【摘要】：目的： 甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年增加，甲狀腺乳頭狀癌（PTC）約占全部甲狀腺癌病理類型的80%。目前許多方法用于診斷甲狀腺癌包括血清甲狀腺激素測(cè)定，超聲診斷檢查，細(xì)針穿刺（FNA）等。在臨床實(shí)踐中，約20%的FNA細(xì)胞學(xué)報(bào)告顯示為“不確定性”或?yàn)V泡結(jié)節(jié)。因此，輔助診斷方法和分子診斷的方法成為術(shù)前鑒別的必要手段。并且甲狀腺是輻射敏感器官，輻射是目前唯一確定的甲狀腺癌危險(xiǎn)因素，輻射致甲狀腺癌的機(jī)制目前尚不清楚。本研究通過對(duì)大樣本基因芯片數(shù)據(jù)分析甲狀腺癌相關(guān)的基因，探討相關(guān)基因與甲狀腺癌病理過程之間的相關(guān)性以及影響甲狀腺癌輻射敏感的相關(guān)基因，尋找腫瘤診斷標(biāo)志物和影響甲狀腺癌病理進(jìn)程和輻射敏感的分子靶點(diǎn)。 方法： 本研究通過對(duì)499例甲狀腺癌組織基因芯片進(jìn)行分析，其中455例為甲狀腺乳頭狀癌，包括58對(duì)配對(duì)甲狀腺癌組織和正常組織樣本，篩選甲狀腺乳頭狀癌差異表達(dá)miRNA，利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)潛在靶基因的方法篩選差異表達(dá)基因，分析差異表達(dá)miRNA和基因與病理資料之間的關(guān)系，通過是否輻射暴露史對(duì)甲狀腺癌患者進(jìn)行分組，篩選甲狀腺癌患者中差異表達(dá)的miRNA，利用Real-timePCR方法將篩選出的差異表達(dá)基因在202例組織和214例外周血（腫瘤患者181例，健康對(duì)照33例）中進(jìn)行驗(yàn)證，并利用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)合適的腫瘤標(biāo)志物。 結(jié)果： 1.差異表達(dá)miRNA （1）hsa-miR-21在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，與腫瘤外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，殘余腫瘤相關(guān)（P＜0.05）， ROC曲線下面積AUC為0.859，靈敏度69.0%，特異度93.1%，約登指數(shù)0.621。 （2）hsa-miR-34a在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，與腫瘤的大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.944，靈敏度91.4%，特異度94.8%，約登指數(shù)0.862。 （3）hsa-miR-181a在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，與腫瘤外浸潤，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，輻射暴露史有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.845，靈敏度89.7%，特異度72.4%，約登指數(shù)0.621。 （4）hsa-miR-221在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，與腫瘤外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.961，靈敏度91.4%，特異度96.6%，約登指數(shù)0.880。 （5）hsa-miR-139在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)，與腫瘤外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，殘余腫瘤，復(fù)發(fā)有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.900，靈敏度82.8%，特異度82.8%，約登指數(shù)0.656。 （6）hsa-miR-144在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)，與腫瘤外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.924，靈敏度94.8%，特異度81.0%，約登指數(shù)0.758。 （7）hsa-miR-152在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)，與腫瘤外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.892，靈敏度86.2%，特異度91.2%，約登指數(shù)0.776。 （8）hsa-miR-199a在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)，與外部浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.861，靈敏度84.5%，特異度84.5%，約登指數(shù)0.690。 2.差異表達(dá)基因 （1）AGRN在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中高表達(dá)，與腫瘤外浸潤，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.911，靈敏度81.0%，特異度100.0%，約登指數(shù)0.81。 （2）GALNT7在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中高表達(dá)，與單雙側(cè)發(fā)病，甲狀腺外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.931，靈敏度91.4%，特異度98.3%，約登指數(shù)0.897。 （3）MGAT4B在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中高表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.955，靈敏度82.8%，特異度96.6%，約登指數(shù)0.794。 （4）RAB34在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中高表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.96，靈敏度84.5%，特異度96.6%，約登指數(shù)0.811。 （5）RAD23B在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中高表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.902，靈敏度86.2%，特異度96.6%，約登指數(shù)0.828。 （6）TMSB10在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中高表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.823，靈敏度75.9%，特異度91.4%，約登指數(shù)0.673。 （7）ANK3在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，單多灶，甲狀腺外浸潤，腫瘤大小，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.91，靈敏度91.4%，特異度91.4%，約登指數(shù)0.828。 （8）NR4A3在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與性別，存活，單雙側(cè)發(fā)病，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.753，靈敏度81.0%，特異度56.9%，約登指數(shù)0.379。 （9）CCDC85A在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.899，靈敏度75.9%，特異度94.8%，約登指數(shù)0.707。 （10）AXIN2在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與單雙側(cè)發(fā)病，單多灶發(fā)病，甲狀腺外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤大小有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.836，靈敏度70.7%，特異度91.4%，約登指數(shù)0.621。 （11）BCL2L11在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與腫瘤大小有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.956，靈敏度94.8%，特異度89.7%，約登指數(shù)0.845。 （12）MLLT3在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，單多灶，甲狀腺外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.952，靈敏度89.7%，特異度94.8%，約登指數(shù)0.845。 （13）FBXO30在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與單多灶，甲狀腺外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.876，靈敏度86.2%，特異度84.5%，約登指數(shù)0.707。 （14）PKIA在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與腫瘤復(fù)發(fā)，單多灶，甲狀腺外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.862，靈敏度75.9%，特異度85.7%，約登指數(shù)0.656。 （15）ARHGAP24在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.938，靈敏度87.9%，特異度較高94.8%，約登指數(shù)0.827。 （16）TBC1D4在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.966，靈敏度87.9%，特異度96.6%，約登指數(shù)0.845。 （17）BCL2在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與單雙側(cè)發(fā)病，腫瘤外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.942，靈敏度84.5%，特異度93.1%，約登指數(shù)0.776。 （18）TNFRSF11B在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.921，靈敏度84.5%，特異度93.1%，約登指數(shù)0.776。 （19）TNS1在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與單雙側(cè)發(fā)病，甲狀腺外浸潤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.916，靈敏度93.1%，特異度84.5%，約登指數(shù)0.776。 （20）MATN2在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與甲狀腺外浸潤，殘余腫瘤，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.963，靈敏度89.7%，特異度94.8%，約登指數(shù)0.845。 （21）FOS在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織中低表達(dá)，與甲狀腺外浸潤有關(guān)（P＜0.05），ROC曲線下面積AUC為0.805，靈敏度72.4%，特異度81%，約登指數(shù)0.534。 3. miRNA及靶基因預(yù)測(cè) 通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)以及miRNA和靶基因之間表達(dá)量的相關(guān)性分析，初步篩選出hsa-miR-21（靶基因：ARHGAP24和MATN2）；hsa-miR-34a （靶基因：ANK3，F(xiàn)BXO30，MLLT3和PLIA）；hsa-miR-181a（靶基因：TBC1D4和TNS1）；hsa-miR-221（靶基因：AXIN2和BCL2L11）；hsa-miR-139（靶基因：GALNT7）；hsa-miR-152（靶基因：TMSB10和RAB34）。 4.輻射敏感miRNA篩選 有輻射接觸史與無輻射接觸史的患者之間hsa-miR-146b、hsa-miR-181a、hsa-miR-181b、 hsa-miR-3065、 hsa-miR-342、 hsa-miR-34a、 hsa-miR-10a、hsa-miR-150、 hsa-miR-152、 hsa-miR-153、 hsa-miR-195、 hsa-miR-199a、hsa-miR-199b、 hsa-miR-214、 hsa-miR-215、 hsa-miR-3607、 hsa-miR-3652、hsa-miR-365差異表達(dá)，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。是否有輻射接觸史與甲狀腺癌病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，均無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。 5.Real-time PCR驗(yàn)證AXIN2在組織和外周血中的表達(dá) AXIN2在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤組織及外周血中均低表達(dá)（P＜0.05），組織和血液中AXIN2的表達(dá)不具有顯著的相關(guān)性（P=0.06），對(duì)外周血中AXIN2進(jìn)行ROC分析，曲線下面積為0.958，靈敏度90.7%，特異度93.6%，約登指數(shù)0.843。 6.組合標(biāo)志物篩選 檢測(cè)TP53INP1，TP53INP2和ITGA3在甲狀腺乳頭狀癌患者外周血的表達(dá)同時(shí)進(jìn)行ROC分析，TP53INP1高表達(dá)，TP53INP2高表達(dá)，ITGA3低表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TP53INP1曲線下面積為0.783，靈敏度75.4%，特異度73.1%，約登指數(shù)0.485， TP53INP2曲線下面積為0.864，靈敏度90.7%，特異度77.3%，約登指數(shù)0.680，ITGA3曲線下面積為0.881，其靈敏度96.5%，特異度77.3%，約登指數(shù)0.738，同時(shí)進(jìn)行組合標(biāo)志物ROC分析，AXIN2/TP53INP1曲線下面積0.991，靈敏度97.0%，特異度95.8%，約登指數(shù)0.928， TP53INP2/AXIN2曲線下面積0.969，靈敏度93.7%，特異度93.8%，約登指數(shù)0.875。 結(jié)論： 1、hsa-miR-21，hsa-miR-34a，hsa-miR-181a和hsa-miR-221在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，hsa-miR-139，hsa-miR-144，hsa-miR-152和hsa-miR-199a在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)，差異表達(dá)的miRNA均與臨床病理過程相關(guān)。 2、AGRN，GALNT7，MGAT4B，RAB34，RAD23B和TMSB10在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)， ANK3，NR4A3，CCDC85A，AXIN2，BCL2L11，MLLT3，F(xiàn)BXO30，PKIA，ARHGAP24，TBC1D4，BCL2，TNFRSF11B，TNS1，MATN2和FOS在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)，差異表達(dá)的基因均與臨床病理過程相關(guān)。 3、在甲狀腺癌中，hsa-miR-146b，hsa-miR-181a，hsa-miR-181b，hsa-miR-3065，hsa-miR-342，hsa-miR-34a，hsa-miR-10a，hsa-miR-150，hsa-miR-152，hsa-miR-153，hsa-miR-195， hsa-miR-199a， hsa-miR-199b， hsa-miR-214， hsa-miR-215，hsa-miR-3607，hsa-miR-3652和hsa-miR-365可能是輻射敏感miRNA。 4、hsa-miR-34a，hsa-miR-221，GALNT7和ANK3在甲狀腺乳頭狀癌中具有診斷價(jià)值。 5、在外周血中AXIN2，TP53INP1，TP53INP2和ITGA3差異表達(dá)。AXIN2，AXIN2/TP53INP1和TP53INP2/AXIN2的表達(dá)量對(duì)甲狀腺乳頭狀癌具有診斷價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R736.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2170000