【摘要】：目的:該課題探索穿心蓮內(nèi)酯對膽囊癌GBC-SD及NOZ細胞在體內(nèi)、外的抑制作用及其相關(guān)機制,從而為穿心蓮內(nèi)酯成為一種具有潛在應(yīng)用價值的新型膽囊癌治療藥物提供理論依據(jù)。方法:通過MTT實驗、細胞單克隆實驗探究穿心蓮內(nèi)酯對膽囊癌細胞增殖的抑制作用;利用流式細胞儀檢測和Hoechst 33342染色分析穿心蓮內(nèi)酯對膽囊癌細胞凋亡及細胞周期的影響;利用細胞劃痕實驗及Transwell小室實驗探究穿心蓮內(nèi)酯對膽囊癌細胞轉(zhuǎn)移性的影響作用;通過裸鼠皮下成瘤實驗檢測穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)對膽囊癌細胞成瘤的抑制作用。通過Western blot實驗檢測在穿心蓮內(nèi)酯作用后凋亡及周期相關(guān)蛋白表達情況,并通過qRT-PCR實驗、Western blot實驗及免疫組化染色探討穿心蓮內(nèi)酯作用于膽囊癌細胞后體內(nèi)及體外的相關(guān)分子機制。結(jié)果:結(jié)果表明穿心蓮內(nèi)酯有抑制膽囊癌細胞增殖作用,且呈現(xiàn)出劑量和時間依賴性。穿心蓮內(nèi)酯可以誘導(dǎo)膽囊癌細胞的凋亡,并出現(xiàn)明顯的核固縮、凋亡小體形成的形態(tài)改變。在蛋白水平上,Bcl-2水平下降,Bax水平升高,促進線粒體內(nèi)細胞色素C向胞質(zhì)釋放,激活下游的caspase-9,caspase-3等,誘發(fā)線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑。穿心蓮內(nèi)酯治療后膽囊癌細胞中處于S期的細胞比例升高,誘發(fā)S期細胞周期停滯,cyclin A及cyclin D1表達下降,裸鼠成瘤實驗表明,穿心蓮內(nèi)酯治療組裸鼠成瘤體積及重量比對照組都明顯減小,對于穿心蓮內(nèi)酯對膽囊癌作用機制的研究我們發(fā)現(xiàn),穿心蓮內(nèi)酯可以在體內(nèi)和體外抑制膽囊癌細胞JAK2-STAT3信號通路。結(jié)論:我們的研究結(jié)果揭示穿心蓮內(nèi)酯在膽囊癌細胞中的抗癌作用,并證實穿心蓮內(nèi)酯激活膽囊癌GBC-SD和NOZ細胞線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑、誘導(dǎo)S期周期停滯和抑制膽囊癌細胞的轉(zhuǎn)移特性。此外,我們的研究表明該藥物可以抑制NOZ細胞裸鼠皮下種植瘤的生長。對穿心蓮內(nèi)酯在膽囊癌中的抗癌機制研究,我們發(fā)現(xiàn)其對膽囊癌的抗癌作用可能與抑制JAK2/STAT3信號通路有關(guān)。這些結(jié)果為穿心蓮內(nèi)酯成為一種具有潛在應(yīng)用價值的膽囊癌治療藥物提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to explore the inhibitory effect of andrographolide on GBC-SD and NOZ cells in vivo and in vitro and its related mechanism, so as to provide a theoretical basis for andrographolide to become a new type of therapy for gallbladder carcinoma with potential application value. Methods: the inhibitory effect of andrographolide on the proliferation of gallbladder cancer cells was investigated by MTT assay and monoclonal assay, and the effects of andrographolide on apoptosis and cell cycle of gallbladder cancer cells were analyzed by flow cytometry and Hoechst 33342 staining. The effect of andrographolide on the metastasis of gallbladder cancer cells was investigated by cell scratch test and Transwell chamber test. The inhibitory effect of andrographolide on tumor formation of gallbladder cancer cells in vivo was detected by subcutaneous tumorigenesis test in nude mice. Apoptosis and expression of cycle related proteins were detected by Western blot assay. The molecular mechanism of andrographolide acting on gallbladder cancer cells in vivo and in vitro was investigated by qRT-PCR blot assay and immunohistochemical staining. Results: the results showed that andrographolide inhibited the proliferation of gallbladder cancer cells in a dose and time dependent manner. Andrographolide could induce apoptosis of gallbladder cancer cells, with obvious nuclear pyknosis and morphological changes of apoptotic bodies. At the protein level, the level of Bcl-2 decreased and Bax increased, which promoted the release of cytochrome C into cytoplasm, activated downstream caspase-9,caspase-3, and induced mitochondria mediated apoptosis. After treatment with andrographolide, the proportion of cells in S phase increased and the expression of cyclin A and cyclin D1 decreased in S phase cell cycle arrest. The tumorigenic volume and weight of nude mice in andrographolide treatment group were significantly lower than those in control group. We found that andrographolide could inhibit the JAK2-STAT3 signaling pathway of gallbladder cancer cells in vivo and in vitro after the study of the mechanism of andrographolide on gallbladder carcinoma. Conclusion: our results reveal the anticancer effect of andrographolide in gallbladder cancer cells and demonstrate that andrographolide activates mitochondrial apoptosis in GBC-SD and NOZ cells. To induce phase S cycle arrest and inhibit metastasis of gallbladder cancer cells. In addition, our study suggests that the drug can inhibit the growth of subcutaneous implanted tumor in NOZ cells in nude mice. To study the anticancer mechanism of andrographolide in gallbladder carcinoma, we found that the anticancer effect of andrographolide on gallbladder carcinoma may be related to the inhibition of JAK2/STAT3 signaling pathway. These results provide a theoretical basis for andrographolide as a potential therapeutic drug for gallbladder carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.8

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本文編號：2202629