【摘要】：目的:研究染料木素衍生物WH-20對(duì)人MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響,并且初步探討其機(jī)制研究,為抗乳腺癌新藥研究提供新思路。方法:1.MTT法檢測(cè)染料木素衍生物WH-20對(duì)體外培養(yǎng)人MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖抑制的量效性和時(shí)效性、經(jīng)Notch阻斷劑(DAPT)、ERa阻斷劑(MMP)和ERβ阻斷劑(PHTPP)干擾后染料木素衍生物WH-20處理的MCF-7細(xì)胞的增殖影響;平板克隆檢測(cè)WH-20對(duì)人MCF-7乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WH-20對(duì)人MCF-7乳腺癌細(xì)胞周期的影響。2.采用基質(zhì)膠黏附實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度WH-20對(duì)細(xì)胞的遷移和侵襲的影響;以及經(jīng)Notch阻斷劑(DAPT)、ERa阻斷劑(MMP)和ERβ阻斷劑(PHTPP)干擾后染料木素衍生物WH-20處理的MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲的影響。3.Western Blot檢測(cè)不同濃度的WH-20對(duì)MCF-7細(xì)胞中周期蛋白Cyclin D1、遷移侵襲相關(guān)蛋白MMP9和VEGF的蛋白、ERa和ERβ以及Notch信號(hào)相關(guān)蛋白Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa的蛋白表達(dá);以及經(jīng)Notch阻斷劑(DAPT)、ERa阻斷劑(MMP)和ERβ阻斷劑(PHTPP)干擾后WH-20對(duì)MCF-7細(xì)胞ERa,ERβ,Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)。4.Autodock軟件分析WH-20對(duì)ERa和ERβ蛋白結(jié)合能力。結(jié)果:1.人MCF-7乳腺癌細(xì)胞經(jīng)10、20、40mM的WH-20處理后均能夠抑制細(xì)胞的增殖,且隨著時(shí)間的增加顯示時(shí)間依賴性,能夠使細(xì)胞周期從G1期進(jìn)入S期受到阻滯,且能夠抑制細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1的表達(dá)。2.濃度為10、20、40mM的WH-20能夠抑制MCF-7乳腺癌細(xì)胞基質(zhì)黏附、遷移和侵襲,降低MMP9和VEGF蛋白的表達(dá)。3.WH-20能夠降低Notch信號(hào)通路相關(guān)蛋白Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa的表達(dá)。加入Notch阻斷劑(DAPT)后能夠加強(qiáng)WH-20對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、基質(zhì)黏附、遷移和侵襲抑制作用,且Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)抑制作用加強(qiáng)。4.Autodock軟件分析打分?jǐn)?shù)均大于4成功模擬WH-20與ERa和ERβ蛋白結(jié)合能力,打分?jǐn)?shù)分別為7.19和6.21。WH-20能夠增加ERa和ERβ蛋白的表達(dá)。加入ERa阻斷劑(MPP)后能夠加強(qiáng)WH-20對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、基質(zhì)黏附、遷移和侵襲抑制作用,且ERa,Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)抑制作用加強(qiáng);加入ERβ阻斷劑(PHTPP)后夠減弱WH-20對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、基質(zhì)黏附、遷移和侵襲抑制作用,且ERβ,Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)抑制作用減弱結(jié)論:WH-20能夠抑制人MCF-7細(xì)胞增殖和遷移侵襲,主要分子機(jī)制是通過(guò)激活ERβ受體,抑制Notch信號(hào)相關(guān)蛋白表達(dá),從而抑制與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)的Cyclin D1表達(dá),遷移侵襲有關(guān)的MMP9和VEGF的表達(dá);WH-20通過(guò)與ERβ結(jié)合調(diào)控Notch信號(hào)抑制人MCF-7腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移侵襲。
[Abstract]:Objective : To study the effects of genistein on proliferation , migration and invasion of MCF - 7 breast cancer cells . Conclusion : WH - 20 can inhibit the proliferation and migration of human MCF - 7 cells . The main molecular mechanism is to inhibit the proliferation and migration of human MCF - 7 cells . The main molecular mechanism is to inhibit the expression of cyclin D1 related to tumor cell growth and the expression of VEGF . WH - 20 can inhibit the proliferation and migration of human MCF - 7 tumor cells by regulating Notch signaling with ER尾 .
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2135790