【摘要】：目的:確定小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1抗原致敏的樹突狀細(xì)胞(DC)疫苗,在體內(nèi)外抗腫瘤免疫的效應(yīng);探討吲哚-2,3-雙加氧酶(IDO)化學(xué)抑制劑左旋-1-甲基色氨酸(L-1-MT)聯(lián)合DC疫苗治療對(duì)荷乳腺癌小鼠腫瘤引流淋巴結(jié)(TDLN)中IDO表達(dá)水平的抑制程度及其增強(qiáng)荷瘤小鼠腫瘤免疫應(yīng)答的機(jī)制。方法:1、體外培養(yǎng)BALB/c小鼠骨髓來(lái)源的DC,用小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1凍融抗原致敏來(lái)制備腫瘤特異性DC疫苗。流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC成熟表型;混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測(cè)DC刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力;以4T1為靶細(xì)胞,DC致敏的T細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)體外特異性殺瘤效應(yīng)。2、雌性BALB/c小鼠于第四脂肪墊下接種乳腺癌細(xì)胞4T1 1×105 cell/只建立荷瘤小鼠模型。荷瘤小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組,DC疫苗組,L-1-MT組,L-1-MT聯(lián)合DC疫苗組,分別給予生理鹽水、DC疫苗、L-1-MT、L-1-MT聯(lián)合DC疫苗治療。測(cè)量腫瘤大小,描繪腫瘤生長(zhǎng)曲線;于接種后第21d處死小鼠,取各組小鼠腫瘤組織,TDLN及脾臟;稱取腫瘤重量;Western blot測(cè)定TDLN中IDO表達(dá)水平,流式細(xì)胞儀檢測(cè)TDLN及脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例;MTT比色法檢測(cè)荷瘤小鼠體內(nèi)T淋巴細(xì)胞特異性細(xì)胞毒作用。結(jié)果:1、4T1凍融抗原致敏的DC(4T1-DC)組表面共刺激分子CD40,CD80,CD86的表達(dá)明顯高于未致敏DC(DC)組(P0.01);4T1-DC具有更強(qiáng)的刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力,在刺激細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞比例為1∶10時(shí)的刺激指數(shù)最高,4T1-DC組、DC組分別為8.45±0.24、6.56±0.29(P0.01);在效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞比值為40∶1和20∶1時(shí),4T1-DC組致敏的CTL體外特異性殺瘤效應(yīng)均高于DC組分別為35.03±1.01、27.02±1.33和31.00±1.06、23.96±1.06(P0.01)。2、接種乳腺癌細(xì)胞4T1后的腫瘤生長(zhǎng)曲線顯示:L-1-MT聯(lián)合DC疫苗組腫瘤生長(zhǎng)速度最慢;第21天時(shí)的腫瘤體積和重量均為CON組DC疫苗組L-1-MT組L-1-MT+DC組(P0.05)。L-1-MT+DC聯(lián)合治療組與CON組相比,抑瘤率為43%。3、Western blot檢測(cè)各組TDLN中IDO相對(duì)表達(dá)量及流式細(xì)胞儀測(cè)定的TDLN與脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的比例均為DC疫苗組CON組L-1-MT+DC組L-1-MT組(P0.05)。結(jié)論:1.應(yīng)用DC疫苗治療的荷乳腺癌小鼠TDLN中IDO表達(dá)明顯增高,且TDLN及脾臟CD4+CD25+Foxp3+Tregs的數(shù)量增多,這可能是影響乳腺癌免疫治療效果的重要因素之一。2.L-1-MT可有效抑制荷乳腺癌小鼠體內(nèi)IDO蛋白的表達(dá),同時(shí)可以下調(diào)小鼠TDLN及脾臟內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Tregs的數(shù)量,從而增強(qiáng)DC疫苗抗腫瘤效應(yīng)有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。
[Abstract]:Objective: to determine the antitumor effect of dendritic cell (DC) vaccine sensitized by mouse breast cancer cell 4T1 antigen in vitro and in vivo. Objective: to investigate the inhibitory effect of indole 2n 3-dioxygenase (IDO) inhibitor levo-1-methyltryptophan (L-1-MT) combined with DC vaccine on the expression of IDO in tumor drainage lymph nodes (TDLN) of mice bearing breast cancer and the mechanism of enhancing tumor immune response in tumor-bearing mice. Methods the DC derived from bone marrow of BALB/c mice was cultured in vitro and sensitized with 4T1 freeze-thawed antigen to prepare tumor specific DC vaccine. The mature phenotype of DC was detected by flow cytometry and the proliferation ability of T lymphocytes stimulated by DC was detected by mixed lymphocyte reaction (MLR). The specific tumor killing effect of cytotoxic T lymphocyte (CTL) was detected by using T cells sensitized by 4T1 as target cells and DC as effector in vitro. Female BALB/c mice were inoculated with breast cancer cell 4T1 1 脳 10 ~ 5 cell/ under the fourth fat pad to establish tumor bearing mice model. Tumor-bearing mice were randomly divided into two groups: control group, L-1-MT combined with DC vaccine group, and treated with normal saline DC vaccine L-1-MTTL-1-MT combined with DC vaccine respectively. The tumor size was measured, the tumor growth curve was depicted, the mice were killed on the 21st day after inoculation, the tumor tissues and spleen of each group were taken, and the expression of IDO in TDLN was measured by Western blot. The specific cytotoxicity of T lymphocytes in tumor-bearing mice was detected by flow cytometry (FCM), TDLN and CD4 CD25 Foxp3 Tregs ratio in spleen. Results the expression of CD40, CD80, CD80, CD86, a costimulatory molecule in DC (4T1-DC) group, was significantly higher than that in unsensitized DC (DC) group (P0.01). When the ratio of stimulating cells to effector cells was 1:10, the stimulation index was 8.45 鹵0.24 鹵6.56 鹵0.29 (P0.01) in the DC group, and the specific killing effect of CTL in vitro was higher in the ratio of effector cells to target cells at 40:1 and 20:1. The tumor growth curves of DC group were 35.03 鹵1.01v 27.02 鹵1.33 and 31.00 鹵1.060.96 鹵1.06 (P0.01) .2.The tumor growth curve after 4T1 inoculation showed that the tumor growth rate was the slowest in the DC vaccine group. On the 21st day, the tumor volume and weight were as follows: CON group, DC vaccine group, L-1-MT DC group (P0.05). L-1-MT DC combined treatment group compared with CON group. The relative expression of IDO in TDLN and the ratio of TDLN to CD4 CD25 Foxp3 Tregs in spleen measured by flow cytometry were all as follows: CON vaccine group, L-1-MT DC group, L-1-MT group (P0.05). Conclusion 1. The expression of IDO in TDLN of breast cancer bearing mice treated with DC vaccine was significantly increased, and the number of TDLN and CD4 CD25 Foxp3 Tregs in spleen was increased. This may be one of the important factors affecting the immunotherapy effect of breast cancer. 2.L-1-MT can effectively inhibit the expression of IDO protein in breast cancer bearing mice, and can down-regulate the number of TDLN and CD4 CD25 Foxp3 Tregs in spleen of mice. In order to enhance the anti-tumor effect of DC vaccine, effectively inhibit tumor growth.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2143736