【摘要】：目的探討m TOR信號通路在血管瘤消長中的作用,為臨床以PI3K/AKT/m TOR信號通路及AMPK/m TOR信號通路為靶點治療嬰幼兒血管瘤提供實驗參考。方法1.收集我院2008-2015年間存檔的術(shù)前均未做任何輔助性治療且病理診斷為小兒毛細血管瘤的病理標本50例,結(jié)合Mulliken分類法與Ki-67表達情況將標本進行分類和分期,免疫組織化學法檢測并比較AMPK及m TOR在血管瘤增生期和消退期中的表達情況。2.手術(shù)切取嬰幼兒增生期血管瘤組織,采用組織塊法分離培養(yǎng)血管瘤血管內(nèi)皮細胞,待單層細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底75%以上后,去掉組織塊,將細胞消化后予以傳代培養(yǎng)。取第四代細胞予以第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原鑒定。3.取對數(shù)生長期細胞,運用無血清培養(yǎng)液同步化孵育24h,對照組加入完全培養(yǎng)基4m L、二甲雙胍組加入含20mmol/L二甲雙胍的培養(yǎng)液4m L、NVP-BEZ235組加入含0.5μmol/LNVP-BEZ235的培養(yǎng)液4ml、聯(lián)合組加入含二甲雙胍與NVP-BEZ235的培養(yǎng)液(培養(yǎng)液中二甲雙胍終濃度為20mmol/L,NVP-BEZ235終濃度為0.5μmol/L)4ml,孵育24h后,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況,Western blot法檢測血管瘤血管內(nèi)皮細胞中AMPK、m TOR及p70s6k表達情況,比較各組AMPK、m TOR及p70s6k表達差異,分析血管瘤血管內(nèi)皮胞凋亡與m TOR信號通路的關(guān)系。結(jié)果1.24例增生期血管瘤AMPK、m TOR的積分光密度分別為33.94±12.78,182.43±47.10;26例退化期血管瘤AMPK、m TOR的積分光密度分別為85.87±19.53,47.22±44.52。增生期血管瘤AMPK的積分光密度明顯低于消退期,差異有顯著性(t=11.02,P0.01);增生期血管瘤m TOR的積分光密度明顯高于消退期,差異有顯著性(t=10.44,P0.01);AMPK與m TOR的表達呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.78,P0.01)。2.血管瘤血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)過程中,第一周見少量梭形細胞從細胞島邊緣爬出,第二周見細胞數(shù)量逐漸增加,且圍繞細胞島向周圍呈放射狀生長,第三周細胞開始不均勻分布生長,第四周見細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底部。倒置相差顯微鏡下見單個細胞呈梭形或不規(guī)則多邊形,細胞聚集處呈鋪路石樣或管形排列。第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原呈陽性表達。3.細胞總凋亡率:對照組為1.45±0.27,二甲雙胍組為11.98±1.00,NVP-BEZ235組為16.12±1.88,聯(lián)合組為25.96±0.96;二甲雙胍組、NVP-BEZ235組、聯(lián)合組與對照組比較,差異均有顯著性(t=17.30、13.13、42.49,P0.01)。聯(lián)合組與二甲雙胍組、NVP-BEZ235組比較,差異均有顯著性(t=3.90、8.17,P0.01)。二甲雙胍組與NVP-BEZ235組比較,差異均有顯著性(t=-18.53,P0.01)。4.AMPK表達情況:對照組為0.43±0.23,二甲雙胍組為3.97±0.40,NVP-BEZ235組為0.55±0.23,聯(lián)合組為3.99±1.10;二甲雙胍組、聯(lián)合組與照組比較,差異均有顯著性(t=13.32、5.49,P0.01);二甲雙胍組與NVP-BEZ235組比較,差異均有顯著性(t=12.91,P0.01);聯(lián)合組與NVP-BEZ235組比較,差異均有顯著性(t=5.3,P0.01);NVP-BEZ235組與對照組比較,聯(lián)合組與二甲雙胍組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(t=0.66、0.03,P0.05)。5.m TOR表達情況:對照組為6.35±1.81,二甲雙胍組為2.47±0.69,NVP-BEZ235組為1.46±0.27,聯(lián)合組為0.40±0.21;二甲雙胍組、NVP-BEZ235組及聯(lián)合組與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(t=-3.47、-4.63、-5.66,P0.05);聯(lián)合組與二甲雙胍組、NVP-BEZ235組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(t=-4.99、-5.35,P0.05);二甲雙胍組與NVP-BEZ235組比較,差異無統(tǒng)計學意義(t=2.37,P0.05)。6.p70S6K表達情況:對照組為0.65±0.22,二甲雙胍組為2.49±0.19,NVP-BEZ235組為3.98±0.55,聯(lián)合組為13.95±1.16;二甲雙胍組、NVP-BEZ235組、聯(lián)合組與對照組比較,差異均有顯著性(t=11、9.78、19.54,P0.01);聯(lián)合組與二甲雙胍組、NVP-BEZ235組比較,差異均有顯著性(t=16.9、13.46,P0.01);二甲雙胍組與NVP-BEZ235組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(t=-4.45,P0.05)。結(jié)論1.AMPK在血管瘤消退期表達高于增生期,m TOR在消退期表達低于增生期。2.激活AMPK或抑制PI3K均可使m TOR信號通路受抑,誘導體外培養(yǎng)血管瘤血管內(nèi)皮細胞凋亡,尤以同時激活AMPK和抑制PI3K時效果最為明顯。
[Abstract]:Objective To investigate the role of M TOR signaling pathway in the growth and decline of hemangioma, and to provide experimental reference for the clinical treatment of infantile hemangioma with PI3K/AKT/m TOR signaling pathway and AMPK/m TOR signaling pathway as targets. Methods 1. Collected from our hospital between 2008 and 2015, there was no preoperative adjuvant treatment and pathological diagnosis of infantile hemangioma. 50 cases of pathological specimens were classified and staged according to Mulliken's classification and Ki-67 expression. The expression of AMPK and m TOR in the proliferative and regressive stages of hemangioma was detected by immunohistochemistry. 2. The hemangioma tissues of infants and young children were excised and cultured by tissue block method. After the monolayer cells were covered with 75% or more of the bottom of the flask, the tissues were removed and digested and subcultured. The fourth generation cells were identified by factor_coagulation associated antigen. 3. The logarithmic growth phase cells were incubated in serum-free medium for 24 hours. The control group was added with 4 mL of complete medium, and the metformin group was added with 20 mmol/L. Metformin culture medium 4mL, NVP-BEZ235 group added 0.5 micromol/LNVP-BEZ235 culture medium 4ml, combined group added Metformin and NVP-BEZ235 culture medium (the final concentration of metformin in culture medium is 20 mmol/L, NVP-BEZ235 final concentration is 0.5 micromol/L) 4ml, 24 hours after incubation, flow cytometry detection of apoptosis, Western blot detection The expressions of AMPK, m TOR and P70S6K in hemangioma endothelial cells were compared, and the relationship between apoptosis of hemangioma endothelial cells and m TOR signaling pathway was analyzed. The integral optical density of AMPK in proliferative hemangioma was significantly lower than that in regressive hemangioma (t = 11.02, P 0.01); the integral optical density of M TOR in proliferative hemangioma was significantly higher than that in regressive hemangioma (t = 10.44, P 0.01); the expression of AMPK was negatively correlated with that of M TOR (r = - 0.78, P 0.0). 1) 2. During the in vitro culture of hemangioma endothelial cells, a small number of spindle cells emerged from the edge of the cell island in the first week, and the number of cells increased gradually in the second week. The cells grew radially around the cell island. At the third week, the cells began to grow unevenly, and at the fourth week, the cells covered the bottom of the culture bottle. The total cell apoptosis rate was 1.45 (+ 0.27) in the control group, 11.98 (+ 1.00) in the metformin group, 16.12 (+ 1.88) in the NVP-BEZ235 group, and 25.96 (+ 0.96) in the combined group; in the metformin group, the NVP-BEZ235 group, the conjunction group. Compared with the control group, the difference was significant (t = 17.30, 13.13, 42.49, P 0.01). Compared with metformin group, NVP-BEZ235 group, the difference was significant (t = 3.90, 8.17, P 0.01). Compared with the NVP-BEZ235 group, the difference was significant (t =-18.53, P 0.01). 4. AMPK expression in the control group was 0.43 + 0.23, and the metformin group was 0.43 + 0.23. There were significant differences between the combined group and the control group (t = 13.32, 5.49, P 0.01), the metformin group and the NVP-BEZ235 group (t = 12.91, P 0.01), and the combined group and the NVP-BEZ235 group (t = 5.3, P 0.01). Compared with the control group, there was no significant difference between the combined group and the metformin group (t = 0.66, 0.03, P 0.05). 5. MTR expression: the control group was 6.35 (+ 1.81), the metformin group was 2.47 (+ 0.69), the NVP-BEZ235 group was 1.46 (+ 0.27), the combined group was 0.40 (+ 0.21); the metformin group, the NVP-BEZ235 group and the combined group were all different from the control group. Significance of accounting (t = - 3.47, - 4.63, - 5.66, P 0.05); There were significant differences between the combined group and the metformin group, NVP-BEZ235 group (t = - 4.99, - 5.35, P 0.05); there was no significant difference between the metformin group and the NVP-BEZ235 group (t = 2.37, P 0.05). 6. p70S6K expression: the control group was 0.65 + 0.22, the metformin group was 2.49 + 0.19, and the NVP-BEZ235 group was 2.49 + 0.19, NVP-BEZ235. Metformin group, NVP-BEZ235 group, combined group and control group, the difference was significant (t = 11, 9.78, 19.54, P 0.01); combined group and metformin group, NVP-BEZ235 group, NVP-BEZ235 group, the difference was significant (t = 16.9, 13.46, P 0.01); metformin group and NVP-BEZ235 group, the difference was statistically significant (t = 16.9, 13.46, P 0.01); metformin group and NVP-BEZ235 group, the difference was statistically significant. (t = - 4.45, P 0.05). Conclusion 1. The expression of AMPK is higher in the regressive phase than in the proliferative phase, and the expression of MTOR is lower in the regressive phase than in the proliferative phase.
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R732.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉艷杰 ,李雯 ,梁劍虹 ,田娜 ,呂炳鑫 ,楊洪濤 ,李明山;嬰幼兒血管瘤及其手術(shù)治療(附76例報告)[J];青海醫(yī)藥雜志;2001年11期

2 曾祥輝,趙福運,張建國,張震康,俞光巖,何冬梅;嬰幼兒血管瘤49例的診斷與處理[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2005年03期

3 袁斯明;姜會慶;歐陽天祥;邢新;;嬰幼兒血管瘤病理結(jié)構(gòu)變化與臨床演變過程的聯(lián)系[J];中國美容整形外科雜志;2006年05期

4 唐鴻珊;朱一元;;嬰幼兒血管瘤及其治療進展[J];中國皮膚性病學雜志;2008年01期

5 ;嬰幼兒血管瘤:與低體重幼兒出生率升高有關(guān)的健康問題[J];中國口腔頜面外科雜志;2009年02期

6 ;不尋常的良性嬰幼兒血管瘤[J];中國口腔頜面外科雜志;2009年03期

7 陳曉東;林曉曦;;嬰幼兒血管瘤發(fā)病機制的研究進展[J];組織工程與重建外科雜志;2010年03期

8 李小珠;;嬰幼兒血管瘤的健康教育[J];中外醫(yī)學研究;2011年26期

9 鄭家偉;;嬰幼兒血管瘤“等待觀察”的治療策略應(yīng)予改變[J];中國口腔頜面外科雜志;2012年02期

10 黃巧玲;馮曉玲;;胰島素樣生長因子-2在嬰幼兒血管瘤中的表達及意義[J];中國美容醫(yī)學;2012年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 曾祥輝;趙福運;何冬梅;;49例嬰幼兒血管瘤的診斷與處理[A];2004'全國口腔頜面部脈管性疾病學術(shù)研討會論文集[C];2004年

2 趙東華;楊楠芳;;尿素注射治療嬰幼兒血管瘤的護理體會[A];全國外科護理學術(shù)交流暨專題講座會議、全國神經(jīng)內(nèi)、外科護理學術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年

3 黃巧玲;馮曉玲;;胰島素樣生長因子-2在嬰幼兒血管瘤中的表達及意義[A];中華醫(yī)學會整形外科學分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學專業(yè)委員會學術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

4 歐陽天祥;陳惠平;虞杰;肖燕;林軍;;嬰幼兒血管瘤的注射治療方法選擇[A];第四屆華東六省一市整形外科學術(shù)會議暨2007年浙江省整形、美容學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 陳剛;趙怡芳;;自噬在內(nèi)皮細胞缺氧應(yīng)激及嬰幼兒血管瘤發(fā)生發(fā)展過程中的雙向作用[A];中華口腔醫(yī)學會第14次全國口腔醫(yī)學學術(shù)會議（2012年會）論文匯編[C];2012年

6 李玉蘭;安秀杰;;液氮冷凍治療嬰幼兒血管瘤140例[A];首屆全國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 王緒凱;陳亞飛;;不同時期嬰幼兒血管瘤的病理變化及超微結(jié)構(gòu)變化[A];2002全國口腔頜面部血管瘤治療與研究學術(shù)研討會論文匯編[C];2002年

8 馬剛;林曉曦;金云波;李偉;王維;胡曉潔;許志成;楊川;;嬰幼兒血管瘤內(nèi)皮細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[A];第四屆華東六省一市整形外科學術(shù)會議暨2007年浙江省整形、美容學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

9 袁斯明;陳榮亮;王修坤;陳海妮;沈衛(wèi)民;周曉軍;;嬰幼兒血管瘤中血管周圍祖細胞的分離培養(yǎng)及其體外和體內(nèi)分化實驗[A];中華醫(yī)學會整形外科學分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學專業(yè)委員會學術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

10 金云波;林曉曦;葉肖肖;陳輝;馬剛;江成鴻;陳達;陳曉東;胡曉潔;;普萘洛爾作為嚴重嬰幼兒血管瘤一線治療的前瞻性研究[A];中華醫(yī)學會整形外科學分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學專業(yè)委員會學術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 陳向齊;嬰幼兒血管瘤要早治[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

2 武漢協(xié)和醫(yī)院小兒外科 湯紹濤 李帥 陽歷 整理 涂曉晨;治療嬰幼兒血管瘤不一定手術(shù)[N];健康報;2013年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 李尚濱;HIF-VEGF-Notch通路相關(guān)因子在嬰幼兒血管瘤組織中的表達和意義[D];山東大學;2015年

2 常雷;嬰幼兒血管瘤停用普萘洛爾后復發(fā)機制的初步研究[D];上海交通大學;2015年

3 凌彬;普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤的臨床療效回顧及其作用機制的初步研究[D];新疆醫(yī)科大學;2016年

4 袁斯明;嬰幼兒血管瘤病理演變機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

5 彭強;嬰幼兒血管瘤的發(fā)病機制及γ-干擾素治療作用的研究[D];四川大學;2006年

6 蔡育;同種異體移植炎癥因子1在嬰幼兒血管瘤中表達及作用機制的研究[D];武漢大學;2010年

7 吉毅;β腎上腺素受體信號通路對嬰幼兒血管瘤內(nèi)皮細胞增殖與凋亡的調(diào)控作用[D];復旦大學;2013年

8 廖洪躍;Fas配體誘導嬰幼兒血管瘤內(nèi)皮細胞凋亡的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2008年

9 徐建國;嬰幼兒血管瘤病程相關(guān)microRNAs的篩選和作用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

10 徐廣琪;普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤臨床觀察及作用機制的實驗研究[D];山東大學;2014年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 黃巧玲;胰島素樣生長因子-2在嬰幼兒血管瘤中的表達及意義[D];華中科技大學;2011年

2 王立冬;口服普萘洛爾對比激素治療嬰幼兒血管瘤臨床療效的Meta分析[D];山西醫(yī)科大學;2016年

3 李書波;三類藥物聯(lián)合注射治療嬰幼兒血管瘤的療效研究[D];山東大學;2016年

4 董建勇;口服普萘洛爾治療頭頸部嬰幼兒血管瘤臨床療效的評價[D];山東大學;2016年

5 李淼淼;尿素聯(lián)合普萘洛爾治療會陰部嬰幼兒血管瘤的臨床效果觀察[D];鄭州大學;2016年

6 吳凡;普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤的臨床療效和對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育影響的評估[D];山東大學;2016年

7 於林軍;噻嗎洛爾治療淺表嬰幼兒血管瘤的近期療效與安全性評價[D];浙江大學;2016年

8 宋洪彬;普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤的安全性及多普勒超聲跟蹤觀察的意義[D];寧夏醫(yī)科大學;2016年

9 張靜;普萘洛爾治療新疆地區(qū)嬰幼兒血管瘤的臨床療效觀察[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

10 周昱川;色素上皮衍生因子在普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤中的作用機制[D];新疆醫(yī)科大學;2017年

，

本文編號：2231946