【摘要】：目的:對(duì)于膀胱癌的治療目前仍以手術(shù)、放療、化療為主;此外,還包括輔助性化療以提高腫瘤的治療效果。盡管如此,但是膀胱癌仍有較高的的復(fù)發(fā)率。新型膀胱癌特異性溶瘤腺病毒的研究已成為當(dāng)代膀胱癌生物治療研究的熱點(diǎn),它可以在膀胱腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性的增殖并且殺滅腫瘤腫瘤細(xì)胞,是腫瘤靶向治療的重要方法。目前對(duì)溶瘤腺病毒的療效已經(jīng)進(jìn)行了相應(yīng)的研究,但是安全性和毒性仍存在較大的爭(zhēng)議,并且已報(bào)道的溶瘤腺病毒的毒性主要集中于急性毒性實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn),對(duì)于溶瘤腺病毒的生殖毒性的研究仍未見(jiàn)報(bào)道。因此本課題將我們實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的膀胱癌特異性溶瘤腺病毒Ad-PSCAE-UPⅡ-E1A(APU-E1A)進(jìn)行一般生殖毒性實(shí)驗(yàn)和致畸毒性實(shí)驗(yàn);評(píng)價(jià)胎鼠的骨骼結(jié)構(gòu),并且觀察F1代的實(shí)質(zhì)內(nèi)臟組織的發(fā)育情況。為溶瘤腺病毒的安全性提供基本的數(shù)據(jù)支持。方法:我們委托北京五加和公司將我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建完成的膀胱癌特異性溶瘤腺病毒Ad-PSCAE-UPⅡ-E1A(APU-E1A)進(jìn)行擴(kuò)增、純化和鑒定。小鼠購(gòu)買(mǎi)與甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。整個(gè)安全性評(píng)價(jià)體系分為三部分:急性毒性實(shí)驗(yàn),一般生殖毒和致畸毒性實(shí)驗(yàn)。急性毒性是將擴(kuò)增的溶瘤腺病毒以腹腔給藥的方式一次性注射進(jìn)入小鼠的腹腔,觀察小鼠的行為改變和體重的變化,14天后處死小鼠檢測(cè)小鼠血液中淋巴細(xì)胞和血小板以及肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的測(cè)定;病理組織的切片進(jìn)行HE染色后,觀察溶瘤腺病毒對(duì)于各組織臟器的鏡下病理改變。一般生殖毒性實(shí)驗(yàn)是指將小鼠給藥之后,進(jìn)行合籠交配,觀察胎鼠和子代小鼠的發(fā)育情況;首先處理雄性小鼠:先將雄性小鼠連續(xù)給藥28天,給藥方式為肌肉注射,給藥的時(shí)間為隔日給藥;雌性小鼠,在雄性小鼠給藥兩周后開(kāi)始給藥,連續(xù)給藥14天,給藥方式為肌肉注射,給藥時(shí)間為隔日給藥;完成給藥后將雌雄小鼠合籠交配。交配成功后將受孕小鼠分為兩部分,一部分在受孕16天后進(jìn)行安樂(lè)死,然后取出胎鼠,去除內(nèi)臟和皮膚進(jìn)行骨骼染色,觀察骨骼改變。另一部分自然分娩,將出生后的小鼠飼養(yǎng)30天后處死,測(cè)定小鼠的體重變化,并且對(duì)各組織進(jìn)行病理切片,觀察組織在在鏡下改變。致畸毒性實(shí)給藥方案:將交配后的雌性小鼠在第六天開(kāi)始給藥,隔日給藥一次,直到受孕后第14天;一部分在第16天后安樂(lè)死,取出胎鼠,觀察胚胎骨骼結(jié)構(gòu)的變化,另一部分自然分娩后,自然生長(zhǎng)30天,觀察生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的改變,然后將小鼠處死,將各組織制作成病理切片,觀察進(jìn)行HE染色后的鏡下改變。結(jié)果在小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)中,小鼠出現(xiàn)扭體等腹痛的體征,實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重增加快于對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異;另外在小鼠的解剖發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠的的腹腔出現(xiàn)血性腹水,肝臟呈現(xiàn)出亞急性重型肝炎的表現(xiàn),鏡下觀察小鼠的肝臟組織呈現(xiàn)出嚴(yán)重的肝組織壞死,正常的肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞;其他組織臟器均無(wú)明顯的變化。在一般生殖毒實(shí)驗(yàn)的研究中發(fā)現(xiàn),對(duì)照組與低劑量組、中劑量組、高劑量組之間比較,各組之間胎鼠的窩重和胎盤(pán)重均無(wú)明顯的改變,胎鼠的體長(zhǎng)和尾長(zhǎng)之間的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義,小鼠的骨骼染色均顯示正常,在子一代的發(fā)育過(guò)程之中,各組之間小鼠的體重改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義,但是這種差異通過(guò)小鼠的體重增長(zhǎng)變化的曲線發(fā)現(xiàn)差異不大,這可能是由于個(gè)體之間的差異和受孕時(shí)雌鼠的體重不同造成的。在小鼠的致畸毒性實(shí)驗(yàn)的過(guò)程之中,低中高三個(gè)劑量組與對(duì)照組之間進(jìn)行比較,胎鼠的胎盤(pán)和窩重各組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在胎鼠的體長(zhǎng)和尾長(zhǎng)之間的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義,在子一代的發(fā)育過(guò)程之中,小鼠的體重增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義,但是從小鼠的生長(zhǎng)曲線上看,這種差異不大,由于小鼠的各組之間生長(zhǎng)曲線顯示各組之間的差異不大,所以不認(rèn)為這是由于溶瘤腺病毒所引起。結(jié)論:我們所構(gòu)建的膀胱組織特異性溶瘤腺病毒((Ad-PSCAE-UPII-E1AAR(APU-E1A-AR)在急性毒性試驗(yàn)中,可能具有較為嚴(yán)重的肝臟毒性,肝臟可能為溶瘤腺病毒的靶器官;另外在給予治療劑量的100倍時(shí),無(wú)小鼠死亡,說(shuō)明此種腺病毒的安全性還是值得肯定的。在小鼠的一般生殖毒性試驗(yàn)和致畸毒性實(shí)驗(yàn)中,各組織間的差異不是很大,無(wú)明顯的改變,因此,認(rèn)為我們所構(gòu)建的溶瘤腺病毒對(duì)于小鼠的生殖系統(tǒng)的影響不大,是一種相對(duì)較為安全的腫瘤的基因治療生物制劑,對(duì)于懷孕的病人和負(fù)責(zé)腫瘤治療的醫(yī)護(hù)人員的生育能力和致畸性影響較小
[Abstract]:Objective: Currently, the treatment of bladder cancer is still mainly surgery, radiotherapy, chemotherapy; in addition, it also includes adjuvant chemotherapy to improve the therapeutic effect of tumor. Nevertheless, bladder cancer still has a high recurrence rate. Specific proliferation and killing of tumor cells in bladder cancer cells is an important method for tumor targeted therapy. At present, the efficacy of oncolytic adenovirus has been studied, but the safety and toxicity of oncolytic adenovirus are still controversial. The reported toxicity of oncolytic adenovirus mainly focuses on acute toxicity test. The reproductive toxicity of oncolytic adenovirus (oncolytic adenovirus Ad-PSCAE-UP II-E1A), which was constructed in our laboratory, has not been reported for a long time. Methods: Beijing Wujiahe Company was commissioned to amplify, purify and identify the adenovirus Ad-PSCAE-UP II-E1A (APU-E1A), which has been constructed in our laboratory. The mice were purchased from the animal laboratory of Gansu University of Traditional Chinese Medicine. The whole safety evaluation system is divided into three parts: acute toxicity test, general reproductive toxicity test and teratogenic toxicity test. Acute toxicity is to inject the amplified oncolytic adenovirus into the abdominal cavity of mice by intraperitoneal administration, observe the changes of behavior and weight of mice, and sacrifice the mice 14 days later to detect the lymphatic fineness in the blood of mice. Cell and platelet levels of alanine aminotransferase (ALT) and glutamic oxaloacetic aminotransferase (AST) in the liver were measured; histological sections were stained with HE to observe the microscopic pathological changes of oncolytic adenovirus in various tissues and organs. Firstly, male mice were administered by intramuscular injection for 28 days in succession, and the time of administration was every other day. Female mice were administered by intramuscular injection for 14 days in succession after two weeks in male mice. After successful mating, the pregnant mice were divided into two parts. One part was euthanized 16 days after conception, then the fetus was removed, the viscera and skin were removed and stained to observe the bone changes. The teratogenic dosage regimen: female mice after mating were administered on the sixth day, once every other day, until the 14th day after conception; one was euthanized on the 16th day, fetal mice were taken out to observe the changes of embryonic skeletal structure; the other was born naturally for 30 days, and the growth and development were observed. Results In the acute toxicity test of mice, abdominal pain such as writhing occurred in mice, and the weight of mice in the experimental group increased faster than that of the control group, with statistical differences; in addition, in the experiment of mice anatomical discovery. The abdominal cavity of mice in group A showed blood ascites, and the liver showed subacute severe hepatitis. The liver tissue of mice in group A showed severe necrosis of liver tissue, and the normal structure of liver lobules was destroyed. There were no significant changes in the nest weight and placental weight of fetal mice between the middle and high dose groups. There was no significant difference in the length and tail length of fetal mice. The difference was found in the weight growth curve of mice, probably due to differences between individuals and in the weight of pregnant females. During the teratogenic test in mice, the differences in placenta and nest weight between the low, medium and high dose groups and the control group were compared. There was no statistically significant difference in fetal and tail lengths. During the development of the offspring, weight gain was statistically significant. However, from the growth curve of the mice, the difference was not significant, because the growth curves of the mice showed little difference between the groups, so Conclusion: The adenovirus-specific adenovirus of bladder tissue (ADPSCAE-UPII-E1AAR) (APU-E1A-AR) may have more severe hepatotoxicity in acute toxicity test, and the liver may be the target organ of oncolytic adenovirus. In the general reproductive toxicity test and teratogenic toxicity test in mice, there was no significant difference between the tissues. Therefore, it was considered that the oncolytic adenovirus we constructed had little effect on the reproductive system of mice and was a relatively safe swelling. Gene therapy biologics for tumors have less impact on fertility and teratogenesis in pregnant patients and health care workers responsible for cancer treatment
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.14

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何向東;王志平;;構(gòu)建溶瘤腺病毒的策略[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2007年01期

2 張培影;韓從輝;郝林;賀厚光;董秉政;范濤;貢震;胡建鵬;;表達(dá)金黃色葡萄球菌腸毒素A基因的條件增殖型溶瘤腺病毒的構(gòu)建[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2009年08期

3 范濤;郝林;賀厚光;梁清;董秉政;胡建鵬;韓從輝;;表達(dá)超抗原SEA基因的溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年15期

4 何婉婉;周立;劉濤;阮江星;何濱霞;李阿榮;王毅剛;;溶瘤腺病毒作為癌癥基因治療載體的研究進(jìn)展及安全性評(píng)價(jià)[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

5 周立;何婉婉;朱楨楠;楊遠(yuǎn)勤;趙紅芳;馬步云;王毅剛;;溶瘤腺病毒靶向癌癥治療的臨床研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年12期

6 晏陽(yáng);杜曉輝;李榮;;溶瘤腺病毒抗腫瘤策略研究進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年12期

7 周小龍;唐文如;;溶瘤腺病毒治療腫瘤的研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2014年03期

8 張金合;戴平;;溶瘤腺病毒的靶向性策略[J];生命的化學(xué);2006年01期

9 時(shí)輝;車(chē)國(guó)衛(wèi);;轉(zhuǎn)錄靶向性溶瘤腺病毒治療肺癌研究的現(xiàn)狀與思考[J];中華腫瘤防治雜志;2011年13期

10 譚曉華;;溶瘤腺病毒腫瘤靶向治療:從實(shí)驗(yàn)室到臨床[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2012年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王瑩;王云貴;金潔;錢(qián)其軍;錢(qián)文斌;;嵌合型溶瘤腺病毒對(duì)造血干細(xì)胞體外凈化作用的研究[A];2009年浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)血液病學(xué)術(shù)年會(huì)、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)血液病學(xué)術(shù)年會(huì)暨國(guó)家級(jí)中西醫(yī)結(jié)合血液病新進(jìn)展繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 曹暉;蘇長(zhǎng)青;譚淑萍;陳穎;錢(qián)其軍;;一種具有抗腫瘤活性的新型溶瘤腺病毒[A];2007年全國(guó)生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

3 浦穎艷;方琳;沈權(quán);孫麗君;胡小翠;王艷;曹祥榮;蘇長(zhǎng)青;;腫瘤特異性溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)的初步研究[A];江蘇省遺傳學(xué)會(huì)第七屆二次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

4 俞德超;;能在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生個(gè)性化腫瘤免疫反應(yīng)的重組溶瘤腺病毒[A];第九屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 方超;任臻;葉迅;陸瑾;劉芳;陳紅專;;攜帶HSP基因重組溶瘤腺病毒的腫瘤基因治療研究[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

6 毛晨宇;滕理送;曹江;;由hTERT和cox-2啟動(dòng)子調(diào)控的溶瘤腺病毒的構(gòu)建及抗瘤研究[A];第二屆中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)改革會(huì)議論文集[C];2008年

7 鄭駿年;劉曉昀;毛立軍;史震;劉俊杰;;表達(dá)IL-18的溶瘤腺病毒對(duì)裸鼠腎癌移植瘤生長(zhǎng)及血管形成抑制作用[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

8 劉彥群;;攜帶人IL-18基因的溶瘤腺病毒并研究其在A375細(xì)胞中IL-18基因的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 王華;李德川;陳貴平;趙陽(yáng);李方印;;E1A,E1B雙突變?nèi)芰鱿俨《続xdAdB-3聯(lián)合Gemcitabine治療腎癌的實(shí)驗(yàn)研究[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

10 王華;李德川;陳貴平;趙陽(yáng);鞠海星;李方印;;E1A,E1B雙突變?nèi)芰鱿俨《続xdAdB-3聯(lián)合Gemcitabine治療腎癌的實(shí)驗(yàn)研究[A];2008年浙江省泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 赫東蕓;表達(dá)新城疫病毒血凝素-神經(jīng)氨酸酶基因溶瘤腺病毒體內(nèi)、外抗腫瘤作用[D];吉林大學(xué);2015年

2 冉黎;腫瘤細(xì)胞來(lái)源的微顆粒攜帶溶瘤腺病毒殺傷腫瘤細(xì)胞初步探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 胡澤斌;溶瘤腺病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建及其功能研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

4 王芳;膀胱組織特異性溶瘤腺病毒在動(dòng)物體內(nèi)的生物分布及安全性評(píng)價(jià)[D];蘭州大學(xué);2013年

5 賀厚光;雙調(diào)控溶瘤腺病毒攜帶超抗原SEA基因治療前列腺癌基礎(chǔ)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

6 黃曉園;新型溶瘤腺病毒M1體內(nèi)應(yīng)用的效應(yīng)和安全性研究及靶向性輸送的探索[D];華中科技大學(xué);2007年

7 齊榮;攜帶XAF1的復(fù)制型溶瘤腺病毒治療惡性腫瘤的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

8 邱松波;攜帶hTRAIL的復(fù)制型溶瘤腺病毒治療惡性腫瘤的研究[D];武漢大學(xué);2004年

9 劉新建;攜帶mda-7/IL24的嵌合型溶瘤腺病毒對(duì)wnt信號(hào)異常腫瘤的靶向基因—病毒治療[D];上海交通大學(xué);2011年

10 韓志強(qiáng);選擇性封閉腫瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒M3的構(gòu)建及應(yīng)用[D];華中科技大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉品一;基因溶瘤腺病毒SG635-SF對(duì)卵巢癌的作用研究[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 石鑫;重組溶瘤腺病毒RCAdC68.pⅨ-EGFP的構(gòu)建及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響[D];蘇州大學(xué);2015年

3 李沖;膀胱癌特異性的嵌合型溶瘤腺病毒構(gòu)建及其療效初步評(píng)價(jià)[D];蘭州大學(xué);2016年

4 魯克慶;膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒的安全性評(píng)估[D];蘭州大學(xué);2016年

5 趙津;重組溶瘤腺病毒對(duì)人腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)、外抑制作用研究[D];長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué);2016年

6 周麗君;重組溶瘤腺病毒rAd-E1A-CDglyTK的構(gòu)建和體內(nèi)、外抑殺瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

7 楊耿兵;新型溶瘤腺病毒靶向治療惡性腫瘤的研究[D];浙江理工大學(xué);2011年

8 李仁舉;一氧化氮對(duì)膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒基因治療的作用[D];蘭州大學(xué);2011年

9 胡永超;溶瘤腺病毒治療實(shí)體瘤安全性及臨床療效的初步評(píng)價(jià)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

10 祁媚姣;超氧陰離子對(duì)膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒基因治療的作用[D];蘭州大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：2196006