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MiR-21對肺癌細胞增殖與凋亡的影響

發(fā)布時間:2018-08-25 11:55
【摘要】:目的探討miR-21對肺癌細胞增殖與凋亡的影響。方法培養(yǎng)人肺癌細胞HBE、H460、A549和H446,將實驗分為miR-21 inhibitor組、miRNA scramble組、空白對照組。熒光定量檢測肺癌細胞H460、A549和H446 miR-21的表達;熒光定量PCR檢測將miR-21 inhibitor和miRNA scramble轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)至對數(shù)生長期的人肺癌細胞H460后,對照組不轉(zhuǎn)染的各組細胞的表達量;MTT實驗檢測轉(zhuǎn)染miR-21 inhibitor后對細胞增殖的影響;流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染miR-21 inhibitor后對細胞凋亡的影響;Western印跡檢測與凋亡相關(guān)蛋白的活性。結(jié)果肺癌細胞H460、A549和H446miR-21的表達顯著高于正常肺癌細胞HBE(P0.01),由于肺癌細胞株H460的miR-21表達在3個細胞株中高表達,因此選擇肺癌細胞株H460做后續(xù)研究;將miR-21 inhibitor組和miRNA scramble組轉(zhuǎn)染到肺癌細胞株H460后,熒光定量PCR顯示,miR-21 inhibitor組的miR-21的相對表達量為顯著低于空白對照組(P0.01),miRNA scramble組的相對表達量與空白對照組無差異(P0.05);MTT結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染4 d后,miRNA scramble組與空白對照組細胞增殖率無差異(P0.05),而miR-21 inhibitor組顯著低于空白對照組(P0.05),且隨時間延長,細胞增殖率逐漸下降;流式結(jié)果顯示,與空白對照組和miRNA scramble組比較,miR-21 inhibitor組細胞的凋亡率顯著升高(P0.01);Western印跡顯示,miR-21 inhibitor組Cleaved-caspase-3和Bax蛋白的表達顯著高于miRNA scramble組和空白對照組,而miR-21 inhibitor組Bcl-2蛋白的表達顯著低于miRNA Scramble組和空白對照組(P0.05)。結(jié)論下調(diào)miR-21的表達,可抑制肺癌細胞H460的生長,增加細胞的凋亡,其作用機制可能與Bcl-2家族的調(diào)節(jié)有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of miR-21 on proliferation and apoptosis of lung cancer cells. Methods Human lung cancer cells HBE,H460,A549 and H446 were cultured and divided into miR-21 inhibitor group and blank control group. The expression of H460A549 and H446 miR-21 in lung cancer cells was detected by fluorescence quantitative PCR, and miR-21 inhibitor and miRNA scramble were transfected into human lung cancer cells H460 at logarithmic growth stage by fluorescence quantitative PCR. The effect of miR-21 inhibitor transfection on cell proliferation and apoptosis after transfection of miR-21 inhibitor were detected by flow cytometry and the activity of apoptosis-related protein was detected by Western blot. Results the expression of H460 A549 and H446miR-21 in lung cancer cell line was significantly higher than that in normal lung cancer cell line HBE (P0.01). Because the miR-21 expression of lung cancer cell line H460 was highly expressed in three cell lines, lung cancer cell line H460 was selected for follow-up study. After transfection of miR-21 inhibitor group and miRNA scramble group into lung cancer cell line H460, fluorescence quantitative PCR showed that the relative expression of miR-21 in the inhibitor group was significantly lower than that in the control group (P0.01) and there was no difference between the control group and the control group (P0.05). After 4 days of transfection, there was no difference in cell proliferation rate between scramble group and blank control group (P0.05), but the proliferation rate of miR-21 inhibitor group was significantly lower than that of blank control group (P0.05). Compared with the control group and the miRNA scramble group, the apoptosis rate of the miR-21 inhibitor group was significantly higher than that of the control group (P0.01). Western blot showed that the expression of Cleaved-caspase-3 and Bax protein in the miR-21 inhibitor group was significantly higher than that in the miRNA scramble group and the blank control group. The expression of Bcl-2 protein in miR-21 inhibitor group was significantly lower than that in miRNA Scramble group and blank control group (P0.05). Conclusion the down-regulated expression of miR-21 can inhibit the growth of H460 cells and increase the apoptosis of H460 cells. The mechanism may be related to the regulation of Bcl-2 family.
【作者單位】: 湖北科技學院附屬第一醫(yī)院心胸外科;
【基金】:湖北省自然科學基金(No.2014CFB307)
【分類號】:R734.2

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本文編號:2202806

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