【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模焊渭?xì)胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界上最為常見的一種原發(fā)性惡性腫瘤,由于它手術(shù)后依然具有較高的復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移率以及缺乏早期診斷的生物標(biāo)記,故是最致命的疾病之一。肝細(xì)胞肝癌惡性程度較高,全球每年HCC死亡病例數(shù)高達(dá)600,000,病死率僅次于肺癌、胃癌居腫瘤相關(guān)死亡癌癥的第三位。A20即腫瘤壞死因子a誘導(dǎo)蛋白3,是一種重要的免疫負(fù)調(diào)控因子。最初,A20是在腫瘤壞死因子a (TNF-a)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞反應(yīng)中檢測(cè)到的一種誘導(dǎo)性表達(dá)蛋白,因此也被稱為TNFAIP3。它于1990年首次作為抗凋亡分子被鑒定出來。人類A20基因定位于6號(hào)染色體長臂第23位,其cDNA序列為4000bp,開放閱讀框?yàn)?370bp,編碼790氨基酸的90kDa蛋白。A20的氨基酸序列具有高度保守性,通過電鏡結(jié)構(gòu)我們發(fā)現(xiàn)其N端具有卵巢腫瘤(OTU)結(jié)構(gòu)域,其晶體結(jié)構(gòu)顯示含有10個(gè)b-螺旋和10個(gè)a-螺旋,此部位是泛素結(jié)合部位,具有去泛素化蛋白酶活性作用；而其C端則具有7個(gè)連續(xù)的Cys2-Cys2鋅指結(jié)構(gòu)域,具有泛素連接酶活性。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟,多因素的復(fù)雜過程,首先是腫瘤組織內(nèi)生成新生血管,然后腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶脫落,尋找時(shí)機(jī)侵入周圍基底膜和細(xì)胞外基質(zhì),從而使其進(jìn)入血管和淋巴管中,隨著血液循環(huán),腫瘤細(xì)胞可到達(dá)身體各器官和組織,在某一處腫瘤細(xì)胞從血管和淋巴管中穿出進(jìn)入相應(yīng)的靶器官然后增殖生長成為新的轉(zhuǎn)移灶。在這一系列的復(fù)雜過程中,有一些分子發(fā)揮著重要作用,比如細(xì)胞粘附分子,如鈣黏蛋白家族分子、整合素分子；大量文獻(xiàn)表明,鈣黏蛋白家族分子(E-cadherin, N-cadherin)主要介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用,其表達(dá)的變化與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。整合素分子主要介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)問的相互作用,同時(shí)也介導(dǎo)細(xì)胞間的相互作用。大量文獻(xiàn)表明TNF-α可通過PI3K/Akt通路；NF-κB信號(hào)通路；STAT3信號(hào)通路等多條通路來調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的EMT現(xiàn)象從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力；同時(shí)A20是典型的NF-κB信號(hào)通路抑制劑,它通過其雙功能泛素編輯酶的作用可以抑制TNF-α所激活的NF-κB信號(hào)通路。因此我們初步假設(shè)A20可否抑制TNFa增強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。由于肝癌具有較高的復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移率,惡性程度較高難以治愈,是世界范圍研究的熱點(diǎn)。所以我們把關(guān)注點(diǎn)集中在肝癌細(xì)胞上。首先我們選取75例肝癌病人的組織切片,分別取其癌組織和癌旁組織,運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)A20在癌和癌旁的表達(dá)區(qū)別,實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示我們A20可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起著一定的作用。由于我們目標(biāo)在A20和肝癌轉(zhuǎn)移方面的聯(lián)系,隨后我們又選取106例肝癌病人的癌組織切片,采用免疫組化雙染技術(shù),檢測(cè)A20和CD34,選出可以觀察到腫瘤細(xì)胞微血管侵犯的片子,然后對(duì)選出的片子進(jìn)行統(tǒng)計(jì),分析侵入微血管和未侵入血管的腫瘤細(xì)胞其A20的表達(dá)的差異。隨后我們進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),對(duì)多種肝癌細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)A20的表達(dá)情況,確定高表達(dá)和低表達(dá)細(xì)胞系。選取A20低表達(dá)細(xì)胞系SMMC-7721和huh-7,設(shè)計(jì)四組,分別為轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒pRK5組,轉(zhuǎn)染A20組,轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒pRK5組,轉(zhuǎn)染A20組。前兩組為對(duì)照不做處理,后兩組在轉(zhuǎn)染24h后加入TNFa刺激,作用濃度為50ng/ml,作用時(shí)間為24h。隨后對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn),觀察A20能否抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。然后研究其機(jī)制,主要分為兩方面：其一,A20能否抑制TNF誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程,選用兩種標(biāo)志物上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)和神經(jīng)型鈣粘蛋白(N-cadherin)。其二,A20能否抑制TNF誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的FAK的活化,選用兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)pFAK(397),pFAK(861)。從蛋白水平來檢測(cè)其活化狀態(tài)。再選取A20高表達(dá)細(xì)胞系Hep3B,對(duì)其進(jìn)行siRNA干擾,也是分成四組,處理方法和過表達(dá)體系一致。隨后檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。最后,我們進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn),選用高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞系HCCLM3,皮下接種裸鼠并注射TNFa和A20表達(dá)質(zhì)粒,一段時(shí)間后處死小鼠,制備腫瘤組織切片用免疫組化檢測(cè)CD34,觀察腫瘤細(xì)胞的微血管侵犯。通過一系列實(shí)驗(yàn)我們可以初步證明A20可抑制TNFa增強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力,并且是通過影響EMT和FAK來實(shí)現(xiàn)的。實(shí)驗(yàn)方法：一、采用肝癌臨床標(biāo)本檢測(cè)A20的表達(dá)與肝癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。1、A,20與肝癌的發(fā)生發(fā)展間的相關(guān)性(1)肝癌病人組織芯片此次實(shí)驗(yàn)所使用的肝癌病人組織芯片為75例病人的臨床標(biāo)本包括其肝癌組織和癌旁組織,并附有病人的詳細(xì)資料。(2)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)組織芯片中A20在癌組織和癌旁組織的表達(dá)差異。采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)肝癌組織芯片中A20的表達(dá)情況。此芯片經(jīng)過3小時(shí)75度烘烤后進(jìn)行脫蠟與水化,此一抗為A20 (abeam兔抗人單克隆抗體,1：500稀釋,)。次日加入二抗(中杉金橋,山羊抗兔),用DAB染色劑進(jìn)行染色,并用蘇木素染液染其細(xì)胞核,最后氨水返藍(lán),封片保存。2、A,20和肝癌的運(yùn)動(dòng)性的相關(guān)性(1)肝癌病人組織芯片此次實(shí)驗(yàn)使用106例肝癌病人組織切片均來自于齊魯醫(yī)院包括,并附有病人的詳細(xì)資料。(2)采用免疫組化雙染方法檢測(cè)中浸入血管中腫瘤細(xì)胞A20的表達(dá)與血管外的差異運(yùn)用免疫組化雙染試劑盒(購于中杉金橋公司)分別標(biāo)記A20和CD34,其中A20購于abeam公司,為兔抗人單克隆抗體,1：400稀釋使用；CD34購于中杉金橋公司,為鼠抗人單克隆抗體,1：60稀釋使用。二抗分別為山羊抗兔和山羊抗鼠,其中A20被染成棕色,CD34被染成紅色。其于步驟一致。(3)采用免疫組化雙染方法鑒定中浸入血管中的是否是腫瘤細(xì)胞仍然使用免疫組化雙染試劑盒(購于中杉金橋公司)分別標(biāo)記CK8/18和CD34,其中CK8/18購于中杉金橋公司,為鼠抗人單克隆抗體,1：100稀釋使用；CD34購于abcam公司,為兔抗人單克隆抗體,1：350稀釋使用。二抗分別為山羊抗兔和山羊抗鼠,其中CK8/18被染成棕色,CD34被染成紅色。其于步驟一致。二、選擇確定及培養(yǎng)A20高表達(dá)細(xì)胞株和低表達(dá)細(xì)胞株選擇肝癌細(xì)胞系為SMMC-7721、HEL-7402、huh-7、Hep-3B、HepG2、 HCCLM3,經(jīng)過蛋白水平檢測(cè)確定A20高表達(dá)細(xì)胞株和低表達(dá)細(xì)胞株。其中肝癌細(xì)胞系SMMC-7721、HEL-7402和HepG2均購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫,使用RPMI 1640培養(yǎng)基加入青霉素氯霉素雙抗及10%FBS,于370C、5%CO2孵箱中培養(yǎng)；huh-7購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫,使用DMEM培養(yǎng)基加入青霉素氯霉素雙抗及10%FBS培養(yǎng)；Hep-3B購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫,使用MEM培養(yǎng)基加入青霉素氯霉素雙抗及10%FBS培養(yǎng)；HCCLM3購于武漢細(xì)胞庫,使用DMEM培養(yǎng)基加入青霉素氯霉素雙抗及10%FBS培養(yǎng)三、A20對(duì)肝癌細(xì)胞系運(yùn)動(dòng)能力的作用及其機(jī)制研究1、發(fā)現(xiàn)現(xiàn)象--運(yùn)用細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A20影響TNF-a誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力選擇A20低表達(dá)細(xì)胞株SMMC-7721和huh-7,對(duì)其轉(zhuǎn)染A20質(zhì)粒使其過表達(dá),隨后對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn),觀察A20能否抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。再選取A20高表達(dá)細(xì)胞系Hep3B,對(duì)其shRNA干擾,處理方法和過表達(dá)體系一致。隨后檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。2、尋找機(jī)制-從蛋白和RNA水平檢測(cè)相關(guān)通路的變化(1)A20影響TNF-a誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞EMT改變a)采用PCR和Western-blot檢測(cè)A20對(duì)EMT相關(guān)分子作用情況仍然采用A20過表達(dá)體系和干擾體系,分組和處理方式與上述一致。選用EMT相關(guān)指標(biāo)上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)和神經(jīng)型鈣粘蛋白(N-cadherin)。分別從RNA和蛋白水平檢測(cè)A20的作用。b)進(jìn)一步證明A20是通過NF-κB信號(hào)通路來作用于EMT相關(guān)分子選用細(xì)胞系及分組處理方法與上述一致,此次使用共轉(zhuǎn)染的方法,用脂質(zhì)體包裹P65小干擾和A20質(zhì)�；駻20小干擾shRNA一同轉(zhuǎn)入細(xì)胞系中。其共轉(zhuǎn)染體系分組為A20高表達(dá)體系：PRK5+siNC, A20+siNC, PRK5+siP65, A20+siP65;A20低表達(dá)體系：shNC+siNC, shA20+siNC, shNC+siP65, shA20+siP65。之后再收取蛋白,用Western-blot方法檢測(cè)A20是否通過NF-κB信號(hào)通路來作用于EMT相關(guān)分子。(2)A20影響TNF-a誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞FAK的活性a)采用Western-blot技術(shù)檢測(cè)A20對(duì)FAK的作用選用相應(yīng)的A20高表達(dá)細(xì)胞株和低表達(dá)細(xì)胞株對(duì)其進(jìn)行過表達(dá)和小干擾。分組和處理方式與上述一致。對(duì)于研究對(duì)象黏著般激酶FAK,選用兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)pFAK(397),pFAK(861)。從蛋白水平來檢測(cè)A20對(duì)其作用。b)證明A20是通過結(jié)合RIPK1來對(duì)FAK發(fā)揮作用首先選用肝癌細(xì)胞SMMC-7721,接種到6孔板中,待其貼壁后使用脂質(zhì)體包裹RIPK1小干擾進(jìn)入細(xì)胞中,采用Western-blot檢測(cè)RIPK1的干擾效率。繼續(xù)選用SMMC-7721將其按一定數(shù)目接種到6孔板中,此次實(shí)驗(yàn)分三組,空白對(duì)照,只加入TNFa組,加入TNFa及RIPK1干擾組。采用Western-blot方法來驗(yàn)證在TNFa刺激下當(dāng)RIPK1被干擾后,FAK的磷酸化水平是否降低。隨后,我們證明A20是否可以通過作用于RIPK1來影響FAK的磷酸化。仍然選用SMMC-7721細(xì)胞系,按上述方法接種到6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,次日待其貼壁后進(jìn)行共轉(zhuǎn)染,使用脂質(zhì)體LIP2000包裹RIPK1小干擾和A20質(zhì)粒共同進(jìn)入細(xì)胞中,24小時(shí)后加入TNFa刺激,一段時(shí)間后收取蛋白,采用Western-blot方法來驗(yàn)證A20是否可以通過作用于RIPK1來影響FAK的磷酸化。此次實(shí)驗(yàn)分為四組,均加入TNFa刺激分別為：PRK5+siNC, A20+siNC, PRK5+siRIPK1, A20+ siRIPK1。c)A20是通過作用FAK來影響RAC1活性選用相應(yīng)的AA20高表達(dá)細(xì)胞株Hep-3B和低表達(dá)細(xì)胞株SMMC-7721, huh-7對(duì)其進(jìn)行過表達(dá)和小干擾。分組和處理方式與上述一致。將細(xì)胞消化后種于直徑10cm培養(yǎng)皿中,貼壁后轉(zhuǎn)染A20,加刺激,然后按RAC1活性試劑盒方法收取蛋白檢測(cè)其活性。四、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證A20對(duì)肝癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性的作用(1)裸鼠腫瘤模型的構(gòu)建購買裸鼠10只,購于北京華阜康生物科技股份有限公司,周齡4-6周,雄性。準(zhǔn)備肝癌細(xì)胞系HCCLM3,培養(yǎng)傳代,狀態(tài)良好后將其腋下注射打人裸鼠皮下,細(xì)胞數(shù)為每只1×107個(gè),兩周后腫瘤形成,分為兩組,開始分別注射空白質(zhì)粒pRK5和A20質(zhì)粒兩天一次。同時(shí)注射TNF α。質(zhì)粒注射5次后處死裸鼠,取出腫瘤塊,石蠟包埋切片。(2)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的微血管侵犯此次腫瘤標(biāo)本共10例,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各5例；對(duì)照組為空白質(zhì)粒pRK5注射組和實(shí)驗(yàn)組為重組質(zhì)粒pRK5-A20注射組,采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)腫瘤標(biāo)本中CD34的表達(dá)情況。此石蠟切片經(jīng)過2小時(shí)75度烘烤后進(jìn)行脫蠟,水化,高溫高壓熱修復(fù),冷卻后在進(jìn)行阻斷其內(nèi)源性過氧化物酶,PBS清洗用山羊血清封閉其非特異性位點(diǎn),室溫40分鐘后加入一抗4℃過夜。此一抗為CD34 (abcam鼠抗兔單克隆抗體,1：200稀釋)。次日加入二抗(中杉金橋,山羊抗鼠),用DAB染色劑進(jìn)行染色,并用蘇木素染液染其細(xì)胞核,最后氨水返藍(lán),封片保存。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：一A20與肝癌的轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性在肝癌病人組織芯片中,75例病人的肝癌組織和癌旁組織檢測(cè)A20的表達(dá)差異,選擇相應(yīng)視野通過統(tǒng)計(jì)分析得出A20在癌旁組織中的表達(dá)顯著高于其在肝癌組織中的表達(dá)(P0.001)。我們探究A20能否抑制肝癌的轉(zhuǎn)移,選用106例肝癌病人組織切片進(jìn)行免疫組化雙染,目的蛋白為A20和血管內(nèi)皮CD34,其中A20被染成棕色,CD34被染成紅色。其中有89例肝癌病人組織切片可以觀察到腫瘤細(xì)胞的微血管侵犯。統(tǒng)計(jì)分析可以得出進(jìn)入到血管中的腫瘤細(xì)胞其A20的表達(dá)顯著低于未侵入血管中的腫瘤細(xì)胞A20的表達(dá)(P0.001)。這提示A20可能對(duì)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移起到抑制作用。為了進(jìn)一步確定侵入血管中的是腫瘤細(xì)胞而不是其他間質(zhì)細(xì)胞,我們采用組化雙染,靶蛋白為CD34和角蛋白CK8/18,其中CK8/18蛋白染成棕色,CD34被染成紅色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)侵入血管中的細(xì)胞可表達(dá)角蛋白CK8/18,這表明侵入血管中的細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。二肝癌細(xì)胞系中A20表達(dá)差異的鑒定我們選用五種肝癌細(xì)胞系SMMC-7721、HEL-7402、huh-7、Hep-3B、HCCLM3通過蛋白水平檢測(cè)Hep-3B為A20高表達(dá)細(xì)胞株,SMMC-7721、HEL-7402、huh-7、 HCCLM3為A20低表達(dá)細(xì)胞株。因此在體外實(shí)驗(yàn)過程中我們選用SMMC-7721、 huh-7構(gòu)建A20過表達(dá)體系,選用Hep-3B進(jìn)行A20干擾使其低表達(dá)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)選用肝癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系HCCLM3構(gòu)建腫瘤模型。三A20能夠抑制TNF a誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證A20對(duì)肝癌侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)的研究采用細(xì)胞跨膜的方法即transwell小室來實(shí)施：結(jié)果顯示在TNFa刺激下,當(dāng)高表達(dá)A20時(shí),A20能夠抑制肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力：當(dāng)干擾A20表達(dá)后,干擾組的肝癌細(xì)胞其遷移和侵襲能力則會(huì)增強(qiáng)。然而,在未刺激組無論A20表達(dá)高低與否,其對(duì)肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力沒有作用。因此我們認(rèn)為A20可抑制由TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。四A20主要通過影響EMT進(jìn)程和FAK的活化來抑制肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力對(duì)其機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)：首先A20是典型的NF-κB抑制劑,它能抑制TNFa引起的NF-κB的活化。隨后通過查閱文獻(xiàn)我們猜想：A20可能通過影響肝癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程和FAK-RAC1通路來抑制TNFα誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移。我們選取A20過表達(dá)和低表達(dá)兩種細(xì)胞體系來驗(yàn)證猜想。首先,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)A20能抑制TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程,即在蛋白水平和RNA水平均能上調(diào)E-cad,下調(diào)N-cad。隨后,我們阻斷NF-κB通路,發(fā)現(xiàn)A20抑制EMT相關(guān)分子的現(xiàn)象消失了。說明A20通過阻斷NF-κB通路來抑制TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞EMT進(jìn)程。其次,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)A20可以降低TNFa誘導(dǎo)的FAK的磷酸化水平,同時(shí)降低了FAK下游的RAC1-GTP活性。我們還發(fā)現(xiàn)當(dāng)沉默RIPK1表達(dá)后A20對(duì)TNFa誘導(dǎo)的FAK活化的抑制作用明顯減弱了,這表明A20可能通過對(duì)RIPK1的泛素化降解,影響RIPK1和FAK的結(jié)合,進(jìn)而抑制FAK的活化。而在未刺激組中無論A20表達(dá)高低與否,其對(duì)EMT分子和FAK、RAC1的表達(dá)均無明顯作用。綜上所述,我們認(rèn)為A20可通過抑制TNFa引起的NF-κB的活化來阻礙肝癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程,還可以通過RIPK1來阻斷FAK-RAC1通路的活化,從而最終抑制TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。五體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證A20對(duì)肝癌運(yùn)動(dòng)能力的作用在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)已證明A20可以通過作用于EMT和FAK抑制TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力,因此我們通過裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步驗(yàn)證A20的功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組(注射空白載體pRK5)相比,實(shí)驗(yàn)組(注射pRK5-A20質(zhì)粒)腫瘤細(xì)胞微血管侵犯的數(shù)量顯著減少。這表明A20對(duì)肝癌運(yùn)動(dòng)能力的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：一A20抑制由TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。二A20通過影響EMT進(jìn)程來抑制TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。三A20通過作用RIPK1/FAK/RAC通路來抑制TNFa誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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10 嚴(yán)翩;;肝癌最喜歡折騰哪些人?[J];肝博士;2009年04期

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1 羅偉玲;陳澤紅;;在肝癌病人中開展健康教育的幾點(diǎn)體會(huì)[A];全國護(hù)理臨床研究學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文會(huì)編[C];2001年

2 湯釗猷;;提高肝癌療效的探討[A];2008年浙江省外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

3 鄭樹森;;肝癌的診治進(jìn)展[A];2009年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 曾文鋌;謝青山;朱科倫;馬佩球;劉衍民;;射頻毀損治療中晚期肝癌的初步研究(附12例臨床報(bào)告)[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 宋恕平;盛立軍;劉波;;肝癌藥物治療的新探索[A];中國臨床腫瘤學(xué)教育專輯（2001）——中國抗癌協(xié)會(huì)臨床腫瘤學(xué)協(xié)作中心（CSCO）第五屆年會(huì)論文集[C];2001年

6 陸益錢;;肝癌病人的健康教育體會(huì)[A];第一屆全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

7 楊秉輝;;肝癌綜合治療的選擇[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

8 談菊萍;;肝癌病人的心理表現(xiàn)及護(hù)理對(duì)策[A];全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2005年

9 曾帶娣;岳建榮;王翠霞;田月月;;肝癌病人心理變化的護(hù)理對(duì)策[A];全國傳染病護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 林云萍;;肝癌病人的心理特點(diǎn)及護(hù)理對(duì)策[A];全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 沙文茹 本期專家 李基業(yè);肝癌術(shù)后如何康復(fù)[N];中國消費(fèi)者報(bào);2003年

2 記者 唐先武邋通訊員 黃顯斌;我科學(xué)家在肝癌發(fā)病機(jī)制研究中獲新進(jìn)展[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 副主任醫(yī)師 周德瑞;肝癌病人能生育喂奶嗎[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

4 通訊員 程守勤;五類危險(xiǎn)人群尤需警惕肝癌[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

5 本報(bào)記者 李娜;肝癌高發(fā)真相探源[N];吉林日?qǐng)?bào);2013年

6 黃靜　李媛媛;丙肝發(fā)展成肝癌速度或更快[N];人民政協(xié)報(bào);2013年

7 記者 黃才剛;肝癌宜因人施治[N];健康報(bào);2000年

8 鐘肖協(xié);肝癌“偏愛”哪些人[N];陜西日?qǐng)?bào);2000年

9 黃顯斌邋唐明山;我科學(xué)家在肝癌發(fā)病機(jī)制研究中取得重大進(jìn)展[N];光明日?qǐng)?bào);2007年

10 福星;肝癌如何早發(fā)現(xiàn)[N];民族醫(yī)藥報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王明海;Musashi-2通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)乙肝病毒相關(guān)性肝癌進(jìn)展的作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 周少來;CXCL5促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤及其在肝癌微環(huán)境中的作用和機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 劉艷豐;PROX1通過上調(diào)HIF-1α的表達(dá)及蛋白穩(wěn)定性促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 景瑩;拷貝數(shù)變異基因SERPINA5和SMARCA4在肝癌細(xì)胞中功能及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 趙琪;Ftx IncRNA編碼的miR-545/374a在HBV相關(guān)的肝癌中的變化及其意義[D];山東大學(xué);2015年

6 王健;肝癌多中心發(fā)生與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的臨床病理和分子遺傳學(xué)差異研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

7 朱觀南（Chee Yong Sung）;肝癌的中西醫(yī)治療法及規(guī)律研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

8 盧逸;活化態(tài)肝星狀細(xì)胞與肝癌間質(zhì)血管生成的相關(guān)性研究[D];中山大學(xué);2013年

9 黃華;癌旁免疫炎癥相關(guān)因子及癌內(nèi)骨橋蛋白表達(dá)與肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)關(guān)系的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 黃興華;肝癌預(yù)防、早期診斷及發(fā)生機(jī)制中三個(gè)相關(guān)問題的探討[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳曼;Ki67、VEGF、P53在移植后肝癌復(fù)發(fā)中的預(yù)測(cè)價(jià)值及化療對(duì)移植后復(fù)發(fā)肝癌患者的預(yù)后影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 楊帥;ZNF545在肝癌中的表觀遺傳學(xué)改變及功能的研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

3 齊冰;肝癌患者肝臟中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶活性變化[D];鄭州大學(xué);2015年

4 楊文;RNF2抑制肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為及其與MANF相互作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王顯騰;A20抑制TNF-α誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的遷移[D];山東大學(xué);2015年

6 盧樂樂;NG2在肝癌中的表達(dá)以及與患者預(yù)后相關(guān)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 楊西勝;MiR-200a/ZEB2調(diào)控肝癌干性樣細(xì)胞惡性表型轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 黃唐嘉;肝癌危險(xiǎn)因素的流行病學(xué)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

9 鄧燕;白介素-16基因多態(tài)性與肝癌遺傳易感性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

10 聞炳基;組織多肽特異性抗原在肝癌的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2001年

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本文編號(hào)：2224753