【摘要】：口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)簡稱口腔癌,是頭頸部最常見的惡性腫瘤,可造成患者進(jìn)食、語言、呼吸等功能障礙及容貌、心理改變,晚期患者生存率低。局部復(fù)發(fā)和頸部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是其致死的主要原因。近年來,腫瘤微環(huán)境在口腔癌發(fā)生發(fā)展中的作用備受關(guān)注,腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages,TAMs)作為主要的基質(zhì)細(xì)胞,能誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchymal transition,EMT),與口腔癌進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。目的:分析CD68,CD163在口腔癌組織中的表達(dá)與患者臨床病理特征、預(yù)后及EMT的關(guān)系,探討TAMs誘導(dǎo)口腔癌細(xì)胞發(fā)生EMT促其侵襲轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制。方法:本研究首先通過免疫組化檢測127例口腔癌組織標(biāo)本中TAMs標(biāo)記物CD68、CD163及EMT相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)水平,統(tǒng)計分析其與口腔癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系;同時,通過體外誘導(dǎo)分化M1型和M2型巨噬細(xì)胞,采用實時定量PCR,免疫蛋白印跡技術(shù)和免疫熒光對其表型進(jìn)行鑒定;在此基礎(chǔ)上,構(gòu)建不同的炎癥微環(huán)境,分別刺激口腔癌細(xì)胞cal27,通過實時定量PCR,免疫蛋白印跡技術(shù)和免疫熒光、細(xì)胞侵襲和劃痕實驗等方法檢測了不同炎癥微環(huán)境對口腔癌細(xì)胞侵襲、增殖能力的影響以及EMT相關(guān)的標(biāo)記物表達(dá)水平,進(jìn)一步探討了 TAMs誘導(dǎo)口腔癌細(xì)胞發(fā)生EMT的機(jī)制。結(jié)果:CD68陽性巨噬細(xì)胞浸潤影響患者生存率,而CD163陽性巨噬細(xì)胞浸潤和口腔癌細(xì)胞高表達(dá)CD163均與患者的生存密切相關(guān),是重要的獨立預(yù)后因子。我們發(fā)現(xiàn)CD68和CD163不僅在巨噬細(xì)胞中表達(dá),在口腔癌細(xì)胞中亦有表達(dá),并且口腔癌細(xì)胞表達(dá)CD163與EMT標(biāo)記物E-cadherin和vimentin顯著相關(guān),提示TAMs與口腔癌EMT密切相關(guān)。通過體外實驗經(jīng)GM-CSF刺激后巨噬細(xì)胞CD68表達(dá)升高,M-CSF刺激后巨噬細(xì)胞CD163,CD206,IL10表達(dá)上升,成功誘導(dǎo)分化獲得M1型和M2型巨噬細(xì)胞。分別收集其條件培養(yǎng)基刺激口腔癌細(xì)胞cal27發(fā)現(xiàn),M2型條件培養(yǎng)基能誘導(dǎo)cal27發(fā)生EMT,侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。而分別加入TGF-β細(xì)胞因子后,M1型+TGF-β具有誘導(dǎo)cal27發(fā)生EMT,促其侵襲轉(zhuǎn)移的能力;但是M2型+TGF-β則使cal27發(fā)生EMT的能力減弱,侵襲能力下降。相反,兩組條件培養(yǎng)基中加入TGF-β抑制劑后,cal27發(fā)生EMT和侵襲轉(zhuǎn)移能力均下降。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn),TAMs與口腔癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān),其可能的機(jī)制為TAMs可誘導(dǎo)口腔癌細(xì)胞發(fā)生EMT而促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移,TGF-β在其中可能發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
[Abstract]:Oral squamous cell carcinoma (oral squamous cell carcinomas) is the most common malignant tumor in head and neck. Local recurrence and cervical lymph node and distant metastasis were the main causes of death. In recent years, the role of tumor microenvironment in the occurrence and development of oral cancer has attracted much attention. As the main stromal cells, tumor-associated macrophages can induce the transition of epithelial stroma into (epithelial to mesenchymal, which is closely related to the progression and prognosis of oral cancer. Objective: to investigate the relationship between the expression of CD68 and CD163 and clinicopathological features, prognosis and EMT in oral cancer cells, and to explore the possible mechanism of EMT induced invasion and metastasis of oral cancer cells induced by TAMs. Methods: in this study, the expression of TAMs markers CD68, CD163 and EMT related markers were detected by immunohistochemistry in 127 cases of oral carcinoma, and the relationship between CD68 and CD163 and clinicopathological features and prognosis of oral carcinoma was analyzed statistically. The phenotypes of M 1 and M 2 macrophages were identified by real-time quantitative PCR, Western blot and immunofluorescence, and different inflammatory microenvironments were constructed on the basis of in vitro induction and differentiation of M 1 and M 2 macrophages. Oral cancer cell cal27 was stimulated by real-time quantitative PCR, Western blot, immunofluorescence, cell invasion and scratch test. The invasion of oral cancer cells was detected by different inflammatory microenvironments. The effect of TAMs on proliferation and the expression level of EMT related markers further explored the mechanism of EMT induced by TAMs. Results the survival rate of patients was affected by the infiltration of macrophages positive to CD68, while that of CD163 positive macrophages and high expression of CD163 in oral cancer cells were closely related to the survival of the patients, which was an important independent prognostic factor. We found that CD68 and CD163 were expressed not only in macrophages, but also in oral cancer cells. The expression of CD163 in oral cancer cells was significantly correlated with EMT markers E-cadherin and vimentin, suggesting that TAMs was closely related to EMT. The expression of CD68 in macrophages was increased after GM-CSF stimulation in vitro. After stimulation with M-CSF, the expression of CD163, CD206 and IL-10 in macrophages was increased, and M1 and M2 macrophages were successfully induced to differentiate into M 1 and M 2 type macrophages. The conditioned medium was collected to stimulate oral cancer cell cal27. It was found that M 2 conditioned medium could induce cal27 to develop EMTs and enhance the ability of invasion and metastasis. TGF- 尾 can induce the invasion and metastasis of cal27, but M2 TGF- 尾 can weaken the ability of cal27 to produce EMT and decrease the ability of invasiveness. On the contrary, TGF- 尾 inhibitor decreased the ability of EMT and invasion and metastasis in both groups. Conclusion: Tams are closely related to the occurrence, development and prognosis of oral cancer. The possible mechanism of TGF- 尾 may be that TAMs can induce the occurrence of EMT and promote the invasion and metastasis of oral cancer cells. TGF- 尾 may play a key role in this study.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8

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本文編號：2155899