【摘要】：[目的]腎細(xì)胞癌在全世界是非常常見(jiàn)的腎惡性腫瘤之一,在人腫瘤中占2-3%,透明細(xì)胞癌是最常見(jiàn)的類(lèi)型。盡管當(dāng)前醫(yī)學(xué)診療技術(shù)的快速提高,特別是影像學(xué)診斷鑒別技術(shù)的高速發(fā)展,腎腫瘤患者的預(yù)后仍然不良。相比較非轉(zhuǎn)移腎腫瘤患者的腫瘤特異性存活率(70%),轉(zhuǎn)移性腎腫瘤患者5年腫瘤特異性存活率僅為27.1%,而且腎透明細(xì)胞癌傾向于轉(zhuǎn)移。令人遺憾的是,腎腫瘤的轉(zhuǎn)移的機(jī)制和對(duì)治療抵抗性,我們現(xiàn)在仍然沒(méi)有完全清楚,這里仍然需要更多研究和關(guān)注。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),是組織中表皮細(xì)胞向間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)換的病理生理過(guò)程,在腫瘤向鄰近和遠(yuǎn)處組織器官侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用。發(fā)生EMT過(guò)程中,表皮細(xì)胞失去它的細(xì)胞極性,以及細(xì)胞和細(xì)胞之間的緊密連接,進(jìn)而獲得間皮細(xì)胞的特征,使腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力,轉(zhuǎn)移播散至遠(yuǎn)處的臟器器官。這個(gè)現(xiàn)象過(guò)程由腫瘤微環(huán)境中的多個(gè)復(fù)合體和生長(zhǎng)因子所引起,TGF-β就是這樣一個(gè)在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有促進(jìn)和抑制雙重作用的因子。已有研究關(guān)注TGF-β在腫瘤發(fā)生EMT的不同階段發(fā)揮著的重要作用,但其在EMT初始反應(yīng)過(guò)程的作用仍存在未明確之處。Smad4被認(rèn)為是TGF-β通路和BMP信號(hào)通路的關(guān)鍵中間傳導(dǎo)蛋白,研究顯示Smad4蛋白的缺失使TGF-β經(jīng)典的信號(hào)通路失去功能,而TGF-β從早期的腫瘤抑制作用到晚期的腫瘤促進(jìn)作用。通過(guò)TGF-β信號(hào)通路的經(jīng)典和非經(jīng)典的途徑,TGF-β因子發(fā)揮著潛在的誘導(dǎo)形成EMT的作用,Smad4蛋白可以作為腎腫瘤患者預(yù)后的獨(dú)立因子。組蛋白乙酰化和去乙�；墙M蛋白表觀學(xué)修飾一種,調(diào)控基因表達(dá)的一種機(jī)制。組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶和去乙酰化酶發(fā)揮重要作用,伴隨著組蛋白的乙�；腿ヒ阴；�,從而影響著腫瘤基因表達(dá)的沉默和激活。VPA屬于Ⅰ類(lèi)HDAC類(lèi)抑制劑,數(shù)十年來(lái)作為經(jīng)典的抗癲癇藥物用于臨床,研究發(fā)現(xiàn)VPA還具有多種的抗腫瘤潛能,具有抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,生長(zhǎng)和分化,以及腎癌細(xì)胞的周期,凋亡。根據(jù)目前的研究,VPA具有調(diào)控Smad4的表達(dá)和抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的能力,鑒于Smad4在EMT過(guò)程中的重要作用,我們認(rèn)為VPA可能通過(guò)調(diào)節(jié)Smmad4蛋白,進(jìn)而抑制EMT過(guò)程,達(dá)到抑制腎腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。[方法]:腎癌細(xì)胞系給以不同濃度、不同作用時(shí)間的VPA刺激,利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和免疫蛋白印跡技術(shù)驗(yàn)證VPA作用后Smad4和EMT相關(guān)指標(biāo)的改變。以過(guò)表達(dá)Smad4質(zhì)粒和小干擾RNA轉(zhuǎn)染腎腫瘤細(xì)胞786-0,通過(guò)免疫蛋白印記技術(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在上調(diào)或下調(diào)Smad4水平后,786-0細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白指標(biāo)的改變。利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)省立醫(yī)院東院病理科,39例腎透明細(xì)胞癌臨床標(biāo)本中,Smad4,TIF1-γ和TGF-β蛋白表達(dá)量差異。[結(jié)果]:根據(jù)VPA調(diào)控EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子,我們的研究指出VPA抑制腎癌的EMT過(guò)程是通過(guò)改變Smad4的表達(dá)水平,Smad4經(jīng)過(guò)TGF-β1的誘導(dǎo),形成Smad3/4復(fù)合物從而誘導(dǎo)腫瘤EMT過(guò)程,從而可作為抗腫瘤的靶點(diǎn)抑制腎癌細(xì)胞的侵襲能力。
[Abstract]:[Objective] Renal cell carcinoma (RCC) is one of the most common renal malignancies in the world, accounting for 2-3% of all human tumors, and clear cell carcinoma is the most common type. The tumor-specific survival rate (70%) of patients with metastatic renal tumors was only 27.1% at 5 years, and clear-cell renal carcinoma tended to metastasize. Unfortunately, the mechanisms of metastasis and resistance to treatment of renal tumors are still not fully understood. More research and attention are needed here. Transforming (EMT) is a pathophysiological process in which epidermal cells transform into mesothelial cells. It plays an important role in the invasion and metastasis of tumor to adjacent and distant tissues and organs. This phenomenon is caused by multiple complexes and growth factors in the tumor microenvironment. TGF-beta is such a factor that can promote and inhibit tumor invasion and metastasis. Smad4 is considered to be a key intermediate transduction protein in the TGF-beta pathway and BMP signaling pathway. Studies have shown that the deletion of Smad4 proteins disrupts the classical signal pathway of TGF-beta and TGF-beta is suppressed by early tumors. Through the classical and non-classical pathways of the TGF-beta signaling pathway, TGF-beta plays a potential role in inducing the formation of EMT. Smad4 protein can be used as an independent prognostic factor in patients with renal tumors. Histone acetylation and deacetylation are epigenetic modifications of histones that regulate gene expression. Histone acetyltransferases and deacetylases play an important role, accompanied by histone acetylation and deacetylation, which affect the silence and activation of tumor gene expression. VPA belongs to class I HDAC inhibitors. For decades, VPA has been used as a classical antiepileptic drug in clinic. It has been found that VPA also has a variety of anti-swelling properties. According to current research, VPA has the ability to regulate the expression of Smad4 and inhibit the invasion and metastasis of tumor. Considering the important role of Smad4 in the process of EMT, we believe that VPA may inhibit the EMT process by regulating the Smmad4 protein. [Methods] Renal cancer cell lines were stimulated by VPA at different concentrations and at different time of action. The changes of Smad4 and EMT related indexes after VPA treatment were verified by real-time quantitative PCR and Western blotting. Smad4 plasmid and small interfering RNA were overexpressed and transfected into renal tumor cells 786-0. Immunohistochemistry was used to detect the expression of Smad4, TIF1-gamma and TGF-beta in 39 cases of renal clear cell carcinoma (RCC) in the Department of Pathology, East Hospital of Provincial Hospital. Our study indicates that VPA inhibits the EMT process of renal cell carcinoma by altering the expression of Smad4. Smad4 is induced by TGF-beta 1 to form Smad3/4 complex, which induces the EMT process of tumor, and can be used as an anti-tumor target to inhibit the invasion of renal cell carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.11

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本文編號(hào)：2226858