【摘要】：[目 的]通過檢測miR-193a-5p、miR-486-5p、miR-4778-5p、miR-4271、 miR-551b-3p、miR-4646-5p在宣威肺腺癌中的表達水平、分析其臨床意義及相關生物信息學分析為后續(xù)研究miRNAs在宣威肺腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制奠定理論基礎。[方法]分別以snRNAU44、snRNAU48為內(nèi)參采用實時熒光定量PCR檢測該6個miRNAs在35對宣威肺腺癌癌組織和相應對照組織相對表達量;將6個miRNA癌組織和對應正常組織中差異表達改變倍數(shù)進行l(wèi)og2轉換,分析轉換后表達改變倍數(shù)與宣威肺腺癌患者臨床資料的相關性；Ucsc基因組數(shù)據(jù)庫中分析miRNA基因前體基因組定位,選取上游10kb為可能啟動子區(qū)域進行分析,Neural Network Promoter Prediction數(shù)據(jù)庫中預測啟動子,Patch數(shù)據(jù)庫中預測可能轉錄起始點,Promoter 2.0、proscan預測可能轉錄因子,EMBOSS數(shù)據(jù)庫中預測啟動子區(qū)是否存在甲基化位點；采用Targetscan、DIANA-TarBase、miRanda數(shù)據(jù)庫中預測miRNAs可能的靶基因,將可能靶基因進行GO分析,推測該6個miRNAs在宣威肺腺癌中的可能作用。[結 果]分別以snRNAU48、snRNAU44作為內(nèi)參時miR-193a-5p、 miR-486-5p、miR-4778-5p、miR-4271、miR-551b-3p、miR-4646-5p這6個miRNA在宣威肺癌組織中相對于對應正常組織均表達下調(diào)(p均小于0.05)。6個miRNAs對數(shù)轉換后差異表達改變倍數(shù)是否小于-1與患者年齡是否大于60歲、腫瘤體積是否小于1cm、腫瘤是否浸潤生長、腫瘤是否發(fā)生局部淋巴節(jié)轉移均不存在相關性。生物信息學分析顯示：啟動子區(qū)甲基化、SP1等轉錄因子可能參與該6個miRNA的調(diào)控。miR-193a-5p、miR-486-5p、miR-4778-5p、miR-4271、miR-551b-3p、 miR-4646-5p靶基因可能的功能為參與DNA甲基化、調(diào)控細胞DNA生物合成、調(diào)控細胞膜穩(wěn)定性、參與調(diào)控腫瘤微環(huán)境、參與細胞信號轉導、參與細胞轉移、參與細胞凋亡等[結論miR-193a-5p、miR-486-5p、miR-4778-5p、miR-4271、miR-551b-3p、 miR-4646-5p在宣威肺腺癌中表達下調(diào),該6個miRNA可能在SP1等轉錄因子調(diào)控下通過靶基因在宣威肺腺癌中參與細胞信號轉導、調(diào)控腫瘤微環(huán)境、參與細胞轉移、調(diào)控細胞DNA生物合成、參與細胞凋亡、調(diào)控細胞膜穩(wěn)定性、參與DNA甲基化等。本實驗為后續(xù)研究該6個miRNA在宣威肺腺癌中的作用機制奠定了一定理論基礎和開拓了新思路。
[Abstract]:By detecting the expression level of miR-193a-5p,miR-486-5p,miR-4778-5p,miR-4271, miR-551b-3p,miR-4646-5p in Xuanwei lung adenocarcinoma and analyzing its clinical significance and bioinformatics analysis, the theoretical basis for further study on the role of miRNAs in the pathogenesis and development of Xuanwei lung adenocarcinoma was established. [methods] the relative expression of 6 miRNAs in 35 pairs of Xuan Wei lung adenocarcinoma tissues and corresponding control tissues were detected by real-time fluorescence quantitative PCR using snRNAU44,snRNAU48 as internal reference. Six miRNA cancer tissues and the corresponding normal tissues were transformed by log2, and the correlation between the change times and the clinical data of Xuanwei lung adenocarcinoma was analyzed. Analysis of miRNA Gene precursor Genome Mapping in Ucsc Genomic Database, The upstream 10kb was selected as the possible promoter region to analyze whether there were methylation sites in the predicted promoter region in the prediction promoter Patch database of the neural Network Promoter Prediction database, and the Promoter 2.0 / proscan prediction potential transcription factor was used to predict the presence of methylation sites in the promoter region in the 10kb database. The possible target genes of miRNAs were predicted by Targetscan,DIANA-TarBase,miRanda database, and the possible target genes were analyzed by GO. The possible role of the six miRNAs in Xuanwei lung adenocarcinoma was speculated. The expression of miR-193a-5p, miR-486-5p,miR-4778-5p,miR-4271,miR-551b-3p,miR-4646-5p in Xuanwei lung cancer tissues was down-regulated in comparison with the corresponding normal tissues (p < 0. 05) when snRNAU48,snRNAU44 was used as the internal reference respectively. Whether the change times of differential expression of 6 miRNAs was less than 1 and patients after logarithmic conversion of 6 miRNAs was lower than that of patients with lung cancer (p < 0. 05). Whether the age is over 60, There was no correlation between tumor volume less than 1 cm, tumor infiltration and growth, local lymphatic node metastasis. Bioinformatics analysis showed that transcription factors such as promoter methylation and SP1 might be involved in the regulation of the six miRNA. MiR-193a-5 pnmiR-486-5 pnmiR-4778-5pnmiR-4271mR-551b-3p. the function of miR-4646-5p target gene may be to participate in DNA methylation, regulate cell DNA biosynthesis, and regulate cell membrane stability, the main function of miR-4646-5p target gene is to participate in DNA methylation, to regulate cell DNA biosynthesis, and to regulate cell membrane stability. Participate in the regulation of tumor microenvironment, participate in cell signal transduction, participate in cell metastasis, participate in apoptosis. [conclusion] the expression of miR-193a-5p,miR-486-5p,miR-4778-5p,miR-4271,miR-551b-3p, miR-4646-5p in Xuanwei lung adenocarcinoma is down-regulated. These six miRNA may be involved in cell signal transduction, tumor microenvironment, cell metastasis, cell DNA biosynthesis and apoptosis through target genes in Xuanwei lung adenocarcinoma under the control of SP1 and other transcription factors. Regulate cell membrane stability and participate in DNA methylation. This study provides a theoretical basis and a new idea for the further study of the mechanism of the six miRNA in Xuanwei lung adenocarcinoma.
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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本文編號：2238026