27表達(dá)水平顯著升高，而Cyclin D1的表達(dá)水平顯著降低。3T3-L1脂肪細(xì)胞可通過旁分泌miR-27a的降低肝癌細(xì)胞FOXO1，P21，P27的mRNA和蛋白表達(dá)，并增加Cyclin D1的mRNA和蛋白表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)換，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2增殖。 結(jié)論： 脂肪組織分泌的miR-27a通過下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子FOXO1，降低細(xì)胞周期抑制蛋白P21和P27的表達(dá)，增加細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白CyclinD1表達(dá)，從而促進(jìn)G1/S期的細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換，最終促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。
[Abstract]:Background:
A large number of epidemiological studies have shown that obesity is closely related to the occurrence and development of various cancers. Obesity usually leads to liver diseases, such as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) and more severe non-alcoholic fatty hepatitis (NASH), which in turn leads to fatty inflammation in the liver and liver fibrosis, leading to cirrhosis of the liver. It has been reported that both diet and hereditary obesity are strong factors inducing hepatocarcinogenesis in obese mice. A large number of studies have shown that obesity may promote hepatic inflammation by inducing the production of tumor-promoting cytokines IL-6 and TNF, and by activating carcinogenic bases. MicroRNA (microRNA) is a newly discovered non-coding single-stranded small molecule RNA, which regulates the expression of multiple genes at the post-transcriptional level. It is a key component of gene regulatory network. It is involved in regulating cell metabolism, proliferation, apoptosis, differentiation and development. Abnormal expression of microRNA can lead to cancer. Several studies have shown that microRNAs play an important role in the development of hepatocellular carcinoma and are directly involved in the differentiation, apoptosis, invasion and distant metastasis of hepatocellular carcinoma. 7A plays an oncogene role in the occurrence and development of breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer and other malignant tumors, but the role and mechanism of microarray-27a in obesity-induced liver cancer is still unclear. The diagnosis and treatment of fat liver cancer provide a new target.
Objective:
Objective To explore the mechanism of adipose tissue secreted microarray-27a in promoting the occurrence of primary hepatocellular carcinoma (PHC) and mediating the occurrence of obesity-related malignant tumors, and to provide new ideas for tumor growth and intervention of tumor formation and progression.
Firstly, the expression of microRNA-27a in the serum of obese and non-obese primary hepatocellular carcinoma, healthy control group, and obese primary hepatocellular carcinoma, non-obese primary hepatocellular carcinoma tissues, adjacent liver tissues and omentum tissues were detected by Real-time PCR. Immunohistochemical staining was used. Methods The expression of FOXO1, P21, P27 and CyclinD1 in clinical tissue samples was determined. The 3T3-L1 adipocytes overexpressing microarray-27a were constructed and co-cultured with hepatoma cell line HepG2. The proliferation activity and cell cycle of hepatoma cells were detected. The mRNA and eggs of FOXO1, P21, P27, CyclinD1 were detected by RT-PCR and Western blot. White expression.
Result:
The levels of microRNA-27a in tumor tissues of all patients with primary hepatocellular carcinoma were significantly higher than those of adjacent tissues; the levels of microRNA-27a in tumor tissues of obese patients with hepatocellular carcinoma were twice as high as those of non-obese patients with hepatocellular carcinoma, suggesting that the up-regulation of microRNA-27a might serve as a biomarker for biological diagnosis of obesity-related hepatocellular carcinoma; compared with non-obese patients with non-obe The levels of serum microRNA-27a in obese hepatocellular carcinoma patients were significantly higher than those in non-obese hepatocellular carcinoma patients and healthy controls. The levels of FOXO1, P21 and P27 in liver cancer tissues with high expression of microRNA-27a were significantly lower than those in non-obese hepatocellular carcinoma patients and healthy controls. The levels of CyclinD1 were significantly higher in hepatocellular carcinoma tissues with low expression of microRNA-27a. The expression levels of FOXO1, P21 and P27 were significantly increased, while the expression level of Cyclin D1 was significantly decreased. 3T3-L1 adipocytes could decrease the mRNA and protein expression of FOXO1, P21 and P27, and increase the mRNA and protein expression of Cyclin D1, thereby promoting G1/S transition of cell cycle and inducing the proliferation of HepG2.
Conclusion:
Mi-27a secreted by adipose tissue can promote the cell cycle transition in G1/S phase and ultimately promote the proliferation of hepatocellular carcinoma cells by down-regulating the transcription factor FOXO1, decreasing the expression of cyclin-inhibitory proteins P21 and P27, and increasing the expression of cyclin-regulated proteins Cyclin D1.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2241661