【摘要】：線粒體是高度動態(tài)的細(xì)胞器,處于不斷的分裂與融合的平衡動態(tài)過程中。線粒體的分裂融合除了對維持線粒體形態(tài)、鈣穩(wěn)態(tài)、ROS產(chǎn)生[1,2]等方面有重要作用外,還對細(xì)胞代謝、增殖、遷移[3-5]有重要影響。研究表明,三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的預(yù)后較普通非三陰性乳腺癌差[6],其原因可能與腫瘤細(xì)胞存活能力增強(qiáng)[7,8]及缺乏有效的靶向治療有關(guān),但具體機(jī)制尚未完全明確。本課題以線粒體分裂融合為切入點,探究線粒體分裂融合動態(tài)平衡對三陰性乳腺癌細(xì)胞存活的影響及其機(jī)制。目的本項目以三陰性乳腺癌為研究對象,選擇介導(dǎo)線粒體分裂的分子Drp1、介導(dǎo)線粒體融合的分子Mfn1為切入點,探究:(1)、三陰性乳腺癌中線粒體分裂融合分布狀態(tài)及其與預(yù)后的相關(guān)性;(2)、線粒體分裂融合調(diào)控三陰性乳腺癌細(xì)胞生長的作用;(3)、線粒體分裂融合調(diào)控三陰性乳腺癌細(xì)胞生長的機(jī)制。材料與方法1、用透射電子顯微鏡(TEM)觀察三陰性乳腺癌臨床標(biāo)本線粒體分裂融合分布狀態(tài),統(tǒng)計學(xué)分析預(yù)后相關(guān)性。2、用免疫組化(IHC)、Western blot、qRT-PCR檢測三陰性乳腺癌臨床組織樣本與細(xì)胞中Drp1和Mfn1蛋白質(zhì)、mRNA水平。3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染構(gòu)建Drp1介導(dǎo)的線粒體分裂、Mfn1介導(dǎo)的線粒體融合三陰性乳腺癌細(xì)胞模型。4、MTS實驗檢測Drp1/Mfn1介導(dǎo)的線粒體分裂融合細(xì)胞模型的細(xì)胞活力。5、裸鼠乳腺原位成瘤實驗檢測Drp1/Mfn1介導(dǎo)的線粒體分裂融合細(xì)胞模型的成瘤能力。6、AnnexinⅤ-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL染色檢測Drp1/Mfn1介導(dǎo)的線粒體分裂融合對細(xì)胞凋亡的影響。7、Eud實驗和IHC Ki67染色檢測Drp1/Mfn1介導(dǎo)的線粒體分裂融合對細(xì)胞增殖的作用。8、Western blot、IHC檢測Drp1、Mfn1、Notch1、NICD1蛋白水平變化、Mito Traker Green染色檢測線粒體形態(tài)探究線粒體分裂融合與Notch信號的交互作用。9、AnnexinⅤ-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)和Edu分別檢測線粒體分裂融合與Notch信號交互作用對細(xì)胞凋亡、增殖的影響。10、Western blot檢測線粒體分裂融合與Notch信號交互作用對Survivin蛋白表達(dá)的調(diào)控。11、MST實驗驗證Survivin介導(dǎo)的線粒體分裂融合與Notch信號交互對細(xì)胞活力的影響。結(jié)果1、線粒體分裂在三陰性乳腺癌中增加、融合減少,并且介導(dǎo)線粒體分裂的Drp1表達(dá)與TNBC預(yù)后呈負(fù)相關(guān),介導(dǎo)線粒體融合的Mfn1表達(dá)與預(yù)后呈正相關(guān)。2、Drp1介導(dǎo)的線粒體分裂促進(jìn)三陰性乳腺癌細(xì)胞存活、增殖、抑制細(xì)胞凋亡;Mfn1介導(dǎo)的線粒體融合抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞存活、增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3、Drp1介導(dǎo)的線粒體分裂促進(jìn)Notch1表達(dá)和NICD1活化、Mfn1介導(dǎo)的線粒體融合抑制Notch1表達(dá)和NICD1活化。4、Notch信號激活促進(jìn)線粒體分裂、抑制線粒體融合。5、線粒體分裂與Notch信號的交互作用抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖,并且正向調(diào)控Survivin的表達(dá)。6、Survivin介導(dǎo)了線粒體分裂與Notch信號的交互作用對三陰性乳腺癌細(xì)胞活力的影響。結(jié)論本課題明確了線粒體分裂與Notch信號通路的正向反饋調(diào)控作用,并且其通過survivin介導(dǎo),促進(jìn)了三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖以及抑制細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Mitochondria are highly dynamic organelles in the process of constant division and fusion. Mitochondrial division and fusion not only play an important role in maintaining mitochondrial morphology, calcium homeostasis, ROS production [1,2], but also have an important impact on cell metabolism, proliferation and migration [3-5]. The prognosis of breast cancer (TNBC) is worse than that of non-tri-negative breast cancer (6). The reason may be related to the enhancement of tumor cell viability [7,8] and the lack of effective targeted therapy, but the specific mechanism is not fully clear. The aim of this project is to investigate the distribution of mitochondrial fission and fusion and its relationship with prognosis in triple-negative breast cancer. (2) Mitochondrial fission and fusion regulation. Materials and Methods 1. The distribution of mitochondrial fission and fusion was observed by transmission electron microscopy (TEM), and the prognostic correlation was analyzed statistically. 2. Immunohistochemistry (IHC), Western blot, and qRT-PCR were used. Drp1 and Mfn1 proteins and mRNA levels were detected in clinical tissue samples and cells of triple-negative breast cancer. Mitochondrial division mediated by Drp1 and triple-negative breast cancer cell model mediated by Mfn1 were constructed by cell transfection. 4. MTS assay was used to detect the cell viability of the triple-negative breast cancer cell model mediated by Drp1/Mfn1. Tumor formation assay was used to detect the tumorigenic ability of Drp1/Mfn1-mediated mitochondrial division and fusion cell model.6, Annexin V-FITC/PI flow cytometry, TUNEL staining to detect the effect of Drp1/Mfn1-mediated mitochondrial division and fusion on cell apoptosis.7, Eud test and IHC Ki67 staining to detect the effect of Drp1/Mfn1-mediated mitochondrial division and fusion on cell proliferation. Mito Traker Green staining was used to detect mitochondrial morphology to explore the interaction between mitochondrial fission fusion and Notch signal. 9. Annexin V-FITC/PI flow cytometry and Edu were used to detect the effects of mitochondrial fission fusion and Notch signal interaction on apoptosis and proliferation, respectively. 10. Western blot was used to detect the regulatory effect of mitochondrial mitotic fusion and Notch signaling on the expression of Survivin protein. 11. MST assay verified the effect of Survivin-mediated mitochondrial fusion and Notch signaling interaction on cell viability. Results 1. Mitochondrial division increased, fusion decreased and mitochondrial division mediated by Survivin-mediated mitochondrial fusion in triple-negative breast cancer. The expression of Drp1 was negatively correlated with the prognosis of TNBC, and the expression of MFn1 mediated mitochondrial fusion was positively correlated with the prognosis. Mitochondrial fusion mediated by Mfn1 inhibits Notch1 expression and NICD1 activation. 4. Notch signal activation promotes mitochondrial division and inhibits mitochondrial fusion. 5. The interaction of mitochondrial division and Notch signal inhibits cell apoptosis, promotes cell proliferation, and positively regulates the expression of Survivin. Conclusion This study clarifies the positive feedback regulation of mitochondrial division and Notch signaling pathway and promotes the proliferation and inhibits apoptosis of triple-negative breast cancer cells through survivin mediation.
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于春艷;李洪巖;康勁松;鐘加滕;孫連坤;;線粒體分裂融合基因在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞損傷中的作用[J];中國婦幼保健;2009年33期

2 張子怡;張勇;;線粒體動態(tài)變化與線粒體質(zhì)量控制:運(yùn)動的適應(yīng)與調(diào)節(jié)[J];中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志;2011年09期

3 張寧;王士雷;李淑虹;李瑜;王鵬;賈長新;;線粒體分裂蛋白抑制劑在大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年18期

4 楊軼;楊敏;;線粒體融合與分裂:治療缺血性心臟疾病的潛在靶點[J];今日藥學(xué);2012年12期

5 阿力木江·買買提江;高秀芳;金波;施海明;;線粒體動力學(xué)與心肌細(xì)胞能量代謝的研究進(jìn)展[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年05期

6 郝希純;王東明;;Drp1蛋白調(diào)節(jié)線粒體分裂機(jī)制及其在疾病中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年08期

7 賀文鳳;曹青;洪葵;;線粒體對iPSC再程序化的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年03期

8 張倩;張宏偉;夏建華;連亞軍;謝南昌;;線粒體分裂蛋白抑制劑對癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2014年02期

9 許美芬;何軼群;管敏鑫;;線粒體融合、分裂與神經(jīng)變性疾病[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年12期

10 韓小建;萬玉英;楊章堅;張劍鋒;危永芳;賴啟南;;利用蛋白導(dǎo)入法沉默線粒體分裂調(diào)節(jié)蛋白Drp1的表達(dá)[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年05期

相關(guān)會議論文 前5條

1 楊軼;楊敏;;線粒體融合與分裂:治療缺血性心臟疾病的新靶點?[A];2011年中國藥學(xué)大會暨第11屆中國藥師周論文集[C];2011年

2 楊軼;劉居理;楊敏;;線粒體融合和分裂與心臟疾病[A];中國藥理學(xué)會第十一次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2011年

3 于瀅;王瑞元;;運(yùn)動對不同組織線粒體動力學(xué)的影響[A];2013年中國生理學(xué)會運(yùn)動生理學(xué)專業(yè)委員會年會暨“運(yùn)動與健康”學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

4 于瀅;王瑞元;;運(yùn)動對不同組織線粒體動力學(xué)的影響[A];2013年中國生理學(xué)會運(yùn)動生理學(xué)專業(yè)委員會年會暨“運(yùn)動與健康”學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

5 楊軼;楊敏;;線粒體融合與分裂:治療缺血性心臟疾病的潛在靶點~[A];2014年廣東省藥師周大會論文集[C];2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 李國兵;Cofilin調(diào)控腫瘤細(xì)胞凋亡和線粒體自噬的作用機(jī)制及其干預(yù)策略研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 喬沛豐;外源性硫化氫對N2a細(xì)胞和APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠線粒體分裂融合的影響及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

3 張宏偉;鋰—匹羅卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元線粒體分裂變化研究[D];鄭州大學(xué);2015年

4 陳方哲;PINK1基因通過線粒體分裂融合途徑對腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

5 李夏春;人全長Tau蛋白過度表達(dá)對線粒體分裂融合動態(tài)及細(xì)胞退變的影響[D];華中科技大學(xué);2013年

6 高丹忱;Dynamins在小鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制及Dynasore的保護(hù)作用[D];浙江大學(xué);2013年

7 劉玉和;氧化應(yīng)激誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞死亡過程中溶酶體—線粒體途徑的作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2009年

8 余超;線粒體分裂融合失衡與膿毒癥心肌抑制關(guān)系研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

9 徐琳琳;阿爾茨海默病模型APPsw/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠中線粒體動力學(xué)的動態(tài)變化[D];山東大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 韓雙雪;淫羊藿苷修復(fù)阿爾茲海默癥線粒體分裂—融合動力學(xué)失衡的機(jī)制研究[D];深圳大學(xué);2015年

2 陳咪咪;MCU介導(dǎo)線粒體分裂蛋白Drp-1在人中性粒細(xì)胞遷移中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張楠;大鼠骨骼肌鈍挫傷恢復(fù)過程中線粒體融合—分裂基因表達(dá)情況的研究[D];山東體育學(xué)院;2015年

4 周永方;線粒體分裂調(diào)控因子drp-1對于線蟲壽命的調(diào)節(jié)功能研究[D];杭州師范大學(xué);2016年

5 陳俊莉;阿魏酸通過誘導(dǎo)線粒體自噬保護(hù)糖氧剝奪引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 王瑞肖;解偶聯(lián)蛋白2減緩高糖加重缺氧性神經(jīng)細(xì)胞損傷及其與線粒體分裂/融合關(guān)系的實驗研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2016年

7 曹海燕;線粒體分裂與鈣信號交互作用促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

8 王穎;血紅素氧合酶1對內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠的線粒體融合—分裂的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

9 李剛;線粒體分裂抑制劑-1在大鼠急性脊髓損傷中的保護(hù)作用及其機(jī)制[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

10 申菲菲;線粒體分裂在甲狀腺鱗癌細(xì)胞SW579細(xì)胞增殖、凋亡以及侵襲中的作用[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號：2220776