【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)利用RNA干擾技術(shù),以乳腺癌細(xì)胞為研究對(duì)象,下調(diào)乳腺癌細(xì)胞系中的基因CCR7的表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響,并行蛋白質(zhì)譜檢測(cè),研究沉默CCR7后哪些蛋白和信號(hào)分子參與CCR7的調(diào)控作用,對(duì)探討CCR7與乳腺癌轉(zhuǎn)移的內(nèi)在機(jī)制,發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)具有積極的意義。方法:1、常規(guī)培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1、HCC1806、HCC1937、HCC1580、MCF10A,用q-PCR和Westen blot實(shí)驗(yàn)篩選出高表達(dá)CCR7的乳腺癌細(xì)胞系。2、對(duì)篩選出來(lái)的乳腺癌細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染,提取實(shí)驗(yàn)組(CCR7-siRNA)和對(duì)照組的總RNA和總蛋白,用q-PCR和Western blot檢測(cè)干擾效果。3、利用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了siCCR7轉(zhuǎn)染對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移的影響。4、通過(guò)蛋白質(zhì)譜結(jié)果篩選出差異表達(dá)蛋白,并用q-PCR驗(yàn)證參與CCR7的調(diào)控作用關(guān)鍵蛋白。結(jié)果:1、高表達(dá)CCR7的乳腺癌細(xì)胞系的篩選q-PCR結(jié)果顯示:人乳腺癌細(xì)胞株T47D、HCC1500、SK-RB-3、BT474、MCF7的CCR7的mRNA表達(dá)水平較其他乳腺癌細(xì)胞株高。高表達(dá)CCR7的乳腺癌細(xì)胞系的篩選Western blot結(jié)果顯示:CCR7在小鼠乳腺癌細(xì)胞株4T1-Luc、人乳腺癌細(xì)胞株T74D、MCF7中高表達(dá),在部分乳腺癌細(xì)胞株中如MB231、MB468、HCC1937中有較高水平的表達(dá)。但是在正常乳腺細(xì)胞株如184B5、184A1和MCF10A中幾乎無(wú)CCR7表達(dá)。最后我們選取MCF7及T47D乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。2、T47D、MCF7細(xì)胞在經(jīng)過(guò)siRNA處理后,通過(guò)q-PCR檢測(cè)對(duì)T47D、MCF7乳腺癌細(xì)胞的沉默效應(yīng),結(jié)果顯示CCR7-siRNA 1#和CCR7-siRNA 2#能非常有效地抑制T47D、MCF7細(xì)胞中內(nèi)源性CCR7的mRNA水平的表達(dá)。Western blot得到相似的結(jié)果。3、劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明,與shLacZ組比,shCCR7C組和shCCR7D組乳腺癌細(xì)胞遷移能力變?nèi)酢?、通過(guò)蛋白質(zhì)譜結(jié)果篩選出差異表達(dá)蛋白如下:EPHA2、PVR、SQSTM1、ANXA6、PTRF、ALDH3A2、EPCAM。并用q-PCR方法及Western blot方法驗(yàn)證沉默CCR7后ALDH3A2和PTRF可能參與CCR7的調(diào)控作用。結(jié)論:(一)CCR7在不同的乳腺癌細(xì)胞株的表達(dá)量有所不同,在惡性程度較高的細(xì)胞中表達(dá)量更高,說(shuō)明可能CCR7的表達(dá)水平的高低與乳腺癌轉(zhuǎn)移的惡性程度有一定相關(guān)性。(二)敲低CCR7后抑制了乳腺癌細(xì)胞的遷移,引起了 ALDH3A2及PTRF的降低。(三)干擾CCR7抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移可能通過(guò)下調(diào)ALDH3A2和PTRF的表達(dá)實(shí)現(xiàn),這需要進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective: to down-regulate the expression of CCR7 gene in breast cancer cell line by RNA interference technique, and to detect the expression of CCR7 gene in breast cancer cell line, and to detect the expression of CCR7 in breast cancer cell line. The study of which proteins and signaling molecules involved in CCR7 regulation after CCR7 silencing has positive significance in exploring the intrinsic mechanism of CCR7 and breast cancer metastasis and finding new diagnostic markers and therapeutic targets. Methods the breast cancer cell line MDA-MB-231T 1-lucus MDA-MB-361MDA-MB-468 MDA-MB-468 MCF-7MCF10An1848B554A1806 HCC1937HCC1580MCF10A was screened by q-PCR and Westen blot assay. The breast cancer cell line with high expression of CCR7 was screened by q-PCR and Westen blot. The total RNA and total protein of the experimental group (CCR7-siRNA) and the control group were extracted from the breast cancer cell line MDA-MB-361MDA-MB-468, the total RNA and total protein of the experimental group (CCR7-siRNA) and the control group were extracted. The interference effect was detected by q-PCR and Western blot. The effect of siCCR7 transfection on the migration of breast cancer cells was detected by scratch test and transwell chamber migration assay. The differentially expressed proteins were screened by protein analysis. The key proteins involved in the regulation of CCR7 were verified by q-PCR. Results the screening of breast cancer cell lines with high expression of CCR7 by q-PCR showed that the expression level of CCR7 mRNA in human breast cancer cell line T47DHCC1500 SK-RB-3 BT474 MCF7 was higher than that in other breast cancer cell lines. The screening of breast cancer cell lines with high expression of CCR7 by Western blot showed that the high expression level was found in mouse breast cancer cell line 4T1-Lucand human breast cancer cell line T74DnMCF7, and in some breast cancer cell lines such as MB231M468HCC1937. But there was almost no CCR 7 expression in normal mammary gland cell lines such as 184 B 5, 184 A1 and MCF10 A. Finally, we selected MCF7 and T47D breast cancer cells for further experiment. After siRNA treatment, we detected the silencing effect of MCF7 cells on T47D- MCF7 cells by q-PCR. The results showed that CCR7-siRNA 1# and CCR7-siRNA 2# could effectively inhibit the expression of endogenous CCR7 mRNA in T47D- MCF7 cells. Western blot obtained similar results. Compared with shLacZ group, the migration ability of breast cancer cells in shCCR7C and shCCR7D groups was weaker than that in shLacZ group. The differentially expressed proteins were as follows: EPHA2, PVR, SQSTM1, ANXA6, PTRFV, ALDH3A2, EPCAM. Q-PCR and Western blot methods were used to verify that ALDH3A2 and PTRF might be involved in the regulation of CCR7 after CCR7 silencing. Conclusion: (1) the expression of CCR7 in different breast cancer cell lines is different, and the expression level is higher in the cells with higher malignant degree, which suggests that the level of CCR7 expression may be related to the malignant degree of breast cancer metastasis. (2) knocking down CCR7 inhibited the migration of breast cancer cells, and caused the decrease of ALDH3A2 and PTRF. (3) inhibiting the migration of breast cancer cells by CCR7 may be achieved by down-regulating the expression of ALDH3A2 and PTRF, which needs further study.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;鈣粘素E水平低提示乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[J];中國(guó)腫瘤;2000年08期

2 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

3 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

4 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

5 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

6 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

7 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

8 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

9 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

10 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 劉愛(ài)國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國(guó)婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個(gè)時(shí)期不一樣[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

9 王樂(lè)　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王楊丹;趨化因子受體CCR7在乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的機(jī)制探討[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2017年

2 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

3 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 吳坤琳;TLR4/MyD88信號(hào)通路對(duì)乳腺癌侵襲性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

6 葛廣哲;樹(shù)，

本文編號(hào)：2132163