【摘要】：目的:探討胰腺癌細(xì)胞分泌的外泌體(exosome)對胰島β細(xì)胞存活率和功能的影響及作用機(jī)制。方法:采用外泌體提取試劑盒提取小鼠胰腺癌細(xì)胞Pan02和MPC-83上清液外泌體,經(jīng)磷鎢酸染色后于透射電鏡下鑒定形態(tài);外泌體經(jīng)熒光標(biāo)記后與小鼠胰島瘤MIN6細(xì)胞共孵育48 h,檢測外泌體分泌水平和MIN6細(xì)胞的攝取水平;MTT和葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)實(shí)驗分別檢測各組細(xì)胞的存活率和胰島素分泌功能;q PCR檢測微小RNA-204(miR-204)和Bcl-2 mRNA的表達(dá);Western blot檢測線粒體凋亡信號通路相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和細(xì)胞色素C(Cyt-C)的表達(dá)。結(jié)果:透射電鏡結(jié)果顯示2種胰腺癌細(xì)胞均能分泌外泌體,且Pan02細(xì)胞分泌更多。熒光標(biāo)記的外泌體與胰島β細(xì)胞共孵育結(jié)果顯示,β細(xì)胞能夠大量攝取胰腺癌細(xì)胞分泌的外泌體。MTT和GSIS實(shí)驗結(jié)果顯示,外泌體處理組的MIN6細(xì)胞存活率和高糖刺激的胰島素分泌量顯著低于未處理組(P0.01)。q PCR結(jié)果顯示胰腺癌細(xì)胞分泌的外泌體富含miR-204,且外泌體處理后的MIN6細(xì)胞內(nèi)Bcl-2的mRNA表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示,外泌體處理的MIN6細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05),Bax、cleaved caspase-3和Cyt-C蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01)。結(jié)論:胰腺癌細(xì)胞能夠分泌外泌體,且該外泌體能夠被胰島β細(xì)胞攝取。胰腺癌細(xì)胞分泌的外泌體可以降低β細(xì)胞存活率和β細(xì)胞胰島素的分泌功能,其機(jī)制可能通過外源性上調(diào)β細(xì)胞內(nèi)miR-204的表達(dá),進(jìn)而抑制Bcl-2的mRNA和蛋白表達(dá),最終激活β細(xì)胞內(nèi)線粒體凋亡信號通路。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect and mechanism of exocrine (exosome) secreted by pancreatic cancer cells on the survival and function of pancreatic 尾 cells. Methods: the exocrine secretions of mouse pancreatic cancer cells Pan02 and MPC-83 were extracted by exocrine extraction kit, and the morphology was identified by transmission electron microscope after phosphotungstic acid staining. The exocrine was incubated with murine islet tumor MIN6 cells for 48 h after being labeled with fluorescence. The levels of exocrine secretion and the uptake of MIN6 cells were detected. The survival rate and survival rate of each group were detected by (GSIS) assay and glucose-stimulated insulin secretion (GSIS) assay, respectively. The expression of micro RNA-204 (miR-204) and Bcl-2 mRNA was detected by insulin secretory PCR. The expression of Bcl-2,Bax,caspase-3 and Cyt-C were detected by Western blot. Results: transmission electron microscopy showed that both pancreatic cancer cells secreted exocrine bodies and Pan02 cells secreted more. The results of fluorescent labeled exocrine and islet 尾 -cell incubation showed that 尾 -cells could absorb the exocrine secreted by pancreatic cancer cells in large quantities, and the results of GSIS assay showed that 尾 -cells could absorb the exocrine secreted by pancreatic cancer cells. The survival rate of MIN6 cells and insulin secretion stimulated by high glucose in exocrine treatment group were significantly lower than those in untreated group (P0.01) .Q PCR. The results showed that exocrine secreted by pancreatic cancer cells was rich in miR-204, and Bcl-2 mRNA expression in MIN6 cells treated with exosome treatment was significantly lower than that in untreated group (P0.01) .Q PCR. Western blot showed a significant down-regulation (P0.01). The expression of Bcl-2 protein in MIN6 cells treated with exocrine was significantly down-regulated (P0.05). The expression of caspase-3 and Cyt-C protein was significantly up-regulated (P0.01). Conclusion: pancreatic cancer cells can secrete exocrine, and the exocrine can be absorbed by islet 尾 cells. The exocrine secreted by pancreatic cancer cells can reduce the survival rate of 尾 cells and the insulin secretion function of 尾 -cells. The mechanism may be through exogenous up-regulation of miR-204 expression in 尾 cells, and then inhibit the expression of mRNA and protein of Bcl-2. Finally, mitochondrial apoptosis signaling pathway was activated in 尾-cells.
【作者單位】： 吉林省腫瘤醫(yī)院檢驗科;吉林省疾病預(yù)防控制中心理化所;
【基金】：吉林省科技發(fā)展計劃項目(No.20160101203JC)
【分類號】：R735.9

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本文編號：2230097